小麥花藥培養(yǎng)創(chuàng)建DH群體本科畢業(yè)論文

1、. . . . 農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文論文題目 小麥花藥培養(yǎng)創(chuàng)建DH群體 學(xué)生 學(xué)號(hào) 成績(jī) 93 學(xué)院 農(nóng)學(xué)院 專業(yè)班級(jí)指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師職稱 教授 材料目錄：1、任務(wù)書(shū) （ 1 ）份2、開(kāi)題報(bào)告 （含文獻(xiàn)綜述） （ 1 ）份3、指導(dǎo)教師評(píng)閱書(shū) （ 1 ）份4、答辯記錄表 （ 1 ）份5、論文正文 （ 1 ）份6、其它材料農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文任務(wù)書(shū)學(xué) 院： 農(nóng)學(xué)院 教師： 桂茹 職 稱： 教授 年 月 日專業(yè)名稱農(nóng)學(xué)院，農(nóng)學(xué)專業(yè)論文題目小麥花藥培養(yǎng)創(chuàng)建DH群體題目來(lái)源通過(guò)前人在實(shí)驗(yàn)室利用花藥培養(yǎng)的研究成果目的意義：?jiǎn)伪扼w植物在作物育種、遺傳分析、基因克隆等領(lǐng)域已得到廣泛應(yīng)用，創(chuàng)建單倍體植物的方法有

2、很多種，而用花藥培養(yǎng)技術(shù)是創(chuàng)建小麥單倍體行之有效的方法。小麥?zhǔn)俏覈?guó)主要糧食作物之一，花藥培養(yǎng)技術(shù)對(duì)小麥育種具有突出優(yōu)點(diǎn)，純合速度快，后代穩(wěn)定性好，從而縮短育種年限，提高選擇的準(zhǔn)確性與可靠性，花藥培養(yǎng)的單倍體群體通過(guò)加倍得到的純合體植株群體即為DH群體（doubled haploid）。DH 群體為永久性群體, 不僅可獲得常規(guī)育種難以或無(wú)法得到的新類型，更廣泛用于基因圖譜構(gòu)建、分子標(biāo)記等遺傳學(xué)研究， 在構(gòu)建遺傳連鎖圖與QTL分析上有著突出優(yōu)勢(shì),因?yàn)槿后w中每個(gè)個(gè)體在遺傳上都是純合的,非常適于連續(xù)性資料積累。同時(shí)，通過(guò)選擇綜合性狀優(yōu)良的品系還可培育出小麥新品種。本研究意在用花藥培養(yǎng)技術(shù)創(chuàng)建小麥DH群

3、體?？尚行苑治觯涸囼?yàn)查閱了大量的參考文獻(xiàn)，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)合理，預(yù)期結(jié)果明確，所在課題組現(xiàn)已搜集了大量的種質(zhì)資源，并進(jìn)行了基礎(chǔ)研究。所在作物遺傳育種實(shí)驗(yàn)室具備良好的實(shí)驗(yàn)室條件和試驗(yàn)所需的儀器設(shè)備條件如低溫培養(yǎng)箱，恒溫培養(yǎng)箱等實(shí)驗(yàn)儀器，能確保本試驗(yàn)有序進(jìn)行。預(yù)期結(jié)果：（1） 能通過(guò)小麥花藥培養(yǎng)創(chuàng)建DH群體可能存在的問(wèn)題：（1） 由于培養(yǎng)環(huán)境和基因型差異，花培過(guò)程中白化現(xiàn)象可能嚴(yán)重。28 / 28（2） 單倍體植株自然加倍可能丟失部分優(yōu)良單株。進(jìn)度安排：2012年2月-3月：選題，查閱文獻(xiàn)資料; 3月-4月：確定方案;2012年5月：收集實(shí)驗(yàn)資料，在農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)室接種花藥；6月-9月：花藥的脫分化，再分化

4、，壯苗；10月-11月：分批移栽；2013年1月-4月：幼苗自然加倍5月-6月：撰寫(xiě)論文，準(zhǔn)備答辯。專家意見(jiàn)：該實(shí)驗(yàn)擬對(duì)小麥花藥培養(yǎng)創(chuàng)建DH群體，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)合理，技術(shù)路線可行，預(yù)期結(jié)果明確，進(jìn)度安排合理，同意按計(jì)劃執(zhí)行。專家簽字：年 月 日學(xué)院意見(jiàn): 同意立題院長(zhǎng)： 年 月 日 農(nóng)學(xué) 學(xué)院 農(nóng)學(xué) 專業(yè) 王冬旭 學(xué)生： 現(xiàn)把 2012-2013 學(xué)年，第 二 學(xué)期的畢業(yè)論文安排下達(dá)給你，你本學(xué)期承擔(dān)的畢業(yè)論文任務(wù)如下：1、依據(jù)本任務(wù)書(shū)中論文題目、目的意義、可行性分析的容完成開(kāi)題報(bào)告。2、按照開(kāi)題報(bào)告的要求按期完成畢業(yè)論文各項(xiàng)工作的實(shí)施。3、完成畢業(yè)論文的撰寫(xiě)。4、完成畢業(yè)論文的答辯。請(qǐng)按相關(guān)要求完

5、成畢業(yè)論文任務(wù)。教師簽字： 年 月 日農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文開(kāi)題報(bào)告題 目： 小麥花藥培養(yǎng)創(chuàng)建DH群體 學(xué) 院： 農(nóng)學(xué)院 學(xué)生： 王冬旭 專 業(yè)： 農(nóng)學(xué) 班級(jí)學(xué)號(hào)： 12 指導(dǎo)教師： 桂茹 指導(dǎo)教師職稱： 教授 年 月 日學(xué)生王冬旭專業(yè)班級(jí)農(nóng)學(xué)0902學(xué) 號(hào)12指導(dǎo)教師桂茹職 稱教授所在學(xué)院農(nóng)學(xué)院論文名稱小麥花藥培養(yǎng)創(chuàng)建DH群體選題依據(jù)：?jiǎn)伪扼w植物在作物育種、遺傳分析、基因克隆等領(lǐng)域已得到廣泛應(yīng)用，創(chuàng)建單倍體植物的方法有很多種，而用花藥培養(yǎng)技術(shù)是創(chuàng)建小麥單倍體行之有效的方法。小麥?zhǔn)俏覈?guó)主要糧食作物之一，花藥培養(yǎng)技術(shù)對(duì)小麥育種具有突出優(yōu)點(diǎn)，純合速度快，后代穩(wěn)定性好，從而縮短育種年限，提高選擇的準(zhǔn)確

6、性與可靠性，花藥培養(yǎng)的單倍體群體通過(guò)加倍得到的純合體植株群體即為DH群體（doubled haploid）。DH 群體為永久性群體, 不僅可獲得常規(guī)育種難以或無(wú)法得到的新類型，更廣泛用于基因圖譜構(gòu)建、分子標(biāo)記等遺傳學(xué)研究3， 在構(gòu)建遺傳連鎖圖與QTL分析上有著突出優(yōu)勢(shì),因?yàn)槿后w中每個(gè)個(gè)體在遺傳上都是純合的,非常適于連續(xù)性資料積累。同時(shí)，通過(guò)選擇綜合性狀優(yōu)良的品系還可培育出小麥新品種。本研究意在用花藥培養(yǎng)技術(shù)創(chuàng)建小麥DH群體。文獻(xiàn)綜述：花藥培養(yǎng)技術(shù)王冬旭指導(dǎo)老師：桂茹（農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院農(nóng)學(xué)0902班  071000）小麥?zhǔn)鞘澜鐕鷱V泛種植的主要糧食作物之一，全球35%-40%的人

7、口以它為主食，具有分布廣、面積大、總產(chǎn)高、貿(mào)易額多、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高等特點(diǎn)，在世界食品安全、戰(zhàn)略貯備和農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易中占有極其重要的地位1小麥不僅經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，而且營(yíng)養(yǎng)豐富，小麥籽粒中含有人類所必需的大量的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，其中碳水化合物含量占60-80，蛋白質(zhì)含量占8-15，脂肪含量占1.5-2.0，礦物質(zhì)含量占1.5-2.0，以與各種維生素等。而且小麥特有的化學(xué)組成、獨(dú)特的面筋蛋白和豐富的營(yíng)養(yǎng)成份，使其具有良好的黏彈性、脹發(fā)性和延伸性，可用于制作各種面食；另外，麥麩是優(yōu)良的精飼料，麥稈常常用于編織和造紙2。除被用作上述各種主食和副產(chǎn)品等的加工原料外，小麥還被用作儲(chǔ)備和貿(mào)易糧種。中國(guó)既是小麥生產(chǎn)大國(guó)，也是小麥消

8、費(fèi)和貿(mào)易大國(guó)。由于大國(guó)效應(yīng)，中國(guó)小麥的產(chǎn)量直接影響著世界小麥的生產(chǎn)發(fā)展、市場(chǎng)波動(dòng)與國(guó)際貿(mào)易格局。2009年中國(guó)小麥的種植面積約為2421萬(wàn)公頃，產(chǎn)量約為11495萬(wàn)噸，平均單產(chǎn)為4746kg/ha3。據(jù)有關(guān)部門(mén)測(cè)算，2015年我國(guó)小麥的人均需求量將達(dá)到9.68kg，總需求量將達(dá)到14051萬(wàn)噸；占糧食總需求的24.1%4，目前的生產(chǎn)量尚不能滿足消費(fèi)的需求?？梢?jiàn)，在今后的幾十年中，我國(guó)對(duì)小麥的消費(fèi)需求將有增無(wú)減，小麥生產(chǎn)的壓力會(huì)越來(lái)越大。圍繞如何提高小麥的產(chǎn)量，世界很多國(guó)家在小麥品質(zhì)育種技術(shù)研究方面取得了很大成就，培育并推廣了許多農(nóng)藝性狀好的優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的小麥品種，其中花藥培養(yǎng)育種技術(shù)在培育新品種中

9、有不錯(cuò)的成效。1、植物花藥培養(yǎng)研究進(jìn)展花藥培養(yǎng)育種就是利用組織培養(yǎng)的方式將得到的單倍體植株經(jīng)自然或人工加倍得到純合二倍體的育種方法。通過(guò)這種方式可得到遺傳穩(wěn)定、排除雜合體中基因顯隱性隱蔽、純合的二倍體植株, 這樣縮短育種時(shí)間, 提高選擇的準(zhǔn)確性與可靠性。中國(guó)自20 世紀(jì)70 年代開(kāi)始進(jìn)行花藥培養(yǎng)育種研究, 已取得重大成就, 以水稻和小麥為代表的作物花培育種研究與應(yīng)用處于世界領(lǐng)先地位, 并成功與常規(guī)雜交育種、遠(yuǎn)緣雜交育種與轉(zhuǎn)基因技術(shù)相結(jié)合, 發(fā)展形成了一套較完整的育種技術(shù)體系6。2、植物幼穗發(fā)育時(shí)期與誘導(dǎo)率花藥培養(yǎng)中愈傷組織的誘導(dǎo)受多種生理與環(huán)境因子的影響。首先, 花粉在接種時(shí)所處的發(fā)育時(shí)期可能

10、比較重要, 不同物種最適接種時(shí)期各異( 多數(shù)為單核期或雙核期) 。小麥根據(jù)從挑旗到抽穗期間幼穗的大小, 從外觀形態(tài)上分為5個(gè)時(shí)期:小胞期，中胞期，大包期，破肚期，抽穗期；以中包期和大包期幼穗花藥的愈傷誘導(dǎo)率最高。前人研究表明, 單核中、晚期是花藥培養(yǎng)的最適接種時(shí)期7。在小麥穗分化過(guò)程中, 不同穗位小花發(fā)育不同步, 所以幼穗的最適接種期彈性較大, 但已抽穗的幼穗一般不宜再用做花藥培養(yǎng), 以免影響愈傷誘導(dǎo)率。此外, 供試植株的生理狀態(tài)對(duì)愈傷組織的產(chǎn)生也有影響, 一般情況下幼年植株的花藥對(duì)誘導(dǎo)的反應(yīng)能力較強(qiáng)。其次, 接種前的預(yù)處理對(duì)愈傷組織產(chǎn)生也有明顯影響, 尤其在誘發(fā)小孢子脫分化方面作用明顯。例如

11、: 低溫( 4 ) 預(yù)處理( 24 48 h) 可促進(jìn)草莓、羽衣甘藍(lán)和石刁柏花藥培養(yǎng)時(shí)產(chǎn)生更多愈傷組織 8- 9。申書(shū)興等10研究認(rèn)為小孢子培養(yǎng)開(kāi)始時(shí), 熱激處理( 33 , 24 h) 后25 下培養(yǎng)能促進(jìn)四倍體大白菜小孢子進(jìn)行對(duì)稱分裂, 有利于愈傷組織的產(chǎn)生與獲得大量胚狀體。喬奇等9試驗(yàn)發(fā)現(xiàn), 消毒方法對(duì)花藥愈傷組織的形成也有影響, 但這可能與材料的生境有關(guān)。另外, 組織學(xué)研究證實(shí), 花藥壁在花粉產(chǎn)生愈傷組織和形成花粉胚過(guò)程中對(duì)其有一定影響作用,只有貼靠在花藥壁附近的花粉才能順利實(shí)現(xiàn)脫分化。這說(shuō)明絨氈層起源的某些重要物質(zhì)的梯度變化對(duì)愈傷誘導(dǎo)有重要影響11?；ㄋ幍拈L(zhǎng)度與體積對(duì)其形成愈傷組織的

12、能力也有影響。3、小麥花培的影響因素3.1培養(yǎng)基對(duì)小麥花培能力的影響培養(yǎng)基是花藥培養(yǎng)的關(guān)鍵, 國(guó)外許多研究探討了培養(yǎng)基對(duì)小麥花培能力的影響。1986 年王培等12研究指出C17 培養(yǎng)基是適合小麥花藥培養(yǎng)的培養(yǎng)基, C17 培養(yǎng)基的花藥愈傷組織誘導(dǎo)率均顯著高于MS、N6、C1、D、W、麥II 和馬鈴薯簡(jiǎn)化培養(yǎng)基, 而且歷年誘導(dǎo)提高的幅度非常穩(wěn)定, 同時(shí)指出, 該培養(yǎng)基還不完善, 需要進(jìn)一步調(diào)整微量元素和有機(jī)物的種類和配比。國(guó)很多單位采用該培養(yǎng)基, 并在C17培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)。王培等13利用C17 的浸潤(rùn)培養(yǎng)基進(jìn)行花藥培養(yǎng), 發(fā)現(xiàn)花藥愈傷組織誘導(dǎo)率從固體培養(yǎng)基的13. 94% 提高到29.

13、 95% , 愈傷組織的綠苗分化率也明顯提高。榮敏等14選取3 個(gè)冬小麥雜交組合為材料, 以C17 培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基, 分別添加不同濃度的ABA, 結(jié)果表明隨著ABA濃度的增加對(duì)出愈率影響不大, 但分化率和綠苗率均表現(xiàn)先升后降的趨勢(shì), 在添加0. 1 mg/ L 濃度的ABA 時(shí), 分化率和綠苗率最高3.2培養(yǎng)條件對(duì)小麥花培能力的影響在一樣培養(yǎng)基情況下, 不同的培養(yǎng)條件對(duì)花培能力的影響也很大。溫度是影響花藥培養(yǎng)的重要因素, 王培等15, 16采用5 個(gè)溫度進(jìn)行花藥誘導(dǎo)率試驗(yàn), 結(jié)果表明誘導(dǎo)花藥培養(yǎng)的溫度在2830時(shí)誘導(dǎo)效率最高。梁輝等17采用33和36的高溫培養(yǎng)不同時(shí)間, 再轉(zhuǎn)到28培養(yǎng),

14、結(jié)果表明24 h 的高溫培養(yǎng)可以較大幅度的提高小麥綠苗分化率, 而對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率則有明顯降低的趨勢(shì)。宣樸等18研究了轉(zhuǎn)愈初期短期低溫處理對(duì)小麥愈傷組織綠苗分化率的影響。結(jié)果表明, 在轉(zhuǎn)愈傷組織初期, 采用了4和6低溫培養(yǎng)13 d 能大幅度提高小麥花培愈傷組織綠苗分化率, 提高育種效率。在花培期間不同的光暗培養(yǎng)對(duì)花藥培養(yǎng)能力也有影響, Ekiz H 等19研究了光照對(duì)春小麥花藥培養(yǎng)愈傷組織誘導(dǎo)和分化的影響, 結(jié)果表明在誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)過(guò)程中暗培養(yǎng)愈傷誘導(dǎo)率最高, 而在分化階段采用15 d 暗培養(yǎng)加7 dgro-lux 光培養(yǎng), 綠苗分化率最高。愈傷組織的培養(yǎng)時(shí)間也影響幼苗的分化率, 國(guó)惠等20研究

15、了愈傷組織向分化培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移時(shí)間對(duì)綠苗分化的影響, 結(jié)果表明, 隨著花藥接種時(shí)間的延長(zhǎng), 愈傷組織分化綠苗的能力下降, 花粉愈傷組織向分化培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移的時(shí)間以在接種3050 d , 選擇顏色淡黃, 結(jié)構(gòu)臻密, 直徑在2 mm 左右的愈傷組織, 分23 批轉(zhuǎn)移為宜, 這樣可以避免愈傷組織綠苗分化潛力的降低。3.3 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響在花藥培養(yǎng)過(guò)程中, 大部分小孢子退化, 只有少部分小孢子發(fā)生分裂形成多核花粉粒, 并進(jìn)一步產(chǎn)生愈傷組織而撐破花藥壁, 這也是產(chǎn)生單倍體植株( 或胚狀體) 的前提。培養(yǎng)過(guò)程中小孢子的去向主要有4 種: 萎縮、發(fā)芽、肥大和產(chǎn)生愈傷組織( 或形成胚) 。大量試

16、驗(yàn)結(jié)果證實(shí), 花藥離體培養(yǎng)過(guò)程中, 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)配比與含量對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)具有重要作用, 顯著影響出愈率, 對(duì)愈傷的起源有重要調(diào)控作用21-233. 4 其他培養(yǎng)基成分對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響基本培養(yǎng)基種類與各無(wú)機(jī)成分配比的變化對(duì)花藥離體培養(yǎng)中愈傷組織的產(chǎn)生有決定性的影響。黃鶯等 24證實(shí), 提高培養(yǎng)基中微量元素倍數(shù)或降低大量元素的倍數(shù)有利于煙草花培出愈。培養(yǎng)基中的有機(jī)成分對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)同樣具有重要作用。碳源不但提供能源, 還是滲透調(diào)節(jié)物質(zhì), 對(duì)培養(yǎng)效果影響明顯。4、 小麥花藥培養(yǎng)試管苗的移栽與管理4.1 煉苗把將要移栽的小麥單倍體試管苗的試管，不要打開(kāi)瓶塞放在移栽環(huán)境下，練苗5-7天；4.2

17、移栽土壤移栽前與時(shí)整地，翻耕土地，澆足底墑水；4.3移栽方法經(jīng)過(guò)煉苗的小麥單倍體植株用鑷子從試管中取出, 用清水洗凈植株基部的培養(yǎng)基并栽人田間, 栽后將根的四周用手指壓實(shí), 栽滿一個(gè)畦后與時(shí)澆水,4.4 移栽時(shí)間移栽時(shí)間早晚對(duì)移栽成活率影響很大。把握在11月20 日左右, 此時(shí)氣溫雖然已降為6 ，但小麥單倍體植株生長(zhǎng)在塑料棚, 溫度仍能保持在10.3。小麥分蘗和次生根大量發(fā)生最適宜的溫度為14 ，這個(gè)溫度有利于小麥單倍體試管苗的分蘗和次生根的生長(zhǎng), 并能與時(shí)從土壤里吸收營(yíng)養(yǎng),同時(shí)由于移栽溫度低也控制了各種病害的浸染。翌年春天氣溫升至2 3 時(shí)揭開(kāi)塑料棚, 移栽的小麥單倍體植株95% 以上都能成

18、活參考文獻(xiàn)1廣才,何中虎,王德森,等.栽培措施對(duì)面包小麥產(chǎn)量與烘烤品質(zhì)的調(diào)控效應(yīng)J.作物學(xué)報(bào),2002,28(6):797802.2于振文.作物栽培學(xué)各論M.中國(guó)農(nóng)業(yè),2003,2223.3.應(yīng)中.2009年糧食市場(chǎng)情況分析（下）J.中國(guó)農(nóng)業(yè)信息,2010(3):3638.4紀(jì)軍,鐘冠昌,俊明,等.我國(guó)優(yōu)質(zhì)麥生產(chǎn)現(xiàn)狀與品質(zhì)育種方法J.農(nóng)業(yè)科學(xué),2001,29(6):729730. 5 思經(jīng)國(guó)際農(nóng)業(yè)生物技術(shù)進(jìn)展 : 中國(guó)農(nóng)業(yè)科技, 1997- 56王茂良, 慧.花藥離體培養(yǎng)研究進(jìn)展. 農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào). 2010 年10 月第25卷第3 期7 歐陽(yáng)俊聞. 小麥花藥培養(yǎng)研究進(jìn)展, 見(jiàn): 胡含, 王恒立主

19、編. 植物細(xì)胞工程與育種, : 工業(yè)大學(xué), 1990, 168 王超楠, 輝, 鳳英, 等. 羽衣甘藍(lán)花藥培養(yǎng)胚狀體誘導(dǎo)初報(bào) J . 中國(guó)蔬菜, 2006 ( 6) : 23-4.9 喬奇, 振亞, 勒秀蘭. 消毒方法對(duì)草莓花藥愈傷組織形成的影響 J . 農(nóng)業(yè)科學(xué), 1999 ( 7) : 29.10 申書(shū)興, 前程, 世雄, 等. 四倍體大白菜小孢子植株的獲得與倍性鑒定 J . 園藝學(xué)報(bào), 1999, 26 ( 4) : 232-237. 11 周毓君, 朱寶成, 郭明申, 等. 草莓花藥愈傷組織的形成與形態(tài)發(fā)生 J . 園藝學(xué)報(bào), 1996, 23 ( 2) : 119-22. 12 王培

20、, 玉蓉. C( 17) 培養(yǎng)基在花藥培養(yǎng)中應(yīng)用的研究 J . 植物學(xué)報(bào), 1986, 28( 1) : 3845. 13 王培, 玉蓉. 固體培養(yǎng)基上浸潤(rùn)培養(yǎng)提高花粉植株誘導(dǎo)率的研究 J . 華北農(nóng)學(xué)報(bào), 1992, 7( 3) : 5965.14 榮敏, 溫書(shū)敏. 脫落酸( ABA) 對(duì)小麥花藥培養(yǎng)的影響 J . 農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 1999, 022( 002) : 2426.15 王培, 玉蓉. 培養(yǎng)溫度對(duì)花藥愈傷組織誘導(dǎo)率的研究 J . 華北農(nóng)學(xué)報(bào), 1986, 1( 1) : 2025.16 王培, 玉蓉. 提高冬小麥花粉植株誘導(dǎo)率的研究 J . 華北農(nóng)學(xué)報(bào), 1986, 1( 1)

21、: 2025.17 梁輝, 歐陽(yáng)俊聞. 小麥花藥培養(yǎng)初期高溫處理對(duì)培養(yǎng)反應(yīng)的影響 J . 科學(xué)通報(bào), 1997, 42( 13) : 14361439.18 宣樸, 郭元林. 低溫對(duì)小麥花培愈傷組織綠苗分化率的影響 J . 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2004, 17( 2) : 146148. 19 E kiz H, Konzak C F. Ef f ect s of ligh t regimes on an ther culture response in bread w heat J . Plant Cell, T issue and Organ culture,1997, 50( 1) : 712

22、.20 國(guó)惠, 志萍. 小麥花培過(guò)程中轉(zhuǎn)愈時(shí)間對(duì)綠苗分化的影響 J . 農(nóng)業(yè)科技, 1996, 1: 1011. 21 冰玉, 曉華, 周祥明, 等. 林木花藥培養(yǎng)研究進(jìn)展與展望 J . 植物學(xué)通報(bào), 2003, 20 ( 6) : 656-663. 22 馨宇, 王永成, 愛(ài)群, 等. 辣椒花藥培養(yǎng)研究新進(jìn)展. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào), 2007, 23 ( 8) : 331-334. 23 玉芳, 岳嵐, 何松林, 等. 觀賞植物花藥培養(yǎng)的主要影響因素 J . 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào), 2008, 24 ( 6) : 58- 61. 24 黃鶯, 仁祥, 武筑珠, 等. 活性碳、微量元素、大量元素對(duì)煙草花藥培

23、養(yǎng)的影響 J . 農(nóng)業(yè)科學(xué), 1999, 27( 4) : 1-5研究方法、容：1 材料和方法1.1 試驗(yàn)材料試驗(yàn)材料為農(nóng)業(yè)大學(xué)小麥育種組配制的5個(gè)小麥組合，分別為：12（233），12（238），12（620），12（664）和12（667）。 1.2 方法1.2.1 小麥單倍體的創(chuàng)建1.2.1.1 接種花藥，培養(yǎng)愈傷組織 4月29日5月2日取花粉處于單核靠邊期的5個(gè)組合小麥的植株幼穗，在無(wú)菌操作室，用0.1%的升汞對(duì)幼穗進(jìn)行表面消毒8分鐘，蒸餾水洗去殘留升汞。在超凈工作臺(tái)上取小麥花藥，接種在培養(yǎng)基表面，置于無(wú)菌培養(yǎng)室避光培養(yǎng)進(jìn)行脫分化誘導(dǎo)，培養(yǎng)溫度為2830。所用脫分化培養(yǎng)基為C17培養(yǎng)基

24、，約20天后陸續(xù)長(zhǎng)出愈傷組織。1.2.1.2 分化幼苗 花藥脫分化培養(yǎng)30天后，待愈傷組織長(zhǎng)到直徑約1.01.5mm時(shí)，將其轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基中，10天左右可誘導(dǎo)出綠苗。分化培養(yǎng)基用C17+KT 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L ，30g/L蔗糖。培養(yǎng)溫度在25，光照長(zhǎng)度12h/ d，光照強(qiáng)度10000LX。1.2.1.3 生根培養(yǎng)花粉綠苗長(zhǎng)到45cm高時(shí)，在超凈工作臺(tái)上將其轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，715天后促進(jìn)根系發(fā)達(dá)。生根培養(yǎng)基采用MS+KT 0.2mg/L+NAA 0.5mg/L， 80g/L蔗糖，培養(yǎng)溫度在25，光照長(zhǎng)度12h/ d，光照強(qiáng)度10000LX。1.2.1.4 壯苗培養(yǎng)和移

25、栽根系發(fā)達(dá)的小麥苗同轉(zhuǎn)生根培養(yǎng)基方法一樣再轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中。壯苗培養(yǎng)基用1/2MS+KT 0.2mg/L+NAA 0.5mg/L+0.5mg/L矮壯素，80mg/L蔗糖，培養(yǎng)溫度在25，光照長(zhǎng)度14h/ d，光照強(qiáng)度10000LX。在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)23天苗見(jiàn)長(zhǎng)后移入春化培養(yǎng)箱，溫度8，進(jìn)行春化培養(yǎng)35天。10月下旬移栽到田間。幼苗移栽時(shí), 需提前35天打開(kāi)培養(yǎng)瓶的蓋子, 置于室溫下煉苗, 移栽時(shí)需洗去培養(yǎng)基，覆蓋塑料膜保溫、保濕。1.2.1.5 白化苗培養(yǎng)在C17培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，附加0.5mg/L活性炭對(duì)小麥白化苗培養(yǎng)，以培養(yǎng)基中不添加活性炭的為對(duì)照，觀察白化苗變化。1.2.2 小麥單倍體加倍

26、把移栽的單倍體幼苗置于溫棚中進(jìn)行自然加倍；1.2.3 統(tǒng)計(jì)方法主要指標(biāo)計(jì)算方法如下：花粉愈傷組織誘導(dǎo)率（簡(jiǎn)稱出愈率）（%）=花粉愈傷組織總數(shù)/接種花藥總數(shù)×100；綠（或白）苗分化率（%）=分化綠（或白）苗數(shù)/花粉愈傷組織數(shù)×100；綠苗誘導(dǎo)率（%）=分化綠苗數(shù)/接種花藥數(shù)×100。這里出愈率代表花粉脫分化能力，分化率代表愈傷組織的分化能力，綠苗誘導(dǎo)率代表花粉綠苗的產(chǎn)量。另外，在分化綠苗的愈傷組織中，愈傷組織分化出的白、綠嵌合苗，這一部分愈傷組織計(jì)算到分化綠苗的愈傷組織數(shù)里。進(jìn)度安排：2012年2月-3月：選題，查閱文獻(xiàn)資料; 3月-4月：確定方案;2012年5月

27、：收集實(shí)驗(yàn)資料，在農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)室接種花藥；6月-9月：花藥的脫分化，再分化，壯苗；10月-11月：分批移栽；2013年1月-4月：幼苗自然加倍5月-6月：撰寫(xiě)論文，準(zhǔn)備答辯。指導(dǎo)教師意見(jiàn)：論文選題針對(duì)性強(qiáng)，試驗(yàn)材料有代表性，試驗(yàn)方案可行，預(yù)期結(jié)果明確，同意開(kāi)題指導(dǎo)教師：年 月 日審 核 小 組 成 員姓 名職 稱備 注姓 名職 稱備 注開(kāi)題報(bào)告記錄：審核小組評(píng)語(yǔ)：審核小組組長(zhǎng)：（簽字）年 月 日學(xué)院意見(jiàn)：院長(zhǎng)：年 月 日農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文指導(dǎo)教師評(píng)閱書(shū)學(xué)生：王冬旭學(xué)號(hào)：12專業(yè)班級(jí)：農(nóng)學(xué)0902班 所在學(xué)院：農(nóng)學(xué)院論文題目：小麥花藥培養(yǎng)創(chuàng)建DH群體 指導(dǎo)教師評(píng)語(yǔ)：該同學(xué)遵守學(xué)校的各項(xiàng)規(guī)章制度

28、，對(duì)工作認(rèn)真負(fù)責(zé)，能夠較好的完成各項(xiàng)實(shí)習(xí)任務(wù)。學(xué)習(xí)態(tài)度端正，具有較扎實(shí)的生物科學(xué)基礎(chǔ)理論和專業(yè)知識(shí)。論文對(duì)小麥花藥培養(yǎng)DH群體的研究，論文選題針對(duì)性強(qiáng)，依據(jù)充分，具有一定的科學(xué)意義和應(yīng)用價(jià)值。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)科學(xué)合理，研究方法可行，工作量較大，符合本科論文要求，論文寫(xiě)作格式規(guī)，條理清楚，符合一般科技論文寫(xiě)作要求。該生閱讀文獻(xiàn)資料較多，基本掌握了本學(xué)科領(lǐng)域的基礎(chǔ)理論和專業(yè)知識(shí)。論文不足之處：（1） 文中材料和方法部分過(guò)于繁瑣，部分容可用一句話概括，使其簡(jiǎn)單明了（2） 文章參考文獻(xiàn)尚需進(jìn)一步完善（3） 注意文中個(gè)別專業(yè)詞成 績(jī) 評(píng) 定：是否同意答辯：指導(dǎo)教師（簽名）： 年月日農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文答辯評(píng)分表

29、評(píng)分指標(biāo)分 值評(píng) 價(jià) 容得 分論文選題10選題有重要理論意義或?qū)嵱脙r(jià)值。立題依據(jù)充分。文獻(xiàn)引用12閱讀、引用文獻(xiàn)資料較廣泛，較全面了解本領(lǐng)域?qū)W術(shù)動(dòng)態(tài)，綜合分析能力較強(qiáng)。論文難度與工作量14難度較大，工作量大。論文成果的創(chuàng)新性12有獨(dú)到見(jiàn)解，有較大的創(chuàng)新性成果。理論基礎(chǔ)與科研能力16具有堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)理論和系統(tǒng)的專門(mén)知識(shí)，具有較強(qiáng)的獨(dú)立從事科研工作的能力，研究方法和技術(shù)體系得當(dāng)。寫(xiě)作能力16條理清楚，層次分明，說(shuō)理透徹，文筆流暢，表格、繪圖準(zhǔn)確規(guī)，中外文摘要簡(jiǎn)明扼要，語(yǔ)句通順，語(yǔ)確，符合科技寫(xiě)作規(guī)。答辯報(bào)告10能簡(jiǎn)明扼要、重點(diǎn)突出地闡述論文或設(shè)計(jì)的主要容，有新見(jiàn)解，結(jié)論明確；時(shí)間掌握恰當(dāng)?；卮饐?wèn)題1

30、0思維敏捷，邏輯性強(qiáng)，準(zhǔn)確流利地回答各種問(wèn)題?？?分100注：本表為答辯小組成員評(píng)分用表，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參照農(nóng)業(yè)大學(xué)畢業(yè)論文質(zhì)量評(píng)定參考標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)業(yè)大學(xué)屆本科畢業(yè)論文答辯記錄表所在學(xué)院： 專業(yè)班級(jí)： 時(shí)間： 年 月 日學(xué) 生 姓 名學(xué) 號(hào)指導(dǎo)教師職 稱畢業(yè)論文題目：答 辯 小 組 成 員姓 名職 稱成 績(jī)姓 名職 稱成 績(jī)答辯小組評(píng)語(yǔ)：答辯小組組長(zhǎng)：（簽字）年 月 日答 辯 成 績(jī)：注：本表與學(xué)生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）一同在學(xué)院存檔（必須用鋼筆書(shū)寫(xiě)）小麥花藥培養(yǎng)創(chuàng)建DH群體農(nóng)學(xué)專業(yè)0902班：王冬旭指導(dǎo)老師：桂茹摘要：本文對(duì)親本性狀差異較大、來(lái)源不同的5個(gè)小麥組合的F1代植株進(jìn)行花藥培養(yǎng)，創(chuàng)建DH群體，該群體

31、在遺傳學(xué)、形態(tài)發(fā)生學(xué)和分子生物學(xué)等基礎(chǔ)研究提供了豐富的背景和遺傳穩(wěn)定的材料, 而且對(duì)于單倍體的育種實(shí)踐也有重要意義。試驗(yàn)共獲得小麥單倍體植株893株，DH植株343，平均出愈率14.58%，綠苗分化率平均為15.74%，平均加倍率為35.5%。研究還表明，在培養(yǎng)基中添加活性炭等改善培養(yǎng)條件，可使白化苗轉(zhuǎn)綠，提高綠苗分化率。 關(guān)鍵詞：小麥；花藥培養(yǎng)；單倍體，DH群體Creating DH population with anther culture in wheatAbstract:The parental traits among 5 wheat combination greatly, di

32、fferent sources of F1 generation plants in anther culture, create DH group, the population based studies and molecular biology provides the background and rich genetic stability of the material in genetics, morphology, and have an important significance in the practice of haploid breeding. Test of 8

33、93 strains of wheat haploid plants were obtained, DH plants are 343, average rate of 14.58%, the green plantlet differentiation rate averaged 15.74%,The average doubling rate was 35.5%. Research also shows that, in the culture improvement of adding active carbon in the medium conditions, can make th

34、e albino turned green, increase the frequency of green plantlet differentiationKey words: wheat, anther culture, haploid，DH population單倍體植物在作物育種、遺傳分析、基因克隆等領(lǐng)域已得到廣泛應(yīng)用，創(chuàng)建單倍體植物的方法有很多種，而用花藥培養(yǎng)技術(shù)是創(chuàng)建小麥單倍體行之有效的方法1。小麥?zhǔn)俏覈?guó)主要糧食作物之一，花藥培養(yǎng)技術(shù)對(duì)小麥育種具有突出優(yōu)點(diǎn)，純合速度快，后代穩(wěn)定性好，從而縮短育種年限，提高選擇的準(zhǔn)確性與可靠性2。花藥培養(yǎng)的單倍體群體通過(guò)加倍得到的純合體植株群體即為D

35、H群體（doubled haploid），DH 群體為永久性群體, 不僅可獲得常規(guī)育種難以或無(wú)法得到的新類型，更廣泛用于基因圖譜構(gòu)建、分子標(biāo)記等遺傳學(xué)研究3， 在構(gòu)建遺傳連鎖圖與QTL分析上有著突出優(yōu)勢(shì),因?yàn)槿后w中每個(gè)個(gè)體在遺傳上都是純合的,非常適于連續(xù)性資料積累4，5。本研究意在用花藥培養(yǎng)技術(shù)創(chuàng)建小麥DH群體。1 材料和方法1.1 試驗(yàn)材料試驗(yàn)材料為農(nóng)業(yè)大學(xué)小麥育種組配制的5個(gè)小麥組合，分別為：12（233），12（238），12（620），12（664）和12（667）。 1.2 方法1.2.1 小麥單倍體的創(chuàng)建 1.2.1.1 接種花藥，培養(yǎng)愈傷組織 4月29日5月2日取花粉處于單核靠邊

36、期的5個(gè)組合小麥的植株幼穗，在無(wú)菌操作室，用0.1%的升汞對(duì)幼穗進(jìn)行表面消毒8分鐘，蒸餾水洗去殘留升汞。在超凈工作臺(tái)上取小麥花藥，接種在培養(yǎng)基表面，置于無(wú)菌培養(yǎng)室避光培養(yǎng)進(jìn)行脫分化誘導(dǎo)，培養(yǎng)溫度為28306。所用脫分化培養(yǎng)基為C17培養(yǎng)基，約20天后陸續(xù)長(zhǎng)出愈傷組織。1.2.1.2 分化幼苗 花藥脫分化培養(yǎng)30天后，待愈傷組織長(zhǎng)到直徑約1.01.5mm時(shí)，將其轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基中，10天左右可誘導(dǎo)出綠苗。分化培養(yǎng)基用C17+KT 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L ，30g/L蔗糖。培養(yǎng)溫度在25，光照長(zhǎng)度12h/ d，光照強(qiáng)度10000LX。1.2.1.3 生根培養(yǎng) 花粉綠苗長(zhǎng)到45cm高時(shí)

37、，在超凈工作臺(tái)上將其轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，715天后促進(jìn)根系發(fā)達(dá)。生根培養(yǎng)基采用MS+KT 0.2mg/L+NAA 0.5mg/L， 80g/L蔗糖，培養(yǎng)溫度在25，光照長(zhǎng)度12h/ d，光照強(qiáng)度10000LX。1.2.1.4 壯苗培養(yǎng)和移栽根系發(fā)達(dá)的小麥苗同轉(zhuǎn)生根培養(yǎng)基方法一樣再轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中。壯苗培養(yǎng)基用1/2MS+KT 0.2mg/L+NAA 0.5mg/L+0.5mg/L矮壯素，80mg/L蔗糖，培養(yǎng)溫度在25，光照長(zhǎng)度14h/ d，光照強(qiáng)度10000LX。在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)23天苗見(jiàn)長(zhǎng)后移入春化培養(yǎng)箱，溫度8，進(jìn)行春化培養(yǎng)35天。10月下旬移栽到田間。幼苗移栽時(shí), 需提前35天打開(kāi)培養(yǎng)

38、瓶的蓋子, 置于室溫下煉苗, 移栽時(shí)需洗去培養(yǎng)基，覆蓋塑料膜保溫、保濕7。1.2.1.5 白化苗培養(yǎng)在C17培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，附加0.5mg/L活性炭對(duì)小麥白化苗培養(yǎng)，以培養(yǎng)基中不添加活性炭的為對(duì)照，觀察白化苗變化。1.2.2 小麥單倍體加倍 把移栽的單倍體幼苗置于溫棚中進(jìn)行自然加倍；1.2.3 統(tǒng)計(jì)方法主要指標(biāo)計(jì)算方法如下：花粉愈傷組織誘導(dǎo)率（簡(jiǎn)稱出愈率）（%）=花粉愈傷組織總數(shù)/接種花藥總數(shù)×100；綠（或白）苗分化率（%）=分化綠（或白）苗數(shù)/花粉愈傷組織數(shù)×100；綠苗誘導(dǎo)率（%）=分化綠苗數(shù)/接種花藥數(shù)×100。這里出愈率代表花粉脫分化能力，分化率代表愈傷

39、組織的分化能力，綠苗誘導(dǎo)率代表花粉綠苗的產(chǎn)量8。另外，在分化綠苗的愈傷組織中，愈傷組織分化出的白、綠嵌合苗，這一部分愈傷組織計(jì)算到分化綠苗的愈傷組織數(shù)里。2.結(jié)果與分析2.1 小麥花藥出愈率試驗(yàn)共接種38313枚花藥，培養(yǎng)出愈傷組織5462塊，平均出愈率14.58%，5個(gè)組合出愈情況見(jiàn)表1。其中以12（620）組合出愈率最高為15.73%，12（238）組合最低為13.12%。表1 5個(gè)組合小麥花藥出愈率Table 1 5 combinations of Wheat Anther Callus Induction組合名稱Group name接種花藥數(shù)Number of inoculated a

40、nthers愈傷組織塊數(shù)Numbers of callus出愈率Increasing the rate of12（233）543681715.03%12（23812%12（620）6923108915.73%12（664）519870513.56%12（667）547484615.45%2.2 小麥花藥愈傷組織幼苗分化率和幼苗誘導(dǎo)率表2 5個(gè)組合小麥花藥培養(yǎng)綠苗分化率和綠苗誘導(dǎo)率Table 2 5 combinations of green plantlet differentiation rate of wheat anther culture and Plantl

41、et induction frequency組合名稱Group name分化綠苗數(shù)Green seedling differentiation綠苗分化率Green plantlet differentiation rate綠苗誘導(dǎo)率Green plantlet induction rate12（233）698.45%1.27%12（238）32416.16%2.12%12（620）27224.98%3.93%12（664）9213.05%1.77%12（667）13616.08%2.48%試驗(yàn)共獲得893株綠苗，綠苗分化率和綠苗誘導(dǎo)率平均為15.74%和2.31%，（表2），以12（620）組

42、合花藥愈傷組織幼苗分化率和綠苗誘導(dǎo)率最高，分別為24.98%和3.93%，12（233）組合最低，分別為8.45%和1.27%。不同組合花藥愈傷組織幼苗分化率差異明顯。2.3 小麥DH獲得量與加倍率表3 5個(gè)組合小麥DH獲得量與加倍率Table 3 5 combinations of wheat DH and the double rate組合名稱Group name分化綠苗數(shù)Green seedling differentiationDH數(shù)Number of DH加倍率The double rate12（233）692840.6%12（238）32416952.2%12（620）2728631.6%12（664）922527.2%12（667）13635