復(fù)方癌痛平膠囊的提取工藝研究

1、復(fù)方癌痛平膠囊的提取工藝研究                    作者：張?jiān)?qiáng)，朱華旭，郭立瑋 【摘要】  目的優(yōu)選中藥臨床經(jīng)驗(yàn)方癌痛平膠囊的最佳提取精制工藝。方法采用正交實(shí)驗(yàn)法L9（34）分別以胡椒堿和重樓總皂苷的轉(zhuǎn)移率作為考察指標(biāo)，優(yōu)選癌痛平膠囊的制備過(guò)程中提取工藝。結(jié)果最佳醇提取工藝為70%的乙醇回流提取兩次，2 h/次，第1次加7倍量，第2次加5倍量；最佳水提取工藝為煎煮2次，2 h/次

2、，第1次加11倍量，第2次加10倍量。結(jié)論該制備工藝穩(wěn)定、合理、可行。 【關(guān)鍵詞】  復(fù)方癌痛平膠囊； 正交實(shí)驗(yàn)法； 胡椒堿； 重樓總皂苷Abstract:ObjectiveTo investigate the process of the optimal extraction for Compound Aitongping Capsules. Methods Factors for the ethanol extraction and water extraction were studied by orthogonal experiment designs with transi

3、sion efficiency of Piperine and Total polyphyllosides as index respectively. ResultsThe optimal ethanol extraction condition was adding 12 times amount of 70% alcohol and 2 hours for each time, then adding seven volume of 70% alcohol at first time and five volume of 70% alcohol at second time; the o

4、ptimal water extraction condition was adding 21 times amount of water and 2 hours for each time, then adding eleven folds of water at first time and ten folds of water at second time. ConclusionThe method is stable, reasonable and feasible.Key words:Aitongping capsules；  Orthogonal experiment;&

5、#160; Piperine；  Total polyphyllosides   復(fù)方癌痛平膠囊為治療癌性疼痛的中藥新制劑，由蚤休、蓽茇和鼠婦等藥物組成，具有解毒祛淤、化痰通絡(luò)等功效。臨床主要用于治療各類(lèi)癌性疼痛，總有效率為90%，療效肯定，已為臨床和藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究所證實(shí)。我們對(duì)原方采用醇提、水提等辦法，力求保持了原劑型水煎的特色，并經(jīng)精制除雜、在提取物中加適量輔料等工藝過(guò)程，精制成口服膠囊。具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容分為兩大部分：乙醇提取工藝的研究；方中主藥蓽茇，具有溫中散寒、下氣止痛等功效。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，蓽茇果實(shí)含胡椒堿，棕櫚酸，四氫胡椒酸，揮發(fā)油等成分，其主要生理活性成

6、分為胡椒堿1。另?yè)?jù)文獻(xiàn)報(bào)道，蓽茇中胡椒堿為生物堿類(lèi)化合物，幾不溶于水或石油醚，易溶于氯仿、乙醇或乙醚，可溶于苯或醋酸2，因此我們選擇乙醇對(duì)包括蓽茇在內(nèi)的幾味藥進(jìn)行了提取預(yù)試，并應(yīng)用高效液相色譜法對(duì)提取樣品中的胡椒堿進(jìn)行了測(cè)定3。在確定胡椒堿轉(zhuǎn)移率合理的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步采用正交實(shí)驗(yàn)，優(yōu)選最佳醇提取工藝46。水提取工藝的研究；方中君藥蚤休（重樓），具有清熱解毒，消腫止痛等功效。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，蚤休（重樓）主要藥效成分為重樓總皂苷7。另?yè)?jù)文獻(xiàn)報(bào)道，蚤休中重樓皂苷一般可溶于水，易溶于熱水、含水稀醇和熱甲醇，幾不溶或難溶于乙醚、苯等極性小的有機(jī)溶劑8，因此我們選擇水對(duì)包括蚤休在內(nèi)的幾味藥進(jìn)行了提取預(yù)試，并

7、應(yīng)用紫外分光光度法對(duì)提取樣品中的重樓總皂苷進(jìn)行了測(cè)定9。在確定重樓總皂苷轉(zhuǎn)移率合理的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步采用正交實(shí)驗(yàn)，優(yōu)選最佳水提取工藝。1  儀器與材料1  儀器美國(guó)Waters 515雙泵/2487檢測(cè)器高效液相色譜儀，Rheodyne進(jìn)樣器。色譜柱：反相C18柱Hedera ODS-2，編號(hào)C1806091411 （中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所制）。754型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司）。2  藥材購(gòu)于安徽省亳州市藥材公司，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室吳啟南教授鑒定。蓽茇為胡椒科植物Piper longum L.的干燥成熟果穗；蚤休（重樓）為百合科植

8、物云南重樓Paris polyphylla Smith var. yunnanensis(Franch.) Hand.-Mazz.或七葉一枝花Paris polyphylla Smith var.chinensis(Franch.) Hara的干燥根莖。3  對(duì)照品胡椒堿購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為0775-200203，供含量測(cè)定用。重樓皂苷、購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)分別為111590-200402、11591-200402，供含量測(cè)定用。4  試劑甲醇為色譜純，水為二次重蒸水(自制)，其他試劑均為分析純，購(gòu)自南京鵬程化學(xué)玻璃儀器有限公司。2  方

9、法2.1  醇提取工藝 為了優(yōu)化制備工藝，根據(jù)醇提部分主要影響因素，確定實(shí)驗(yàn)因素和水平。   根據(jù)表1，選擇L9(34)表正交進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。表1  醇提工藝因素水平（略）2.1.1  胡椒堿轉(zhuǎn)移率的測(cè)定色譜條件 流動(dòng)相：甲醇-水（77:23），檢測(cè)波長(zhǎng)343 nm，流速1.0 ml·min-1，靈敏度1.0 AUFS，柱溫30。2.1.2  對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取胡椒堿對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每毫升含100 g的溶液，即得。2.1.3  蓽茇藥材溶液的制備 本品中粉0.25 g

10、，精密稱(chēng)定，置于100 ml棕色容量瓶，加無(wú)水乙醇80 ml，超聲30 min，放置至室溫后，加無(wú)水乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)。2.1.4  供試品溶液的制備 依照癌痛平膠囊方中醇提藥味處方量，稱(chēng)取蓽茇等藥材160 g，共9份，按照表2進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，得到9份乙醇提取液，靜置，取上清液，離心15 min，轉(zhuǎn)速12 000 r/min。吸取離心后的上清液1 ml，置于5 ml棕色容量瓶中，用流動(dòng)相溶解稀釋至刻度，作為供試品溶液。表2  醇提工藝正交設(shè)計(jì)表（略）2.2  水提取工藝為了優(yōu)化制備工藝，根據(jù)水提部分主要影響因素，確定實(shí)驗(yàn)因素和水平。 

11、0; 根據(jù)表3，選擇L9（34）表正交實(shí)驗(yàn)。表3  水提工藝因素水平（略）2.2.1  重樓總皂苷轉(zhuǎn)移率的測(cè)定對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取重樓皂苷，對(duì)照品，分別加甲醇制成每毫升各含0.2 mg的溶液，即得。         2.2.2  蚤休藥材溶液的制備 稱(chēng)取單味蚤休藥材50 g，加21倍量水，一次煎煮3 h，測(cè)體積，留樣。量取離心過(guò)的藥材水提液40 ml，用水飽和的正丁醇液萃取3次，30 ml/次，收集正丁醇液，蒸干，用95%乙醇定容于25 ml量瓶中。精密吸取0.2 ml，

12、置具塞試管中，烘干，加入5%香草醛冰醋酸和高氯酸1 ml(1:4)，搖勻，密塞，85水浴20 min，冰浴5 min后，加入5 ml冰醋酸。放置110 min后，于465 nm下測(cè)定吸光度。2.2.3  陰性溶液的制備 稱(chēng)取除蚤休以外的其他各味藥各50 g，加21倍量的水，一次煎煮3 h，測(cè)體積，留樣。量取離心過(guò)的陰性水提液40 ml，按藥材溶液制備方法同法制得，測(cè)定吸光度。2.2.4  供試品溶液的制備 依照癌痛平膠囊方中水提藥味處方量，稱(chēng)取蚤休等藥材200 g，共9份，按照表4進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，得到9份水提液，離心，靜置，量取40 ml，按藥材溶液制備方

13、法同法制得，測(cè)定吸光度。表4  水提工藝正交設(shè)計(jì)（略）3  結(jié)果3.1  醇提工藝正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5，方差分析結(jié)果見(jiàn)表6。表5  醇提工藝正交實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及其計(jì)算分析結(jié)果（略）表6  醇提工藝方差分析結(jié)果（略）   從表6的方差分析結(jié)果可知，A因素是顯著性影響因素，B，C因素影響不是很明顯，由表5的直觀分析可以看出，K3aK2aK1a,故因素A選擇水平3，即乙醇濃度為70%；K3bK2bK1b,故因素B選擇水平3，即乙醇用量為12倍，第1次加7倍量，第2次加5倍量；K3cK2cK1c,因素C選擇水平3，即提取4 h,第1次2.0

14、 h,第2次2.0 h。   綜上所述，蓽茇等幾味藥材乙醇提取的最佳工藝為A3B3C3，即藥材加70%的乙醇回流提取兩次，2 h/次，第1次加7倍量，第2次加5倍量，濾過(guò)，濾液合并。3.2  水提工藝正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表7，方差分析結(jié)果見(jiàn)表8。表7  水提工藝正交實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及其計(jì)算分析結(jié)果（略）表8  水提工藝方差分析結(jié)果（略）   從表8的方差分析結(jié)果可知，B因素是顯著性影響因素，A、C因素影響不是很明顯，由表7的直觀分析可以看出，K3aK2aK1a,故因素A選擇水平3，即加水量為21倍；K3bK2bK1b,故因素B選擇水平3，

15、即煎煮時(shí)間為4 h；K2cK3cK1c,因素C選擇水平2，即煎煮2次。   綜上所述，蚤休等幾味藥材水提取的最佳工藝為A3B3C2，即藥材煎煮2次，2 h/次，第1次加11倍量，第2次加10倍量，濾過(guò)，濾液合并。3.3  驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)按照上述最佳乙醇提取工藝，平行3份，胡椒堿轉(zhuǎn)移率分別為90.87%，91.32%，91.44%，有效成分提取較完全；按照上述最佳水提取工藝，平行3份，重樓總皂苷轉(zhuǎn)移率分別為90.54%，90.60%，90.85%，有效成分提取較完全，說(shuō)明本研究所確定的醇提和水提工藝合理、可行。4  討論   蓽茇中胡椒堿為生

16、物堿類(lèi)化合物，幾不溶于水或石油醚，易溶于氯仿、乙醇或乙醚，可溶于苯或醋酸。預(yù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，以水作為溶劑，胡椒堿幾乎不能提出。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確立了復(fù)方癌痛平膠囊中蓽茇等主要藥味的醇提工藝。   蚤休中重樓皂苷一般可溶于水，易溶于熱水、含水稀醇和熱甲醇，幾不溶或難溶于乙醚、苯等極性小的有機(jī)溶劑。預(yù)試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，以水作為溶劑，重樓皂苷提取較完全。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確立了復(fù)方癌痛平膠囊中蚤休（重樓）等主要藥味的水提工藝。   復(fù)方中水提取部分有一步驟為醇沉去雜，該醇沉工藝為水提取液濃縮至每毫升含1.5 g生藥，醇沉至乙醇濃度為60%，靜止18 h?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1國(guó)家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會(huì).中華本草S.上海:上?？萍汲霭嫔纾?999（3）：2035.2北京醫(yī)學(xué)院，北京中醫(yī)學(xué)院.中草藥成分化學(xué)M.北京:人民衛(wèi)生出版社，1980：115.3國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(部)S.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：163.4張春華，周永治，劉延福.數(shù)理統(tǒng)計(jì)方法S.濟(jì)