超離心技術(shù)簡(jiǎn)介

1、超離心技術(shù)簡(jiǎn)介超速離心機(jī)的離心速度為每分鐘 60000 轉(zhuǎn)或更多，離心力約為重力加速度的 500000 倍。在操作技術(shù)上，最常用的是差速離心和密度梯度離心。前者是交替使用低速和高速離心， 用不同強(qiáng)度的離心力使具有不同質(zhì)量的物質(zhì)分級(jí)分離的方法。 此法適用于混合樣品中各沉降系數(shù)差別較大組分的分離。 欲分離沉降系數(shù)接近的物質(zhì)， 則廣泛使用密度梯度離心法。這種方法使用一種密度能形成梯度（在離心管中，其密度從上到下連續(xù)增高） 又不會(huì)使所分離的生物活性物質(zhì)凝聚或失活的溶劑系統(tǒng)，離心后各物質(zhì)顆粒能按其各自的比重平衡在相應(yīng)的溶劑密度中形成區(qū)帶。一、差速離心差速離心是交替使用低速和高速離心， 用不同強(qiáng)度的離心力

2、使具有不同質(zhì)量的物質(zhì)分級(jí)分離的方法。 此法適用于混合樣品中各沉降系數(shù)差別較大組分的分離。離心速度較低，較大的顆粒沉降到管底，小的顆粒仍然懸浮在上清液中。 收集沉淀，改用較高的離心速度離心懸浮液，將較小的顆粒沉降， 以此類推，達(dá)到分離不同大小顆粒的目的。原理：不同沉降系數(shù)的組分在不同的離心速度下沉降的速度不同，以此用來(lái)分離亞細(xì)胞組份。 物體圍繞中心軸旋轉(zhuǎn)時(shí)會(huì)受到離心力的作用，離心力越大，被離心物質(zhì)沉降得越快。應(yīng)用：此法多用于分離細(xì)胞勻漿中的各種亞細(xì)胞組分， 用低滲勻漿、超聲破碎或研磨等方法可使細(xì)胞質(zhì)膜破損， 形成細(xì)胞核、線粒體、葉綠體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、 高爾基體、溶酶體等細(xì)胞器和細(xì)胞組分組成的混合精品文

3、檔勻漿，再通過(guò)差速離心將各種質(zhì)量和密度不同的亞細(xì)胞組分和各種顆粒分開。二、密度梯度離心密度梯度離心使用一種密度能形成梯度（在離心管中， 其密度從上到下連續(xù)增高）又不會(huì)使所分離的生物活性物質(zhì)凝聚或失活的溶劑系統(tǒng)，離心后各物質(zhì)顆粒能按其各自的比重平衡在相應(yīng)的溶劑密度中形成區(qū)帶。常用的密度梯度溶劑是蔗糖或氯化銫（CsCl）溶液。用蔗糖時(shí)，先將蔗糖溶液制成密度梯度溶液，再在其頂端加樣品。 離心后，如欲收集所分離的組分， 可在離心管的下端刺一小洞， 然后分部收集。如用 CsCl 這種密度大又?jǐn)U散迅速的溶劑系統(tǒng)時(shí)，可將樣品均勻地混合于溶劑中。離心達(dá)到平衡后， CsCl 溶液形成密度梯度，樣品中各組分也在相

4、應(yīng)密度處形成區(qū)帶。原理：離心介質(zhì)以連續(xù)密度梯度分布，通過(guò)離心、每種物種懸浮到與自己密度相當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)區(qū)。當(dāng)不同顆粒存在浮力密度差時(shí)，在離心力場(chǎng)下，在密度梯度介質(zhì)中，顆?；蛳蛳鲁两担蛳蛏细∑?，一直移動(dòng)到與它們各自的密度恰好相等的位置，在這里顆粒沒有重量， 不管離心多長(zhǎng)時(shí)間，它們?cè)僖膊灰苿?dòng)了，形成一系列密度區(qū)。從而使不同浮力密度的物質(zhì)得到分離。應(yīng)用：此法常用CsCl、蔗糖、甘油等做介質(zhì) , 一般應(yīng)用于物質(zhì)的大小相近，而密度差異較大時(shí)。常用來(lái)分離提取核酸、富含 AT和富含 GC的 DNA、亞細(xì)胞器和質(zhì)粒等。-2精品文檔發(fā)展前景：超離心技術(shù)是研究細(xì)胞及其組分最常用的分析方法，隨著學(xué)科的交叉與融合， 當(dāng)今幾乎沒有那些生物學(xué)問(wèn)題與細(xì)胞生物學(xué)無(wú)