腸胃寧膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究(一)

1、腸胃寧膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究(一)    【摘要】 目的研究腸胃寧膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法建立黃芩、甘草、白芍的薄層色譜鑒別方法，建立黃芩苷的高效液相色譜含量測定方法，流動相為甲醇-水-磷酸（45550.2），紫外檢測器，檢測波長為315 nm，流速為1 ml·min-1，理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計算應(yīng)不低于2 500。結(jié)果薄層色譜中能檢出黃芩、甘草、白芍，薄層色譜斑點清晰，陰性無干擾；黃芩苷在100 2 500 ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為 lgy = 0.933 2 lgx-2.864 1，r=0.999 2，平均加樣回收率為99.28，RSD為

2、1.77（n=5）。 結(jié)論方法簡便，可控，適用于腸胃寧膠囊的質(zhì)量控制。 【關(guān)鍵詞】 腸胃寧膠囊 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 薄層色譜 高效液相色譜 黃芩苷Abstract：ObjectiveTo study the quality standards for Changweining Capsules.MethodsThe TLC methods for identification of Radix Scutellariae, Radix Glycyrrhizae, Radix Paeoniae Alba were established. A simple HPLC was established for

3、the determination of baicalin. The mobile phase was methanol-water-phosphoric acid (45550.2). ResultsRadix Scutellariae, Radix Glycyrrhizae, Radix Paeoniae Alba could be detected. The blackspots were clear on the thin-layer chromatography and the negative sample was no interference. Baicalin showed

4、a linear relationship within the concentration range of 100 2500 ng, r=0.999 2. The average recovery was 99.28% and RSD was 1.77% (n=5).ConclusionThe method is suitable for the quality control of Changweining Capsules.Key words：Changweining； Quality standards； TLC； HPLC； Baicalin腸胃寧膠囊是河北醫(yī)科大學(xué)正在研究開發(fā)的五

5、類新藥，由黃芩、甘草（炙）、白芍等藥組成，具有清熱止痢、緩急止痛之功效，對于治療腸炎、痢疾、腹瀉等疾病有較好的療效，現(xiàn)已申報國家專利。為更好地控制該產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量，本實驗對腸胃寧膠囊中黃芩、甘草、白芍3味藥材進行薄層色譜鑒別，并采用高效液相色譜法對方中君藥黃芩中活性成分黃芩苷進行測定，為該制劑建立完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。1 儀器與試藥LC100液相色譜儀系列（美國Perkin-Elimer 公司）；Agilent hc-C18分析柱（4.6 mm×150 mm，5 m）； BS223S電子天平（德國Sartorius公司）；-2紫外分光光度儀（美國Perkin-Elemer公司）；K

6、Q-250E超聲波清洗器（昆州市超聲儀器有限公司）；PWUV超純水機（上海力康發(fā)展有限公司）。黃芩苷（批號：110715-200212），芍藥苷（批號：110736-200220），黃芩對照藥材（批號：120955-200305），白芍對照藥材（批號：120905-200106），甘草對照藥材（批號：120904-200410），均購自中國藥品生物制品檢定所；甘草酸（Sigma公司）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。腸胃寧膠囊：自制。2 方法與結(jié)果2.1 薄層色譜鑒別2.1.1 黃芩的鑒別取本品和陰性樣品各1 g，加甲醇20 ml，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水2

7、0 ml，用水飽和正丁醇萃取3次，20 ml/次，合并正丁醇液，用正丁醇飽和水洗滌3次，20 ml/次，棄去水洗液，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為供試品溶液和陰性溶液。另取黃芩對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述4種溶液各5 l，分別點于同一硅膠G薄層板上。以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5311）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液, 置紫外燈（365 nm）下檢視見圖1?？梢姽┰嚻啡芤荷V中，在與對照藥材及對照品色譜相應(yīng)的位置上，有相同顏色斑點，而陰性樣品無此斑點。2.1.2 甘草

8、的鑒別取甘草陰性樣品和對照藥材各1 g，按“2.1.1”項下的供試品溶液制備方法制備，作為甘草陰性溶液和對照藥材溶液。另取甘草酸對照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作為對照品溶液。吸取“2.1.1”項下的供試品溶液和甘草陰性溶液及對照藥材溶液、對照品溶液各5 l，分別點于同一硅膠GF254薄層板上。以正丁醇-醋酸-乙醇-水（6114）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（254 nm）下檢視見圖2?？梢姽┰嚻啡芤荷V中，在與對照藥材及對照品色譜相應(yīng)的位置上，有相同顏色斑點，而陰性樣品無此斑點。2.1.3 白芍的鑒別取本品和陰性樣品各1 g，加乙醇20 ml,超聲處理20 min，濾過，濾

9、液蒸干，殘渣加水20 ml溶解，用乙醚萃取2次，20 ml/次，棄去乙醚液，水層用水飽和的正丁醇萃取3次，20 ml/次，合并正丁醇液，用正丁醇飽和水洗滌3次，15 ml/次，分取正丁醇層，蒸干，殘渣加乙醇1 ml使溶解，作為供試品溶液和陰性溶液。另取白芍對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每毫升含1 mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述4種溶液各5 l，分別點于同一硅膠G薄層板上。以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-濃氨試液（8130.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105烘約5 min，日光下檢視見圖3?？梢姽┰嚻啡芤荷V中，在與對照藥材及對照品

10、色譜相應(yīng)的位置上，有相同顏色斑點，而陰性樣品無此斑點。圖1 腸胃寧膠囊中黃芩的薄層色譜圖（略）圖2 腸胃寧膠囊中甘草的薄層色譜圖（略）圖3 腸胃寧膠囊中白芍的薄層色譜圖（略）2.2 含量測定2.2.1 對照品溶液的制備精密稱取真空干燥至恒重的黃芩苷對照品適量，加無水乙醇制成每毫升含0.1 mg的溶液，即得。2.2.2 供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物，研細(過3號篩)，取細粉0.85 g，精密稱定，置50 ml量瓶中，加無水乙醇約20 ml，超聲提取20 min，取出，放冷，加無水乙醇至刻度，搖勻；精密吸取該溶液1 ml置50 ml容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 m）濾

11、過，即得。2.2.3 檢測波長的選擇取黃芩苷對照品適量，用無水乙醇溶解，制成溶液，在190800 nm 進行了光譜掃描，結(jié)果表明黃芩苷無水乙醇溶液在315 nm 左右有最大吸收，因此選擇315 nm作為測定的吸收波長。2.2.4 色譜條件色譜柱為Agilent hc-C18分析柱（4.6 mm×150 mm，5 m）；流動相為甲醇-水-磷酸（45550.2）；流速1 ml·min-1；檢測波長315 nm；柱溫40 ；理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計算應(yīng)不低于2 500。2.2.5 陰性實驗按照本品的處方、制法制備缺少黃芩的陰性樣品，精密稱取0.5 g，按供試品溶液的制備方法制成陰性

12、對照溶液。將黃芩苷對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液分別注入高效液相色譜儀中，進行測定，得到色譜掃描圖，見圖4?？梢姽┰嚻放c對照品溶液在相應(yīng)的位置上有相似的峰，而陰性對照則無明顯其它峰出現(xiàn)。2.2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取黃芩苷對照品4.98 mg，置50 ml量瓶中，加無水乙醇適量溶解并加至刻度,搖勻，得0.099 6 mg/ml黃芩苷對照品溶液。分別取1，5，10，15，18，20，25 l進樣測定，記錄峰面積。以進樣量(ng) 的對數(shù)(lgy)及對峰面積的對數(shù)(lgx)及進行線性回歸，得回歸方程為：lgy=0.933 2 lgx-2.864 1，r=0.999 2。結(jié)果表明，黃芩苷在

13、1002 500 ng范圍內(nèi)進樣量與峰面積線性關(guān)系較好。結(jié)果見圖4。圖4 黃芩苷對照品（a）、腸胃寧膠囊（b）、陰性對照（c）的HPLC圖譜（略）2.2.7 精密度實驗吸取對照品溶液及供試品溶液，各進樣5次，10 l/次，檢測結(jié)果得對照品的RSD值為0.23%，樣品的RSD值為0.93%，表明儀器的精密度良好。2.2.8 穩(wěn)定性實驗取批號060628樣品制備供試品溶液，放置0，2，4，8，12 h，分別精密量取10 l進樣，測定中黃芩苷的峰面積，計算得其RSD為1.10%，說明供試品溶液在制備后12 h內(nèi)穩(wěn)定。2.2.9 重復(fù)性實驗取批號060628的樣品5份，精密稱定， 分別制備供試品溶液，

14、進樣測定，計算得黃芩苷的平均含量為182.36 mg / g，RSD為2.00%，表明方法的重復(fù)性良好。2.2.10 加樣回收實驗取批號060628的樣品適量，共5份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別準(zhǔn)確加入10 ml 0.099 6 mgml黃芩苷對照品溶液，制備供試品溶液，進樣測定，計算得平均回收率為99.28%，RSD=1.77%。2.2.11 樣品測定取6批樣品，制備供試品溶液。分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 l，注入液相色譜儀，采用外標(biāo)法計算黃芩苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果見表1?？紤]到所購藥材中黃芩苷的差異，故將樣品中定量限度定為本品每片以黃芩苷計不得少于60 mg。表1 腸胃寧膠囊

15、中黃芩苷的測定結(jié)果（略）表中數(shù)據(jù)為每粒中含量3 討論按本品處方比例及制備工藝分別制備的不含黃芩、甘草、白芍的缺味樣品并制成陰性對照溶液，將它們分別與相應(yīng)的供試品同板進行薄層色譜實驗。結(jié)果表明各陰性對照均無相應(yīng)斑點，該3味藥的鑒別方法具有專屬性。含黃芩復(fù)方制劑中黃芩苷的測定方法已報道的有紫外分光光度法1，2、近紅外光譜法3、毛細管電泳法4、高效液相色譜法5，6。紫外分光光度法、近紅外光譜法操作較繁瑣，且影響結(jié)果的因素較多；毛細管電泳法雖然高效、簡便，但靈敏度較差、線性范圍較窄；因此選用高效液相色譜法對該樣品中黃芩苷進行測定。經(jīng)比較，采用甲醇-水-磷酸（45550.2）為流動相，檢測波長為315

16、nm，柱溫為40 時，能使峰得到較好分離，且基線穩(wěn)定。測定黃芩苷時，供試品的提取方法進行了索氏提取、超聲、熱回流3種提取方式比較，結(jié)果采用超聲法提取得到的樣品中黃芩苷的量比索氏提取和熱回流得到的都高，提取更完全，并且方法簡便、節(jié)省時間，故選擇超聲作為提取方法。采用超聲處理的方法，比較了甲醇、乙醇、75%乙醇對樣品中黃芩苷提取效果的影響，結(jié)果以乙醇所得提取率最高，因此選擇乙醇為提取溶劑。采用乙醇超聲提取，分別比較了提取5，10，20，30 min時樣品中黃芩苷的量，結(jié)果提取20 min得到的黃芩苷的量較高，故采用超聲提取20 min方法?！緟⒖嘉墨I】1 艾偉霞.消石利膽丸中黃芩苷的含量測定J.江漢大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2006,34(2):60.2 李云鵬,黃蕓,魏春娥,等.紫外分光光度法測定黃芩中總黃酮含量J.河北中醫(yī)藥學(xué)報, 2007,22