天麻復(fù)方降壓膠囊中天麻有效成分提取工藝研究

1、天麻復(fù)方降壓膠囊中天麻有效成分提取工藝研究陳陸，馬超英，李芬，鄧月婷，蔣合眾（西南交通大學(xué)藥學(xué)院，四川 峨眉 614202）摘要： 目的 考察影響天麻降血壓有效成分的提取因素。 方法 采用單因素比較法和正交設(shè)計法對天麻降壓有效成分的提取工藝進(jìn)行優(yōu)選。 結(jié)果 確定天麻的提取工藝為：用12，10，6倍量70%乙醇為提取溶劑，提取3次，前2次提取時間為1h，后1次為30min。 結(jié)論 該實驗確定的天麻提取工藝方法合理，穩(wěn)定可行。關(guān)鍵詞： 天麻素；多糖；正交試驗 Study on Extraction Process of Anti-hypertensive Activities of Gastrod

2、ia elata Bl.CHEN Lu, MA Chao-ying, LI Fen, DENG Yue-ting, Jiang He-zhong (Pharmacy School of Southwest Jiaotong University, Emeishan City, Sichuan 614202, China)Abstract: Objective To study the extraction conditions of anti-hypertensive activities in Gastrodia elata Bl. Methods The optimum extractio

3、n process of anti-hypertensive activities from Gastrodia elata Bl. was carried out through single comparative and orthogonal law. Results The extraction technology is to decoct Gastrodia elata Bl. with 70 percent alcohol for 3 times, with 12,10,6 times solvent each time and for 1h for the first 2 ti

4、mes and 0.5h for the last time. Conclusion The extraction process of Gastrodia elata Bl. is reasonable, stable and easy to operate.Key words: Gastrodin; Polysaccharides ; Orthogonal test 天麻為蘭科植物天麻Gastrodia elata Bl.的干燥塊莖，傳統(tǒng)上作為止痛、鎮(zhèn)靜劑用于治療癲癇、眩暈、風(fēng)濕、高血壓等疾病基金項目：四川省峨眉山市2007年重點科技項目“天麻復(fù)方降壓膠囊的研制”(No.2007-1-30

5、)。作者簡介：陳陸（1983-），男（漢族），山東棗莊人，現(xiàn)為西南交通大學(xué)生物工程學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)專業(yè)在讀碩士研究生,主要從事中藥制劑研究工作。通訊作者簡介：馬超英（1958-），男（漢族），山西黎城人，碩士，教授，主要從事中藥新藥開發(fā)方面的研究?，F(xiàn)代研究表明，天麻含有天麻素、香草醛、香草醇、琥珀酸、維生素、生物堿、多糖等物質(zhì)，其中天麻素為主要活性成分，有明顯降血壓作用；另外，天麻多糖能增加心肌營養(yǎng)和腦血流量，提高細(xì)胞的免疫功能，有助于高血壓疾病的治療2?，F(xiàn)以浸膏收率、天麻多糖含量和天麻素含量為主要指標(biāo)，考察提取條件，篩選出適合制備天麻復(fù)方降壓膠囊的天麻提取條件。1材料與儀器天麻藥材購

6、于四川峨眉仙山中藥科技發(fā)展有限公司；無水葡萄糖對照品由中國藥品生物制品檢驗所提供，批號：11；天麻素對照品由中國藥品生物制品檢驗所提供，批號：11；島津UV300紫外分光光度計；島津LC-20AT高效液相色譜儀；乙腈為色譜純，濃硫酸、苯酚、乙醇為分析純。2方法與結(jié)果 2.1天麻提取方式的考察稱取天麻粗顆粒25g三份，分別加入70%乙醇200ml采用超聲、冷凝回流和70浸漬的方式提取1h，提取液紗布過濾后定容至1000ml，按照2.3項下方法測定浸膏收得率、天麻素含量和天麻多糖含量，結(jié)果見表1。結(jié)果表明，冷凝回流對天麻的提取效率最高，實驗采用此方式。表1 提取方式考察表提取方式干浸膏收率多糖含量

7、天麻素含量超聲提取5.00%2.45%0.230%冷凝回流提取5.30%2.36%0.247%70浸漬提取3.23%1.43%0.202%2.2提取工藝的正交實驗研究2.2.1因素水平的選擇以對提取效果影響最顯著的因素：醇濃度（A）、溶劑量（B）、提取次數(shù)（C）、提取時間（D）4個因素進(jìn)行考察，各取3個水平，進(jìn)行L9（34）正交實驗，以浸膏收率、多糖含量、天麻素含量為指標(biāo)進(jìn)行綜合評分，并結(jié)合生產(chǎn)成本、生產(chǎn)周期等因素綜合評價，優(yōu)化天麻提取工藝。實驗以25g為研究量，因素水平設(shè)計見表2。表2 因素水平表水平 A 醇濃度 B 溶劑量（ml/g） C 提取次數(shù)（n） D 提取時間（h）170%12,1

8、0,1032250%10,8,821.5330%8,6,6112.2.2正交實驗方法與結(jié)果取天麻粗顆粒按表2設(shè)定的正交實驗方案冷凝回流提取。各組提取液紗布過濾后，均濃縮至100ml，再加水定容至1000ml，作為供試品。按照2.3項下方法測定浸膏收得率、天麻多糖含量和天麻素含量，結(jié)果見表3。表3 正交實驗結(jié)果試驗號考 察 因 素浸膏收率天麻素含量多糖含量綜合評分ABCDY1（%）Y2（%）Y3（%）Y1111112.400.4573.7498.51212228.030.3562.7376.36313335.190.2382.3653.354212312.430.3883.3287.385223

9、16.200.2141.9450.126231211.970.2933.2174.36731327.920.0961.3435.128321314.330.2144.0468.109332111.260.1793.5861.2276.07373.67080.32369.95070.62064.86074.98761.94754.81362.97746.19769.610R21.26010.69334.1268.003注：綜合加權(quán)評分由公式:Y=Y1+ Y2+ Y3=20×Y1/9.97+ 60×Y2/0.457+ 20×Y3/4.04計算而得。浸膏收率以平均值9.

10、97%計為20分，高于9.97%仍計20分，天麻素含量以最高0.457%計為60分，多糖含量以最高4.04%計為20分。由正交實驗結(jié)果可知，影響提取效果的因素順序為：C（提取次數(shù)）A（醇濃度）B（溶劑量）D（提取時間）。極差結(jié)果為A1A2A3,B1B2B3,C1C2C3,D1D3D2,直觀分析確定最佳提取工藝為：A1B1C1D1。鑒于D1和D3對實驗影響程度相近，考慮實際生產(chǎn)成本，可將提取時間（D）由2h調(diào)整為1h；同時藥物第3次提取時藥物有效成分已大量滲出，可縮短提取時間，減少溶劑用量。綜合考慮，將工藝優(yōu)化為：用12，10，6倍量70%乙醇為提取溶劑，提取3次，前2次提取時間為1h，后1次為

11、30min。2.2.3驗證實驗按照2.2.2確定的最佳工藝和優(yōu)化工藝進(jìn)行驗證實驗。結(jié)果見表4。表4 驗證實驗結(jié)果工藝實驗號綜合評分綜合評分均值RSD（%）最佳工藝198.5698.0120.96297.52398.81498.58596.59優(yōu)化工藝197.8597.2440.58296.98397.04496.55597.80 驗證實驗結(jié)果表明，優(yōu)化工藝與最佳工藝結(jié)果相近，且優(yōu)化工藝的實驗結(jié)果重現(xiàn)性良好。2.3 相關(guān)指標(biāo)的測定2.3.1浸膏收率的測定從已定容至1000ml的提取液中量取200ml（相當(dāng)于生藥5g），移入已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，70水浴濃縮至干，放入105烘箱干燥6h，取出，置

12、干燥器中冷卻30min后，取出，精密稱重，計算浸膏收率。2.3.2苯酚-硫酸法測定天麻多糖含量32.3.2.1對照品溶液的制備精密稱取105干燥至恒重的無水葡萄糖對照品1.070g，置1000ml容量瓶中加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（1.07mg/ml）。2.3.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密量取對照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，分別置50ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取上述溶液各1ml，置錐形瓶中，分別加入蒸餾水2ml、6.25%苯酚溶液1ml，混勻，迅速加入硫酸5ml，搖勻，倒入具塞試管中，置沸水浴加熱15min，取出，冷卻至室溫，以第1份為空白，

13、在492nm的波長處測定吸光度。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，葡萄糖對照品濃度（C）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為A=0.0062C+0.0039，相關(guān)系數(shù)為r=0.9993,線性范圍為21.4ug/ml128.4ug/ml。2.3.2.3樣品的測定 精密量取天麻提取液樣品10ml，置100ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻，取1ml，置錐形瓶中，分別加入蒸餾水2ml、6.25%苯酚溶液1ml，混勻，迅速加入硫酸5ml，搖勻，倒入具塞試管中，置沸水浴加熱15min，取出，冷卻至室溫，在492nm處測定吸光度，計算天麻多糖含量。2.3.3 HPLC法測定天麻素的含量2.3.3.1色譜條件色譜柱為

14、Hypersil BDS C18柱（200×4.0mm，5um）；流動相為乙腈-0.05%磷酸溶液（3：97）；流速0.8ml/min；檢測波長220nm；柱溫30；進(jìn)樣量6ul。2.3.3.2對照品溶液的制備精密稱取天麻素對照品1.8mg，置25ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得天麻素對照品溶液（72ug/ml）。2.3.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取對照品溶液2、4、6、8、10ul，按上述色譜條件測定峰面積，以天麻素進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=2347977.4X-7867.2，r=0.9999, 進(jìn)樣量在0.144u

15、g0.720ug范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。2.3.3.4樣品的測定取提取液樣品用0.45um的微孔濾膜過濾，棄初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液，注入高效液相色譜儀，計算天麻素含量。3討論天麻復(fù)方降壓膠囊制劑處方由天麻、枸杞、菊花組成，本研究主要為“天麻復(fù)方降壓膠囊的開發(fā)”進(jìn)一步制劑研究提供實驗依據(jù)。課題前期通過動物實驗和臨床觀察對天麻復(fù)方降壓膠囊粗提取物進(jìn)行了藥效學(xué)研究，結(jié)果表明，天麻作為主藥，有較好的降壓作用和保健效果。實驗主要從保留天麻中降血壓有效成分的出發(fā)點進(jìn)行研究。工藝條件的確定可以從定量分析、TLC檢查、藥效實驗等方面考慮，其中藥效實驗尚存在藥效指標(biāo)的選擇問題，同時成本較高，所以有必要針對中藥復(fù)方制劑的特點尋求一些新的制劑學(xué)工藝評價方法。另外，考慮到膠囊劑的服用量不宜過大，而天麻的出膏率較高，因而后期實驗對提取液進(jìn)行了精制。采用水沉后高速離心的方法，可以把出膏率控制在6%左右，而天麻素和多糖的轉(zhuǎn)移率均能達(dá)到70%以上。參考文獻(xiàn)1 Eun-Kyoung Ahn, HYe-Jin Je