泡桐花總黃酮抗哮喘豚鼠氣道炎癥的作用機制探討

1、泡桐花總黃酮抗哮喘豚鼠氣道炎癥的作用機制探討<               作者：陳保紅， 李寅超， 趙宜紅， 傅蔓華 【關(guān)鍵詞】  豚鼠；,慢性氣道變應性炎癥；,泡桐花總黃酮摘要：目的通過豚鼠哮喘模型 研究 泡桐花總黃酮抗哮喘氣道變應性炎癥的作用。 方法 以卵蛋白（OA）致敏豚鼠為動物模型，灌胃途徑予以泡桐花總黃酮大、小劑量，觀察各組豚鼠支氣管肺泡灌洗液（BALF）中白細胞總數(shù)、嗜酸性粒細胞（EOS）數(shù)和嗜酸性粒細胞特異性趨化因子（Eot

2、axin）的改變。結(jié)果泡桐花總黃酮可顯著延長致敏豚鼠的引喘潛伏期，不同程度地抑制BALF中的EOS和白細胞總數(shù)及氣道上皮Eotaxin的過度表達。 結(jié)論泡桐花總黃酮對哮喘具有一定的保護作用，其中泡桐花總黃酮可能通過調(diào)控Eotaxin在氣道黏膜上皮的過度表達，進而抑制Eos向哮喘氣道的募集，消除氣道炎癥，成為其發(fā)揮抗過敏性哮喘的重要環(huán)節(jié)。關(guān)鍵詞：豚鼠；  慢性氣道變應性炎癥；  泡桐花總黃酮Abstract：ObjectiveThis study was designed to investigate the effects of flavonoids in Fructus

3、Paulowniae on IAR and LAR.MethodsAn guinea pig asthmatic model, induced by OVA was administered by intragastric gavage(ig) with different doses of flavonoids in Fructus Paulowniae. The latent period, the number of acidophils and the Eotaxin in bronchoalveolar lavage fluid(BALF) were observed. Result

4、sThe  flavonoids in Fructus Paulowniae could delay the latent period of airway inflammation significantly. The number of acidophils and total white blood cell in bronchoalveolar lavage fluid(BALF) was restrained by flavonoids in Fructus Paulowniae. In addition, the flavonoids in Fructus Paulown

5、iae could inhibit the overexpression of Eotaxin in the trachea epithelium.ConclusionThe results suggest that flavonoids in Fructus Paulowniae can antagonize airway inflammation by inhibiting the overexpression of the Eotaxin in trachea epithelium.Key words：Paulounia fortun Ei (Semsl.)Hemsl; 

6、60; Flavonoids;  Bronchia asthma     氣道炎癥是支氣管哮喘(asthma)的病理基礎，有多種炎癥細胞、炎癥介質(zhì)和細胞因子參與其炎癥過程1。研究發(fā)現(xiàn)2嗜酸性粒細胞（EOS）趨化聚集，在氣道炎癥的形成過程中起重要作用，Eotaxin是EOS的選擇性趨化劑3，也是EOS在哮喘發(fā)病過程中選擇性增加的原因。因此，調(diào)控Eotaxin的過度表達，抑制EOS在氣道內(nèi)的募集，消除氣道炎癥，對 治療 哮喘具有關(guān)鍵性意義。根據(jù) 文獻 報道4，5，少常用草藥泡桐花在支氣管哮喘的 臨床 治療上具有一定的效果；泡桐花浸膏能夠明顯改善哮喘豚鼠肺 組

7、織 的病理損傷，對哮喘豚鼠有顯著的治療作用；泡桐花主要成分6為揮發(fā)油、總黃酮、熊果酸等，其中總黃酮含量較豐富（3.081%）。我們以泡桐花總黃酮為研究對象，采用ig給藥途徑，結(jié)合圖象 分析 技術(shù)探討其抗哮喘作用及其機制。1  材料與方法 1.1  動物與分組健康白化豚鼠，雌雄各半，體重（200±50）g，由河南省實驗動物中心提供。隨機分為模型、陽性、空白對照組和泡桐花總黃酮大、小劑量組。10只/組。1.2  藥品與試劑卵白蛋白（ovalbumin，OA）：Sigma公司，Grade；Eotaxin一抗(BA1469，Rabbit anti-Eotaxin

8、)武漢博士德生物工程有限公司，相應二抗試劑盒及陽性對照片購自北京中山生物技術(shù)有限公司；醋酸地塞米松片，浙江仙琚制藥股份有限公司，批號051247。泡桐花總黃酮由鄭州大學藥學院生藥學研究室提供。1.3  動物誘喘及用藥參照宮兆華7方法，常規(guī)飼養(yǎng)觀察3 d無異常后，予10OA生理鹽水(N.S)溶液200 mg/kg ip致敏，并于當天開始按表1劑量給藥。第15天時，予5%OA的N.S溶液霧化吸入誘導哮喘發(fā)作。用哮喘發(fā)作（動物取出后的表現(xiàn)為咳嗽、呼吸困難、煩躁、抽搐、跌倒甚至死亡)的動物進行實驗。1.4  用藥過程中哮喘防治作用觀察用藥第5，12天及第15天，3次對豚鼠進行激發(fā)實

9、驗。予5%OA的N.S溶液霧化吸入激發(fā)10 s，封閉時間共20 s，觀察記錄各組動物哮喘嚴重程度，取第15天的引喘潛伏期（自霧化開始至豚鼠腹肌痙攣、腹部凹陷出現(xiàn)的時間作為引喘潛伏期，超過6 min者以360 s 計算 ）為 統(tǒng)計 指標。在第5，12天的激發(fā)過程中，先后有8只動物（大、小劑量組各2只，模型組3只，陽性組1只）因反應劇烈，搶救不及而窒息死亡。1.5  BALF（broncho alveolar lavag fluid BALF）的采集與細胞計數(shù)暴露豚鼠氣管肺，用絲線結(jié)扎右肺門處，行氣管插管灌洗左肺。灌入N.S 5 ml（抽吸2次）×2次，灌洗回收率大于80%，無菌離心（1 500 r/min×10 min），沉淀細胞以Hanks液處理后即刻在顯微鏡下計數(shù)細胞總數(shù)，細胞濃度調(diào)至2×106/ml，涂片，瑞氏染色，計數(shù)白細胞總數(shù)和EOS數(shù)。1.6  免疫組化Eotaxin檢測摘取右肺中葉，放入乙醇、醋酸和甲醛混合固定液中固定48 h。石蠟切片（4 m×3張）脫蠟至水，行免疫組化Eotaxin（EOS趨化性細胞因子）染色。免疫組化操作按說明書進行，DAB顯色。另設不加一抗的切片作陰性對照。每只動物在細支氣管黏膜各隨機