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文檔簡介
1、 專題1 基因工程基因工程的概念:基因工程是指按照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計,通過 ,賦予生物以 ,創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品?;蚬こ淌窃?上進(jìn)行設(shè)計和施工的,又叫做 。(一)基因工程的原理及技術(shù)基因工程的原理: 基因工程的基本工具:1.“分子手術(shù)刀”全稱: 簡稱: (1)來源:主要是從 中分離純化出來的。(2)功能:能夠識別雙鏈DNA分子的某種 ,并且使每一條鏈中 部位的兩個核苷酸之間的 斷開,因此具有專一性。(3)結(jié)果:經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種末端,即 和 。2.“分子縫合針”是指 (1)兩種DNA連接酶( 連接酶和 連接酶)的比較:相同點:縫合部位都
2、是 鍵。區(qū)別:EcoliDNA連接酶來源于 ,只能縫合雙鏈DNA片段互補(bǔ)的 之間的磷酸二酯鍵連接起來;而T4DNA連接酶能縫合兩種末端,但連接平末端的之間的效率較 。(2)與DNA聚合酶作用的異同:DNA聚合酶只能將 加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯鍵。DNA連接酶是連接 的末端,形成磷酸二酯鍵。3.“分子運(yùn)輸車”運(yùn)載體(1)載體需要具備的條件: 。 。 。 。(2)最常用的載體是 ,它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單的、獨立于細(xì)菌 之外,并具有 能力的 DNA分子。(3)其它載體: (二)基因工程的基本操作程序第一步: 1.目的基因是指:編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 。2.原核基因采取 獲得,真核基因
3、常用 。人工合成目的基因的常用方法有反轉(zhuǎn)錄法_和化學(xué)合成法_。3.PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因(1)原理: (2)過程:第一步:加熱至9095 使 ;第二步:冷卻到5560,引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈;第三步:加熱至7075,熱穩(wěn)定的 從引物起始互補(bǔ)鏈的合成,逐步延伸。第二步(核心): 1.目的:使目的基因在受體細(xì)胞中 ,并且可以 ,使目的基因能夠 。2.結(jié)構(gòu)組成: (1)啟動子:是一段有特殊結(jié)構(gòu)的 ,位于基因的 ,是 識別和結(jié)合的部位,能驅(qū)動基因 ,最終獲得所需的 。(2)終止子:也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的 ,位于基因的 。作用是 (3)標(biāo)記基因的作用:是為了鑒定受體細(xì)胞中 ,從而將 的細(xì)胞篩選出來。常用的
4、標(biāo)記基因是 。第三步: _1.轉(zhuǎn)化的概念:是 的過程。2.常用的轉(zhuǎn)化方法:將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞:采用最多的方法是 ,其次還有 和 等。將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞:最常用的方法是 。此方法的受體細(xì)胞多是 。將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞:原核生物作為受體細(xì)胞的原因是 ,最常用的原核細(xì)胞是 ,其轉(zhuǎn)化方法是:先用 處理細(xì)胞,使其成為 ,再將 溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合,在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子,完成轉(zhuǎn)化過程。3.重組細(xì)胞導(dǎo)入受體細(xì)胞后,需要篩選 的受體細(xì)胞,依據(jù)是 基因是否表達(dá)。第四步: 1.首先要檢測 ,方法是采用 。2.其次還要檢測 ,方法是采用標(biāo)記的目的基因作探針與 mRNA雜交,
5、這種方法叫 。3.最后檢測 ,方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取 ,用相應(yīng)的 進(jìn)行 雜交。4.有時還需進(jìn)行 的鑒定。如 轉(zhuǎn)基因抗蟲植物是否出現(xiàn)抗蟲性狀等。(三)基因工程的應(yīng)用1.植物基因工程:抗蟲、抗病、抗逆轉(zhuǎn)基因植物,利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì)。2.動物基因工程:提高動物生長速度、改善畜產(chǎn)品品質(zhì)、用轉(zhuǎn)基因動物生產(chǎn)藥物。3.基因治療:把正常的外源基因?qū)氩∪梭w內(nèi),使該基因表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮作用。(四)蛋白質(zhì)工程的概念蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ),通過 ,對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行 ,或制造一種 ,以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。(基因工程在原則上只能生產(chǎn) 的蛋白質(zhì)) 專題2 細(xì)胞工程(一)
6、植物細(xì)胞工程 1.理論基礎(chǔ)(原理): 全能性表達(dá)的難易程度: 生殖細(xì)胞 干細(xì)胞 ; 動物細(xì)胞 2.植物組織培養(yǎng)技術(shù)(1)過程:離體的 經(jīng)過脫分化,得到 再經(jīng)過 ,得到試管苗 植物體(2)用途:微型繁殖、 、制造人工種子、 、細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)等。單倍體育種:a過程:植株(AaBb)通過減數(shù)分裂得到花粉(AB、Ab、aB、ab四種類型);對花粉進(jìn)行 ;得到單倍體植株;對其幼苗時期用 進(jìn)行處理;得到了正常的純合二倍體植株(AABB、AAbb、aaBB、aabb四種類型)。b 優(yōu)點:明顯縮短育種年限(3)地位:是培育轉(zhuǎn)基因植物、植物體細(xì)胞雜交培育植物新品種的 。3.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)(1)過程:
7、(2)誘導(dǎo)融合的方法:物理法包括 等?;瘜W(xué)法一般是用 作為誘導(dǎo)劑。(3)意義: 。(二)動物細(xì)胞工程 1. 動物細(xì)胞培養(yǎng)(1)概念:動物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動物機(jī)體中取出相關(guān)的 ,將它分散成 ,然后放在適宜的 中,讓這些細(xì)胞 。(2)動物細(xì)胞培養(yǎng)的流程:取動物組織塊(動物胚胎或幼齡動物的器官或組織)剪碎用 處理分散成 制成 轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行 培養(yǎng)貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用 或 處理分散成單個細(xì)胞繼續(xù) 培養(yǎng)。(3)細(xì)胞貼壁和接觸抑制:懸液中分散的細(xì)胞很快就 ,稱為 。細(xì)胞數(shù)目不斷增多,當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面 時,細(xì)胞就會 ,這種現(xiàn)象稱為 。(4)動物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足以下條件 :培養(yǎng)液應(yīng)進(jìn)行無菌處理。通常還
8、要在培養(yǎng)液中添加一定量的 ,以防培養(yǎng)過程中的污染。此外,應(yīng)定期更換培養(yǎng)液,防止 。 :合成培養(yǎng)基成分:糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等。通常需加入 等天然成分。 :適宜溫度:哺乳動物多是 ;pH: 。 :95%空氣5%CO2。是細(xì)胞代謝所必需的,CO2的主要作用是 。(5)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用:制備病毒疫苗、制備單克隆抗體、檢測有毒物質(zhì)、培養(yǎng)醫(yī)學(xué)研究的各種細(xì)胞。2.動物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動物(1)哺乳動物核移植可分為 核移植(比較容易)和 核移植(比較難)。(2)選用去核 的原因:卵(母)細(xì)胞 ;卵(母)細(xì)胞 。(3)體細(xì)胞核移植的大致過程是: (4)體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用:加
9、速家畜遺傳改良進(jìn)程,促進(jìn)良畜群繁育; ;生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白 作為異種移植的供體;用于組織器官的移植等。(5)體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題:克隆動物存在著健康問題、表現(xiàn)出 缺陷等。3.動物細(xì)胞融合(1)動物細(xì)胞融合也稱 ,是指兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的過程。融合后形成的具有原來 細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞,稱為 。(2)動物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的原理基本相同,誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的方法與誘導(dǎo)植物原生質(zhì)體融合的方法類似,常用的誘導(dǎo)方法有物理法包括 等?;瘜W(xué)法一般是用 作為誘導(dǎo)劑。另外,比誘導(dǎo)植物原生質(zhì)體融合多的一個生物方法是用 進(jìn)行誘導(dǎo)。(3)動物細(xì)胞融合的意義:克服了 ,成為研究細(xì)胞遺傳、
10、 、腫瘤和生物新品種培育的重要手段。(4)動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較:比較項目細(xì)胞融合的原理細(xì)胞融合的方法誘導(dǎo)手段用法植物體細(xì)胞雜交 去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合離心、電刺激、振動,聚乙二醇等試劑誘導(dǎo)克服了遠(yuǎn)緣雜交的不親和性,獲得雜種植株動物細(xì)胞融合 使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合除應(yīng)用植物細(xì)胞雜交手段外,再加滅活的病毒誘導(dǎo)制備單克隆抗體的技術(shù)之一4.單克隆抗體(1)抗體:一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種 。從血清中分離出的抗體 ,因此可用生物手段生產(chǎn)單克隆抗體。 (2)單克隆抗體的制備過程:注:誘導(dǎo)融合的細(xì)胞需要進(jìn)行兩次篩選,第一次是為了獲得 ,第二次是為了獲得 。(3)雜交瘤細(xì)胞的特點:既能大量
11、 ,又能產(chǎn)生 。(4)單克隆抗體的優(yōu)點: 。(5)單克隆抗體的作用: :準(zhǔn)確識別各種抗原物質(zhì)的細(xì)微差異,并跟一定抗原發(fā)生特異性結(jié)合,具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點。 :主要用于癌癥治療,可制成“生物導(dǎo)彈”,也有少量用于治療其它疾病。專題3 胚胎工程(一)動物胚胎發(fā)育的基本過程2、動物胚胎發(fā)育的基本過程(1)精子的發(fā)生:a.場所: 。b.時期: 開始,直到 。c.過程:精原細(xì)胞先進(jìn)行有絲分裂后進(jìn)行減數(shù)分裂;變形過程中,細(xì)胞核變形為 , 發(fā)育為頂體,中心體演變?yōu)?,線粒體在尾基部形成 ,其他物質(zhì)濃縮為原生質(zhì)滴直至脫落。線粒體為精子運(yùn)動提供能量。(2)卵子的發(fā)生:a.場所: 。b.時期: 和 。c
12、.過程:在 時期,卵原細(xì)胞在 進(jìn)行有絲分裂并演變成初級卵母細(xì)胞被卵泡細(xì)胞包圍,減數(shù)第一次分裂在 完成,形成次級卵母細(xì)胞和第一極體進(jìn)入 準(zhǔn)備受精;減數(shù)第二次分裂是在 過程中完成的。(3)受精:準(zhǔn)備階段:精子獲能:在雌性動物 內(nèi)獲能;卵子的準(zhǔn)備(排出的卵子接下來要在 中進(jìn)一步成熟到 期才具備受精能力)。受精階段:卵子周圍的結(jié)構(gòu)由外到內(nèi):放射冠、 、 ,a.穿越放射冠發(fā)生 :精子釋放頂體酶溶解卵丘細(xì)胞之間的物質(zhì),穿越放射冠。b.穿越透明帶透明帶反應(yīng):在精子觸及卵黃膜的瞬間會發(fā)生阻止后來精子進(jìn)入透明帶的生理反應(yīng)它是防止多精子入卵受精的 ;c.進(jìn)入卵細(xì)胞膜卵黃膜的封閉作用:精子外膜和卵黃膜融合,精子入卵
13、后,卵細(xì)胞膜會拒絕其他精子再進(jìn)入卵內(nèi),它是防止多精子入卵受精的 ;d.形成原核:精子尾部脫落,原有核膜破裂,合成新膜形成雄原核,同時卵子完成 ,形成雌原核e.形成受精卵。(4)胚胎發(fā)育:a卵裂期:受精卵在 中進(jìn)行有絲分裂,細(xì)胞數(shù)量增加,但是胚胎總體積 ;b桑椹胚:32個細(xì)胞左右的胚胎之前所有細(xì)胞都是能發(fā)育成完整胚胎的 ;c囊胚:細(xì)胞開始出現(xiàn) ,其中個體較大的細(xì)胞叫 將來發(fā)育成胎兒的 ;而滋養(yǎng)層細(xì)胞將來發(fā)育成 ;胚胎內(nèi)部逐漸出現(xiàn)囊胚腔注:囊胚的擴(kuò)大會導(dǎo)致透明帶的破裂,胚胎伸展出來,這一過程叫 ;d原腸胚:內(nèi)細(xì)胞團(tuán)表層形成外胚層,下方細(xì)胞形成內(nèi)胚層,由內(nèi)胚層包圍的囊腔叫 。細(xì)胞分化在 達(dá)到最大限度
14、(二)胚胎干細(xì)胞1、哺乳動物的胚胎干細(xì)胞簡稱ES或EK細(xì)胞,來源于 分離出來。2、具有胚胎細(xì)胞的特性,在形態(tài)上表現(xiàn)為 小, 大, 明顯;在功能上,具有 ,可分化為成年動物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞。另外,在體外培養(yǎng)的條件下,可以 而不發(fā)生 ,可進(jìn)行 保存,也可進(jìn)行 。 若在 上培養(yǎng)或加入 能維持不分化狀態(tài)或加入 使其分化。3、胚胎干細(xì)胞的主要用途是:可用于研究哺乳動物 ;是在體外條件下研究 的理想材料,在培養(yǎng)液中加入 ,如牛黃酸等化學(xué)物質(zhì)時,就可以誘導(dǎo)ES細(xì)胞向不同類型的組織細(xì)胞分化,這為揭示 的機(jī)理提供了有效的手段;可以用于治療 ,如帕金森綜合癥、少年糖尿病等;利用可以被誘導(dǎo)分化形成 的特性,移植
15、ES細(xì)胞可使壞死或退化的部位得以修復(fù)并恢復(fù)正常功能;隨著組織工程技術(shù)的發(fā)展,通過ES細(xì)胞體外 ,定向培育出 ,用于器官移植,解決 和器官移植后 的問題。(三)胚胎工程的應(yīng)用1.體外受精和胚胎的早期培養(yǎng)(1)卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng):超數(shù)排卵:用 處理,使其排出更多的卵子,然后,從 中沖取卵子,直接與獲能的精子在體外受精。第二種方法:從剛屠宰母畜的 中采集卵母細(xì)胞;第三種方法是借助超聲波探測儀、腹腔鏡等直接從 中吸取卵母細(xì)胞。采集的卵母細(xì)胞,都要在體外經(jīng) 后,才能與 的精子受精。(2) 精子的采集和獲能:在體外受精前,要對精子進(jìn)行 處理。(3) 受精:獲能的精子和培養(yǎng)成熟的卵細(xì)胞在 溶液或 溶液中完
16、成受精過程。(4)胚胎的早期培養(yǎng):精子與卵子在體外受精后,應(yīng)將受精卵移入 中繼續(xù)培養(yǎng),以檢查受精狀況和 。培養(yǎng)液成分較復(fù)雜,除一些無機(jī)鹽和有機(jī)鹽外,還需添加 等營養(yǎng)成分,以及 等物質(zhì)。當(dāng)胚胎發(fā)育到適宜的階段時,可將其取出向 。不同動物胚胎移植的時間不同。(牛、羊一般要培育到 階段才能進(jìn)行移植,小鼠、家兔等實驗動物可在更早的階段移植,人的體外受精胚胎可在 階段移植。)2.胚胎移植(1)胚胎移植是指將雌性動物的早期胚胎,或者通過體外受精及其它方式得到的胚胎,移植到 其它雌性動物的體內(nèi),使之繼續(xù)發(fā)育為新個體的技術(shù)。其中提供胚胎的個體稱為 ,接受胚胎的個體稱為 。(供體為優(yōu)良品種,作為受體的雌性動物應(yīng)
17、為 的品種。)地位:如轉(zhuǎn)基因、核移植,或體外受精等任何一項胚胎工程技術(shù)所生產(chǎn)的胚胎,都必須經(jīng)過 才能獲得后代,是胚胎工程的 。胚胎移植的實質(zhì)是 (2) 胚胎移植的意義:大大縮短了 ,充分發(fā)揮 。(3) 生理學(xué)基礎(chǔ):動物發(fā)情排卵后,同種動物的供、受體生殖器官的 。這就為供體的胚胎移入受體提供了相同的生理環(huán)境。早期胚胎在一定時間內(nèi)處于 狀態(tài)。這就為胚胎的收集提供了可能。受體對移入子宮的外來胚胎不發(fā)生 。這為胚胎在受體的存活提供了可能。供體胚胎可與受體子宮建立正常的 聯(lián)系,但供體胚胎的遺傳特性在孕育過程中不受影響。(4) 基本程序主要包括:對供、受體的選擇和處理。選擇遺傳特性和生產(chǎn)性能優(yōu)秀的供體,有
18、健康的體質(zhì)和正常繁殖能力的受體,供體和受體是 。并用 進(jìn)行同期發(fā)情處理,用 對供體母牛做超數(shù)排卵處理。配種或人工授精。 。配種或輸精后第7天,用特制的沖卵裝置,把供體母牛子宮內(nèi)的胚胎沖洗出來(也叫沖卵)。對胚胎進(jìn)行質(zhì)量檢查,此時的胚胎應(yīng)發(fā)育到 階段。直接向受體移植或放入196的液氮中保存。對胚胎進(jìn)行 。 。對受體母牛進(jìn)行是否妊娠的檢查。3.胚胎分割(1)概念:是指采用 方法將 切割2等份、4等份等,經(jīng)移植獲得 的技術(shù)。(2)意義:來自同一胚胎的后代具有 的遺傳物質(zhì),屬于 繁殖。(3)材料:發(fā)育良好,形態(tài)正常的 。(桑椹胚至囊胚的發(fā)育過程中,細(xì)胞開始分化,但其全能性仍很高,也可用于胚胎分割。)(
19、4)操作過程:對囊胚階段的胚胎分割時,要將 均等分割,否則會影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育。專題4 生物技術(shù)的安全性和倫理問題(一)轉(zhuǎn)基因生物的安全性爭論 :(1)基因生物與食物安全:反方觀點: 正方觀點:有安全性評價、科學(xué)家負(fù)責(zé)的態(tài)度、無實例無證據(jù)(2)轉(zhuǎn)基因生物與生物安全:對生物多樣性的影響反方觀點:擴(kuò)散到種植區(qū)之外變成野生種類、成為入侵外來物種、重組出有害的病原體、成為超級雜草、有可能造成“基因污染”正方觀點: (3)轉(zhuǎn)基因生物與環(huán)境安全:對生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響反方觀點: 正方觀點:不改變生物原有的分類地位、減少農(nóng)藥使用、保護(hù)農(nóng)田土壤環(huán)境(二)生物技術(shù)的倫理問題(1)克隆人:兩種不同觀點,多數(shù)人持否定態(tài)度。否定的理由:克隆人嚴(yán)重違反了 ,是克隆技術(shù)的濫用;克隆人沖擊了 等傳統(tǒng)的倫理道德觀念;克隆人是在人為的制造在 都不健全的人??隙ǖ睦碛桑杭夹g(shù)性問題可以通過胚胎分級、基因診斷和染色體檢查等方法解決。不成熟的技術(shù)也只有通過實踐才能使之
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