非細胞微生物的形態(tài)和結構

1、非細胞微生物的形態(tài)與結構第一節(jié) 病毒一、 概述（一）病毒病的表象認知時代郁金香碎色病植物病毒病 ；天花（水痘）；狂犬?。ǘ┯小懊　钡倪^濾器和病毒的發(fā)現1886年德國人Mayer A發(fā)現具有傳染性的煙草花葉病，但是他指出是由細菌引起的。1892年俄國Ivanovski D發(fā)現煙草花葉病病原體能通過細菌濾器，還能引起煙草花葉病。認為是由細菌產生的毒素造成的1898年荷蘭細菌學家Beijerinck M W對煙草花葉病病原體進行研究引起煙草花葉病的致病因子特點：能通過細菌過濾器；僅能在感染的細胞內繁殖；在體外非生命物質中不能生長由此Beijerinck M W下結論認為：致病因子不是細菌，而是比

2、細菌小的、具有傳染性的活的流質病毒1900年前后德國細菌學家Loeffler和Frosh發(fā)現引起?？谔阋叩牟≡部梢酝ㄟ^細菌濾器，從而再次證明伊萬諾夫斯基和貝杰林克的重大發(fā)現。1915年英國人 Twort、1917年法國人 dHerelle分別發(fā)現細菌（Shigella dysenteriae）病毒-噬菌體（三）病毒的本質1935年，美國生物化學家W M Stanley從患有花葉病的煙草的提純汁液中分析出一種蛋白晶體，將這種晶體再溶解后，保持了它的致病性，從而認為病毒是一種蛋白質。英國的Bawden和Pirie提出疑問，因為他們發(fā)現煙草花葉病毒的提純液及晶體中還含有相當量的硫和磷，磷是蛋白質沒

3、有而核酸有的。Bawden等證明煙草花葉病毒的本質為核蛋白電鏡的貢獻20世紀30年代后期電鏡的發(fā)展，可以直接觀察到病毒顆粒的形態(tài)。1940年Kausche首先用電鏡觀察到煙草花葉病毒顆粒。證明病毒顆粒的內部是核酸，外面包裹著蛋白質，有些病毒顆粒外邊被囊膜包裹著 病毒是由蛋白質和核酸兩個部分組成。隨后的研究又證實核酸可分為RNA和DNA兩類。1936年后經過反復試驗證明核酸是病毒感染、致病及復制的主體。施拉姆（Schramm）等研究者也證明了T噬菌體侵入細菌內部的是其核酸DNA，而留在細菌外壁的是其蛋白質外殼。進一步的研究發(fā)現，有些病毒除含有核酸和蛋白質外，還含有一定量的脂類物質及碳水化合物（四

4、）病毒的定義和特點定義：病毒是一類比較原始的、有生命特征的、能夠自我復制和嚴格細胞內寄生的非細胞生物。特點（初步認識）：形態(tài)及其微小，一般能通過細菌濾器，必須在電鏡下才能觀察； 有細胞構造，主要成分僅為核酸和蛋白質；一種病毒只含一種核酸，DNA或RNA；在離體條件下，能以無生命力的大分子狀態(tài)存在，并可長期保持其侵染活力。（亞病毒）：有的病毒甚至沒有蛋白質，只含有具有單獨侵染性的較小型的核糖核酸（RNA）分子類病毒；有的病毒只含有不具備侵染性的RNA擬病毒；有的病毒沒有核酸而有感染性的蛋白質顆粒朊病毒二、 病毒的形態(tài)結構和化學組分病毒顆粒（病毒粒子）：指成熟的、結構完整的、具有侵染性的單個病毒個

5、體。病毒的殼體有三種結構類型 ：1螺旋對稱殼體 亞基有規(guī)律地沿著中心軸（核酸）呈螺旋排列，進而形成高度有序、對稱的穩(wěn)定結構。病毒顆粒為直桿狀、彎曲桿狀和線狀等很多植物病毒為堅硬的桿狀；一些植物病毒和噬菌體為軟而能彎曲的纖維狀；昆蟲核型多角體病毒多為桿狀2二十面對稱殼體 蛋白質亞基圍繞具立方對稱的正多面體的角或邊排列，進而形成一個封閉的蛋白質的鞘。病毒顆粒為球狀大部分動物病毒和少數植物病毒呈球狀3復合對稱殼體 包裝有病毒核酸的頭部通常呈二十面體對稱，尾部呈 螺旋對稱。 病毒為蝌蚪狀、磚塊狀。（噬菌體為蝌蚪形。）某些動物病毒呈復雜形狀，如豆病毒呈磚塊狀病毒的結構：核殼（nucleocapsid）：

6、蛋白質殼體 + 核酸（核心），又稱核衣殼。裸露病毒顆粒：僅由核衣殼構成的病毒顆粒具包膜病毒顆粒：核衣殼外具一層脂蛋白膜，由宿主細胞膜衍生而來病毒以出芽方式成熟時獲得作用：保護病毒核殼；啟動病毒感染；病毒的附屬物刺突某些昆蟲病毒核衣殼外面有很多蛋白質晶體包被，形成多角形的包涵體，呈四面、長方、六面和十二面等，所以稱為多角體病毒。病毒的化學組成：核酸；毒粒 蛋白質； 基本化學組成 病毒顆粒在化學上表現為核蛋白 脂類；碳水化合物病毒的核酸：核酸是病毒的遺傳物質；一種病毒的毒粒只含有一種核酸：DNA或RNA （單鏈DNA（ss DNA）；雙鏈DNA（ds DNA）單鏈RNA（ss RNA）；雙鏈RNA

7、（ds RNA）； ） 非結構蛋白 病毒基因組編碼的，在病毒復制過程中產生并具有一定功能，但并不結合于毒粒中的蛋白質 病毒蛋白質 結構蛋白 構成一個形態(tài)成熟的有感染性的病毒顆粒所必需的蛋白質 殼體蛋白； 保護作用包膜蛋白； 啟動感染（決定感染的特異性） 存在于毒粒中的酶：參與病毒的入侵或復制 （如T4噬菌體的溶菌酶、一些病毒的逆轉錄酶等） 病毒的脂類：許多病毒的包膜內存在有脂類化合物（磷脂、脂肪酸、甘油三酸脂和膽固醇等）。這些脂類幾乎都是由病毒粒子在細胞內成熟，在細胞膜處以葡生方式釋放，直接從寄主細胞膜上得到。病毒脂類存在與病毒的吸附和侵入有關病毒的碳水化合物：有的病毒還含有少量的碳水化合物有

8、包膜病毒中碳水化合物以寡糖側鏈的形式與蛋白質結合形成包膜糖蛋白。 三、病毒的繁殖方式病毒的復制 病毒生長繁殖的特點：嚴格細胞內寄生物，只能在活細胞內繁殖病毒的復制：病毒感染敏感宿主細胞后，病毒核酸進入細胞，通過其復制與表達產生子代病毒基因組和新的蛋白質，然后由這些新合成的病毒組分裝配（assembly）成子代毒粒，并以一定方式釋放到細胞外。病毒的這種特殊繁殖方式稱做復制.病毒復制過程：吸附：病毒吸附蛋白（VAP）一般由衣殼蛋白或包膜上的糖蛋白突起充當。細胞表面受體（也稱為病毒受體）則為有效結合病毒粒子的細胞表面結構。§ 大多數噬菌體的病毒受體為細菌細胞壁上的磷壁酸分子、脂多糖分子以及

9、糖蛋白復合物；有的則位于菌毛、鞭毛或莢膜上。§ 大部分動物病毒的病毒受體為鑲嵌在細胞膜脂質雙分子層中的糖蛋白，也有的是糖脂或唾液酸寡糖苷。§ 植物病毒迄今尚未發(fā)現有特異性細胞受體，其進入植物細胞的機制是通過傷口或媒介傳播。病毒的細胞受體具有種系和組織特異性，決定了病毒的宿主譜。§ 不同種屬的病毒其細胞受體不同；§ 同種不同型的病毒、同型不同株的病毒細胞 受體不同；§ 有些不同種屬的病毒卻有相同的細胞受體，其吸附和感染可對其 它病毒的感染產生干擾。VAP與病毒受體的結合需要一定的溫度條件。在0-37內溫度越高病毒吸附效率也越高。病毒吸附細胞的過程

10、可在幾分鐘到幾十分鐘的時間內完成。侵入：病毒吸附后幾乎立即發(fā)生侵入侵入是依賴于能量的感染步驟不同的病毒-宿主系統(tǒng)病毒侵入機制不同病毒進入宿主細胞的方式：病毒直接進入；細胞內吞（胞吞方式）；膜融合；注射式侵入；特殊的侵入方式動物病毒侵入方式：裸露的病毒直接進入方式；毒粒包膜與細胞質膜的融合：膜融合是有包膜病毒侵入過程中，病毒包膜與細胞膜融合的一種侵入方式。 細胞的內吞功能：細胞內吞是動物病毒的常見侵入方式。經細胞膜內陷形成吞噬泡，使病毒粒子進入細胞質中。 有尾噬菌體侵入方式：通過尾部刺突固著于細胞；尾部的酶水解細胞壁的肽聚糖，是細胞壁產生小孔；尾鞘收縮，核酸通過中空的尾管壓入胞內，蛋白質外殼留在

11、胞外；植物病毒侵入方式： 通過天然的外壁孔侵入；通過植物細胞間的胞間連絲侵入細胞；通過因人為地機械損傷所形成的微傷口進入細胞；靠攜帶有病毒的媒介，主要靠是有吮吸式口器的昆蟲取食將病毒帶入細胞。脫殼：脫殼是指病毒感染性核酸從衣殼內釋放出來的過程。有包膜病毒脫殼包括脫包膜和脫衣殼兩個步驟；無包膜病毒只需脫衣殼脫殼方式：以內吞方式或直接進入細胞的病毒粒子，經蛋白酶的降解，先后脫包膜和衣殼。以膜融合方式侵入的病毒，其包膜在與細胞膜融合時即已脫掉，核衣殼被移至脫殼部位并在酶的作用下進一步脫殼，病毒核酸游離并進至細胞的一定部位進行生物合成。注射式侵入的噬菌體和某些直接侵入的病毒可以直接在細胞膜或細胞壁表面

12、同步完成侵入和脫殼病毒脫殼必須有酶脫殼酶的參與，脫殼酶來自宿主細胞，有的為病毒基因編碼。生物合成：病毒借助宿主細胞提供的原料、能量和場所合成核酸和蛋白質，期間所需的多數酶也來自宿主細胞。在病毒進入宿主細胞后生物合成階段，胞漿中無病毒顆粒，稱為隱晦期（eclipse）病毒大分子的合成：病毒基因組進入胞內宿主細胞的代謝發(fā)生改變病毒利用宿主的生物合成機構和場所，使病毒核酸表達和復制，產生大量的病毒蛋白質和核酸。病毒基因組的表達與復制存在著強烈的時序性 病毒生物合成的第一步是病毒mRNA的合成病毒復制所需要的病毒特異性酶蛋白及蛋白質外殼的合成（5種核酸，6條途徑） 裝配（成熟、形態(tài)發(fā)生）：新合成的毒粒

13、結構組分組裝成完整的病毒顆粒，稱做病毒的裝配，亦稱成熟（maturation）或形態(tài)發(fā)生（morphogenesis）。絕大多數DNA病毒在細胞核內組裝；RNA病毒與痘病毒類則在細胞質內組裝。無包膜病毒組裝成核衣殼即為成熟的病毒粒子病毒的早期蛋白，即非病毒結構成分不組裝入病毒，殘留在感染細胞中。T4噬菌體的裝配：T4噬菌體的裝配是一個極為復雜的自我裝配的過程 P185毒粒的釋放：裸露的病毒毒粒和有包膜的病毒毒粒釋放的機制有所不同:裸露病毒經常裂解宿主細胞而被釋放有包膜病毒的包膜形成和釋放通常同時進行，宿主細胞在一段時間可以持續(xù)釋放病毒有包膜的動物病毒是在從宿主細胞核芽出或細胞質膜芽出的過程中裹

14、上包膜而形成包膜病毒有包膜病毒的裝配與釋放有時也是同時完成的大多數噬菌體都是以裂解細胞方式釋放 絲桿噬菌體（如M13或fd）不殺死細胞，毒粒以分泌方式不斷從受染細胞中釋放，并同時完成毒粒的組裝。感染周期或復制周期：從單個病毒吸附開始至所有病毒釋放，此過程稱為感染周期或復制周期。三、 病毒的培養(yǎng)和純化1） 病毒的培養(yǎng)二元培養(yǎng)物法1、 動物病毒培養(yǎng)方法：雞胚培養(yǎng)法動物細胞（組織）培養(yǎng)技術2、植物病毒培養(yǎng)方法植物組織培養(yǎng)方法：植物病毒敏感植物葉片產生壞死斑或者枯斑噬菌體的培養(yǎng)方法： 營養(yǎng)液細菌培養(yǎng)液變清亮 噬菌體細菌培養(yǎng)物 營養(yǎng)瓊脂平板細菌平板成為殘跡平板 若是噬菌體樣經過適當稀釋再接種細菌平板，經

15、過一定時間培養(yǎng)，在細菌菌苔上可形成圓形局部透明區(qū)域，即噬菌斑（plague） 2） 病毒的培養(yǎng)特征群體特征空斑：是由動物病毒在宿主單層細胞培養(yǎng)物上所形成的局部病損區(qū)域?？莅撸菏怯芍参锊《驹谥参锶~片上所形成的病斑。噬菌斑：是指病毒侵染細菌在細菌菌苔上所形成的負菌落（空斑）。包涵體：是病毒侵染動植物細胞，在細胞內所形成的一種群體特征。也就是存在于動植物細胞中的病毒3）病毒的純化 病毒是有感染性的生物體制備物應保持其感染性純化標準 病毒具有化學大分子的屬性制備物的理化性質應具有均一性 主要化學組成為蛋白質蛋白提純方法方法 （鹽析、等電點沉淀、有機溶劑沉淀、凝膠層析、離子交換等） 具有一定的大小、形狀

16、和密度：差速離心；梯度離心（超速離心）常用的病毒純化方法：1、差速和密度梯度離心法（differential and density gradient centrifugation）2、病毒沉淀法（precipitation of virus）：過飽和硫酸銨3、雜質變性法（denaturation of contaminants）：加熱或改變pH使雜質變性；丙酮、氯仿等有機溶劑使蛋白質等雜質變性4、細胞組分的酶消化法（enzymatic digestion of cell constituents）：核酶、蛋白酶降解細胞中的核酸核蛋白質。病毒對其具有較強抗性。五、病毒的分類第二節(jié) 噬菌體一、

17、概述1、噬菌體的發(fā)現1915年英國人Twort培養(yǎng)葡萄球菌時發(fā)現菌落出現透明斑。1917年法國人dHerelle觀察到痢疾桿菌的新鮮液體培養(yǎng)物能被加入的某種污水的無細菌濾液所溶解，培養(yǎng)物由混濁變澄清。溶菌因子噬菌體2、 噬菌體的概念是侵染細菌、放線菌、藍細菌等原核微生物的病毒。20世紀60 年代后發(fā)現一些真菌都有噬菌體的存在：酵母菌、青霉菌、曲霉菌、交鏈孢菌、鐮刀菌等3、 噬菌體的分布土壤、肥料、糞便、腐爛的有機物、污水（包括下水道污水）、發(fā)酵工廠排出的廢液、周圍空氣二、 噬菌體的形態(tài)結構和化學組成E. coli T4噬菌體結構 P172化學組成：蛋白質，核酸（dsDNA,ssDNA,ssRN

18、A,dsRNA）三、 噬菌體的繁殖根據噬菌體與宿主細胞間的關系，將噬菌體分為：烈性噬菌體（或稱毒性噬菌體）；溫和噬菌體（一）烈性噬菌體噬菌體侵入細菌細胞后，在宿主細菌細胞內增殖，產生大量子噬菌體，并通過裂解細菌細胞而釋放出來的噬菌體，被稱為烈性噬菌體。 T4噬菌體是一個典型的烈性噬菌體。噬菌體繁殖的5個階段：吸附、侵入、增殖（復制與生物合成）、成熟（裝配）、裂解釋放吸附： 可逆吸附，無特異性（非細胞顆粒也可吸附）：隨機碰撞而接觸（靜電引力或氫鍵） 噬菌體粒子 特異性，不可逆吸附，啟動噬菌體感染的第一階段：噬菌體表面蛋白與細菌受體的結合吸附是噬菌體與菌體表面受體發(fā)生特異性結合的過程，其特異性取決

19、于噬菌體蛋白與宿主菌表面受體分子結構的互補性。宿主菌表面特異性受體：E. coli對T3、T4、T7的特異性受體是脂多糖層；E. coli對T2、T6的特異性受體是脂蛋白層；噬菌體的吸附器官：尾絲、頂角上的衣殼粒不同噬菌體吸附于宿主細胞的部位不同：E. coli T系噬菌體以其尾部的末端吸附于宿主細胞表面；E. coli M13噬菌體吸附于宿主細胞的性纖毛末端；還有噬菌體吸附于E. coli性纖毛的側面 影響噬菌體吸附的因素：噬菌體數量、陽離子濃度、溫度、輔助因子（Trp、Biotin）感染復數（度）：每一敏感細胞所能吸附的相應噬菌體的數量有尾噬菌體的侵入：注射方式將噬菌體核酸注入細胞（同上）

20、無尾噬菌體的侵入：V 絲狀噬菌體M13：將核酸注入宿主細胞內，而留下90蛋白質在細胞外；V 絲狀噬菌體f1、fd：為ssDNA的雄性噬菌體，只能侵入雄性菌株，通過雄性菌株的性纖毛將其DNA轉入到菌體內；V 人工分離的裸露的DNA也能進入菌體內；自外裂解：如果大量噬菌體在短時間內吸附于同一細胞上，使細胞壁產生許多小孔，也可引起細胞立即裂解，但并未進行噬菌體的增殖，這種現象稱為自外裂解。復制（增殖）：核酸復制、蛋白質生物合成兩種不同的復制情況：噬菌體核酸侵入宿主細胞后，立即破壞細菌的核質體，細菌的合成作用停止，而以噬菌體核酸為模板利用宿主RNA聚合酶、核糖體等合成噬菌體所需的酶類；噬菌體核酸侵入宿

21、主細胞后，還需要依賴宿主細胞提高的某些酶類，因此噬菌體并不破壞宿主細胞的核質體，從而使宿主細胞能夠繼續(xù)合成某些蛋白質裝配：T4噬菌體的裝配是一個極為復雜的自我裝配的過程 釋放：大多數噬菌體都是以裂解細胞方式釋放 T4噬菌體釋放過程涉及多個基因：一個基因指導合成內溶菌素，它攻擊細胞壁肽聚糖。一個基因指導合成噬菌體蛋白穿孔素(holin)，它破壞質膜，使呼吸停止，并允許內溶菌素攻擊肽聚糖，推測它使膜形成孔洞毒性噬菌體的一步生長（復制周期、裂解性周期、增殖周期、溶菌性周期）：T4噬菌體的生命周期：一步生長曲線（onestep growth curve）P176定義：定量描述烈性噬菌體生長規(guī)律的實驗曲

22、線。噬菌斑和噬菌體效價的測定：噬菌斑(plaque)：在固體培養(yǎng)基上，若用適量的噬菌體和宿主菌液混合后接種培養(yǎng)，培養(yǎng)基表面可有透亮的溶菌空斑出現。一個空斑系由一個噬菌體復制增殖并裂解細菌后形成，稱為噬菌斑。不同噬菌體噬斑的形態(tài)與大小不盡相同噬菌斑作用：菌株鑒定；噬菌體的檢出、分離和純化；進行噬菌體的計數效價(噬菌斑形成單位數,plaqueforming unit，pfu、感染中心數)：表示每毫升試樣種所含有的具侵染性的噬菌體粒子數。效價測定方法：試管法；瓊脂平板法（單層瓊脂法，雙層瓊脂法）；玻片快速法；電鏡直接計數法噬菌體檢查和效價測定方法雙層瓊脂法：噬菌體檢查和效價測定方法單層瓊脂法：噬菌體

23、檢查和效價測定方法平板點滴法：效價計算公式：效價噬菌斑數目/（噬菌體稀釋液體積×噬菌體稀釋度）成斑率（efficiency of plating，EOP）：同一樣品根據噬菌斑計算出來的效價與用電鏡計算出來的效價之比。一步生長曲線測定方法：P1761、用噬菌體的稀釋液感染高濃度的宿主細胞；2、數分鐘后，加入抗噬菌體的抗血清（中和未吸附的噬菌體）；3、將上述混合物大量稀釋，終止抗血清的作用和防止新釋放的噬菌體感染其它細胞；4、保溫培養(yǎng)并定期檢測培養(yǎng)物形成噬菌斑數目（對噬菌體含量進行計數）；5、以感染時間為橫坐標，以噬菌斑數目為縱坐標，繪制出噬菌體特征性的繁殖曲線一步生長曲線；潛伏期：噬菌

24、體吸附到細胞到釋放出新噬菌體的時間隱蔽期：噬菌體在受染細胞內消失到細胞內出現新的噬菌體時間在潛伏期的前一段，受染細胞內檢測不到感染性噬菌體，后一階段，感染性噬菌體在受染細胞內的數量急劇增加。 隱蔽期噬菌體在細胞內存在的動力學曲線呈線性函數，而非指數關系，從而證明子代噬菌體顆粒是由新合成的噬菌體基因組與蛋白質經裝配成熟，而不是通過雙分裂方式產生的。 裂解量：每個受染細胞所產生的子代噬菌體顆粒的平均數目。其值等于潛伏期受染細胞的數目除以穩(wěn)定期受染細胞所釋放的全部子代噬菌體數目： 穩(wěn)定期噬菌體效價與潛伏期噬菌體效價之比。 噬菌體復制（繁殖）：（一步生長曲線） 1、吸附期； 游離的噬菌體吸附到宿主細胞

25、 2、潛伏期； 從噬菌體吸附到細胞到釋放出新噬菌體的最短時期 3、裂解期； 隨著菌體不斷破裂，新噬菌體數目增加，直到最高值 研究一步生長曲線意義了解噬菌體在菌體內的最短潛伏期和平均收獲量（裂解量、爆破量）反映噬菌體的重要特征參數之一裂解量：是指每個被感染的細菌釋放新的噬菌體的平均數。裂解量=裂解期平均噬菌斑數/潛伏期平均噬菌斑數了解理化因素的變化對噬菌體感染循環(huán)時間的影響，以及每個被感染菌釋放噬菌體的影響。（二）溫和噬菌體感染宿主細胞后不能完成復制循環(huán)，噬菌體基因組長期存在于宿主細胞內，沒有成熟噬菌體產生。所以溫和噬菌體也稱溶源性噬菌體（lysogenic phage）這一現象稱做溶源性（ly

26、sogeny）現象溫和噬菌體的溶源性反應（繁殖） ：在原噬菌體階段，噬菌體的復制被抑制，宿主細胞正常地生長繁殖，而噬菌體基因組與宿主細菌染色體同步復制，并隨細胞分裂而傳遞給子代細胞。細胞中含有以原噬菌體狀態(tài)存在的溫和噬菌體基因組的細菌稱做溶源性細菌 ；整合于細菌染色體或以質粒形成存在的溫和噬菌體基因組稱做原噬菌體（prophage、前噬菌體） 溶源性細菌的基本特性：特性1：溶源性是溶源性細菌的一個及其穩(wěn)定的遺傳特性特性2：自發(fā)裂解：溶源性細菌的自發(fā)裂解特性3：誘發(fā)裂解：H2O2、UV、X射線、氮芥子氣、乙酰亞胺、絲裂霉素C等特性4：免疫性：被溫和噬菌體感染后形成的溶源性細菌具有“免疫性”，即其

27、它同類噬菌體雖然可以再次感染該細胞，但不能增殖，也不能導致溶源性細菌裂解。特性5：溶源性細菌的復愈：溶源性細菌有時消失了其中的原噬菌體，變成非溶源性細胞，這時既不發(fā)生自發(fā)裂解現象，也不發(fā)生誘發(fā)裂解現象。稱為溶源性細菌的復愈后非溶源化。特性6：溶源轉變：原噬菌體引起的溶源性細菌除免疫性外的其他的表形改變，包括溶源菌細胞表面性質的改變和致病性轉變被稱為溶源轉變(lysogenic conversion)。例如：白喉桿菌只有在含有特定類型的原噬菌體時才能產生白喉毒素，引起被感染機體發(fā)病。外界因素如紫外線可引起宿主的染色體的破壞，宿主產生應急反應合成具有DNA重組活性的RecA蛋白，導致cI的被降解，

28、噬菌體進入裂解循環(huán)。 誘發(fā)裂解是檢查是否存在溶原性細菌的有效方法溶源性細菌的檢定方法：需要一種敏感的、非溶源性的菌株作為指示菌；對待測的溶源性菌株進行誘發(fā)裂解；培養(yǎng)物過濾，濾液與指示菌混合，觀察是否形成噬菌斑；結果：有噬菌斑：為溶源菌；無噬菌斑：不是溶源菌溫和噬菌體的存在狀態(tài)：游離的、具有感染性的病毒粒子；原噬菌體；營養(yǎng)期噬菌體決定溫和噬菌體三種存在狀態(tài)的因素：細菌和噬菌體本身的遺傳特性、溫度、宿主生理狀況、菌種、每個細菌所接受的噬菌體的數目溶源性存在：大腸桿菌、假單胞菌、沙門氏菌、鏈球菌、芽孢桿菌、棒桿菌、弧菌、極毛桿菌溶源性菌株的命名：E. coli K12 （） 溫和噬菌體的種類：按照溫

29、和噬菌體與細菌DNA結合部位不同可分為兩類：只有一個結合部位：附著在宿主細胞膜的某一位點，或具有多個或不定的接合位點：四、 噬菌體與發(fā)酵工業(yè)噬菌體對發(fā)酵工業(yè)的危害：發(fā)酵周期延長、發(fā)酵液變清、發(fā)酵產物難以形成、嚴重時倒罐、停產等噬菌體的分離與檢查：分離方法： 雙層瓊脂平板方法；單層瓊脂平板方法；載玻片快速法噬菌體防治：避免噬菌體污染，應樹立“預防為主”的觀念。1）決不使用可疑菌種；2）嚴格保持環(huán)境衛(wèi)生，決不隨意丟棄、排放生產菌種的菌液；3）注意通氣質量，嚴格過濾；4）不斷篩選抗噬菌體菌種；5）經常輪換生產菌種；6）嚴格會客制度。五、 噬菌體的其他利用測定輻射劑量，在分子生物學中的應用第三節(jié) 亞病毒一、類病毒具有侵染性的RNA分子（一）類病毒的發(fā)現馬鈴薯紡錘形塊莖?。翰痪叩鞍踪|衣殼，僅有RNA組成，馬鈴薯紡錘形塊莖病類病毒（二）類病毒定義只含RNA一種核酸的最小的，專性細胞內寄生的分子生物（三）類病毒分布只在植物體中發(fā)現類病毒引起的植物病害番茄簇頂病、柑桔裂皮病、