凝膠色譜法測定注射用鹽酸頭孢吡肟中的高分子雜質(zhì)

1、凝膠色譜法測定注射用鹽酸頭孢吡肟中的高分子雜質(zhì)    【摘要】 目的 建立測定注射用鹽酸頭孢吡肟中高分子雜質(zhì)(頭孢吡肟聚合物)的方法。方法 采用分子排阻凝膠色譜自身對照外標(biāo)法進(jìn)行定量，用葡聚糖凝膠G10(40120 m)為填料，流動相A為0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液(pH=7.0)，流動相B為超純水，流速為1.0 mL/min, 檢測波長為254 nm。結(jié)果 注射用鹽酸頭孢吡肟的高分子雜質(zhì)含量均小于0.5。結(jié)論 本法快速、簡便，可用于注射用鹽酸頭孢吡肟高

2、分子雜質(zhì)的質(zhì)量控制?！娟P(guān)鍵詞】 鹽酸頭孢吡肟 凝膠色譜法 高分子雜質(zhì)Abstract:Objective To establish a method for determining high molecular weight impurities in cefepime hydrochloride injection. Methods Quantification of high

3、0;molecular weight impurities in cefepime hydrochloride injection was determined by Sephadex G10 column chromatography with external standard method. The mobile phase consisted of 0.1&#

4、160;molL phosphate buffer(pH7.0) and supper pure waterThe flow rate was 1.0 mLmin and detection wavelength 254 nm. Results The content of high molecular weight impurities in&#

5、160;different batches of cefepime hydrochloride injection was less than 0.5Conclusion This method was sensitive and accurate for determining high molecular weight impurities in cefepime

6、 hydrochloride injection.Key words: cefepime hydrochloride; sephadex G-10; high molecular weight impurities注射用鹽酸頭孢吡肟（cefepime hydrochloride）是20世紀(jì)90年代上市的第四代頭孢菌素，本品抗菌譜廣，藥效強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)研究表明，控制產(chǎn)品中高分子雜質(zhì)是減少-內(nèi)酰胺類抗生素過敏反應(yīng)的重要途徑之一 1。中國藥典2005年版采用凝膠色譜自身對照外標(biāo)

7、法定量測定內(nèi)酰胺類抗生素中的聚合物，而鹽酸頭孢吡肟不能完全締合，無法采用“自身”對照外標(biāo)法定量，根據(jù)中國藥典2005年版二部阿莫西林聚合物檢驗(yàn)方法，可以用結(jié)構(gòu)與研制產(chǎn)品類似，且能夠完全締合的其他藥物制備對照品，進(jìn)行自身對照外標(biāo)法定量2-3。本文用與頭孢吡肟結(jié)構(gòu)及分子量相近的頭孢噻肟作對照品，建立了測定注射用鹽酸頭孢吡肟中高分子雜質(zhì)(頭孢吡肟聚合物)的方法。1 儀器與試藥1.1 儀器 DHLA電腦恒流泵(上海瀘西分析儀器廠)，UVD6802紫外檢測儀(上海金達(dá)生化儀器廠)，HW2000色譜工作站(南京色譜軟件有限公司)。1.2 試藥 頭孢噻肟對照

8、品(批號130483-200102，中國藥品生物制品檢定所)；注射用鹽酸頭孢吡肟(批號060330、060731、060830，廣州白云山天心藥業(yè)股份有限公司)。 磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸、氫氧化鈉均為分析純；水為二次重蒸餾水；葡聚糖凝膠(Sephadex)G10和藍(lán)色葡聚糖2000為Amersham Bioscience公司產(chǎn)品。2 方法與結(jié)果2.1 色譜條件 色譜柱為玻璃色譜柱（40 m×1.5 cm），內(nèi)填Sephadex G10凝膠；流動相A為pH7.0的0.1 mol/L磷酸鹽緩沖

9、液(取磷酸氫二鈉21.85 g和磷酸二氫鈉6.08 g，加水1 000 mL，調(diào)pH值為7.0)，流動相B為超純水；流速為1.0 mL/min；檢測波長為254 nm。2.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)4 分別以流動相A、B為流動相，取0.1 mg/mL藍(lán)色葡聚糖2000溶液200 L注入色譜儀，理論塔板數(shù)按藍(lán)色葡聚糖2000峰計(jì)算分別為1 968、1 639，拖尾因子分別為1.7、1.1，在兩種流動相系統(tǒng)中藍(lán)色葡聚糖2000保留時間的比值為1.01，對照溶液主峰和供試品溶液中聚合物與相

10、應(yīng)色譜系統(tǒng)中藍(lán)色葡聚糖2000峰的保留時間的比值都在0.931.07之間，另以流動相B為流動相，精密量取對照溶液200 L，連續(xù)進(jìn)樣5次，峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.35。2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 取頭孢噻肟對照品約0.25 g置50 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取該溶液0.5、2.0、4.0、6.0、8.0 mL分別置10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。分別取上述溶液各200 L，記錄色譜圖，以質(zhì)量濃度()為橫坐標(biāo)， 峰面積（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：=8.714×

11、106A+31788(n=5,r=0.9998)。實(shí)驗(yàn)表明，在0.0250.4 mg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。2.4 精密度和穩(wěn)定性試驗(yàn) 配制每1 mL含100 g的頭孢噻肟對照溶液，精密量取200 L注入色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，計(jì)算峰面積的RSD為0.35。將測定溶液放置1、2、4 h，分別測定峰面積，計(jì)算峰面積的RSD為0.27。2.5 檢測靈敏度試驗(yàn) 取頭孢噻肟對照品適量，精密稱定，用水稀釋制成一系列濃度的溶液，精密量取上述溶液200 L注入色譜儀，以流動相B為流動相進(jìn)行測定

12、，記錄色譜圖。最小檢測限(S/N3)為0.025 mg/mL，最小定量限(S/N10)為0.076 mg/mL。2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號樣品依法重復(fù)測定6次，得高分子雜質(zhì)含量分別為0.09，0.1，0.1，0.1，0.1，0.1，RSD為4.15。實(shí)驗(yàn)表明方法的重復(fù)性良好。2.7 樣品的測定 取頭孢噻肟對照品適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含0.2 mg的對照溶液。取供試品適量約相當(dāng)于頭孢吡肟0.2 g ，精密稱定，置10 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，立

13、即精密量取200 L注入色譜儀，以流動相A為流動相進(jìn)行測定，記錄色譜圖，見圖1。另精密量取對照溶液200 L注入色譜儀，以流動相B為流動相，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，含頭孢吡肟聚合物以頭孢吡肟計(jì)算(頭孢噻肟:頭孢吡肟1.00.94)，3個批號（060330、060731、060830）的樣品測定結(jié)果分別為0.3%、0.2%和0.1%。圖1 注射用鹽酸頭孢吡肟高分子雜質(zhì)檢查圖譜（略）Fig.1 Chromatograms of high molecular weight impurities in cefepime hydrochloride injection 3 討 高分子雜質(zhì)會隨樣品放置時間的延長而增加，而高分子雜質(zhì)是引起內(nèi)酰胺類抗生素過敏反應(yīng)的主要原因之一，故有必要對其進(jìn)行檢測。中國藥典2005年版標(biāo)準(zhǔn)增強(qiáng)了對高分子雜質(zhì)檢測的要求。本方法按照中國藥典2005年版標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行研究檢測，經(jīng)試驗(yàn)結(jié)果表明，本方法靈敏、準(zhǔn)確、簡便，可用于注射用鹽酸頭孢吡肟的質(zhì)量控制?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1 李哲媛，李玉鳳，范兵. 阿莫西林中高分子雜質(zhì)的測定與質(zhì)量分析J. 中國現(xiàn)代