儀器分析實習指導

1、第五章 現(xiàn)代食品安全檢測技術第一節(jié) 高效液相色譜法測定蜂蜜中殘留的四環(huán)素一、實驗目的掌握高效液相色譜法測定蜂蜜中殘留的四環(huán)素的原理熟悉高效液相色譜法測定蜂蜜中殘留的四環(huán)素的實驗方法了解高效液相色譜儀的基本結構與使用方法二、實驗原理（一）四環(huán)素是一種廣譜抗菌素，可用于治療和預防一些動物性疾病，但如果長期使用，將導致四環(huán)素類藥物在動物類組織中的殘留。殘留在動物類組織中的四環(huán)素類藥物會影響食用者的健康。四環(huán)素類藥物的毒性反應主要表現(xiàn)為對胃、腸、肝臟的損害及牙齒的染色等，還會造成過敏反應、二重感染、致畸胎作用。因此應嚴格控制其在食品中的殘留量。（二）用酸性的Na2 EDTA-Mcllvaine緩沖溶液

2、將蜂蜜中蛋白質沉淀 ,同時將四環(huán)素提取出來，以草酸與乙腈為流動相，C18柱作為色譜柱，反相分離，紫外檢測器檢測，在四環(huán)素的標準曲線的線性范圍內，依據其測得的峰面積與其含量間的線性關系進行定量分析。三、儀器和試劑（一）儀器 1. 高效液相色譜儀 2紫外檢測器 3渦旋混合器 4離心機 5天平 （二）試劑 1甲醇 2乙腈 3乙酸乙酯 4磷酸二氫鈉 5鹽酸 6檸檬酸 7乙二胺四乙酸二鈉 8草酸四、操作步驟1提取 （1）稱取5g試樣，置于50mL離心管中，加入30mL0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine溶液,快速混合1min, 以3500r/min離心10min，上清液倒入另一離心管中。

3、（2）將上清液通過固相萃取柱，用2mLNa2EDTA-Mcllvaine溶液沖洗，再用20mL水洗，棄去全部流出液，減壓抽干10min，用4mL流動相洗脫，定容至4mL，供液相色譜-紫外檢測器測定。 2標準溶液的配制（1）稱取四環(huán)素10mg，用甲醇溶解，并轉移至100mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，得四環(huán)素儲備液（0.1mg/mL）。準確移取該溶液1mL置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度,得0.01 mg/mL。準確移取該溶液0，0.05，0.10，0.20，0.40，0.80mL于10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。得四環(huán)素標準溶液的濃度分別為0.05，0.10，0.20，0.40，0

4、.80mg/mL。 3測定（1）色譜條件：色譜柱：C18色譜柱，150mm4.6mm, 5mm；流動相：0.01mol/L草酸溶液（pH=2.5）-乙腈（80：20）；流速：1mL/min; 柱溫：室溫；紫外檢測器：檢測波長：355nm。（2）將上述已制備好的不同濃度的四環(huán)素標準系列溶液一次進樣20mL，依據四環(huán)素的峰面積定量。以標準系列溶液的濃度為橫坐標，其相應的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，并計算回歸方程。（3）樣品的測定：取已處理好的樣品溶液20mL進樣分析，根據峰面積帶入回歸方程中計算。五、結果計算按下式可計算出蜂蜜中四環(huán)素的含量X=CV/m式中：X為試樣中四環(huán)素的含量，單位為mg/g

5、; C為從標準曲線計算得到的被測組分溶液濃度，單位為mg/mL；V為試樣溶液定容體積，單位為mL；m為試樣溶液所代表的試樣質量，單位為g。六、注意事項（一）流動相使用前必須經過脫氣。如果流動相中含有氣體，在較高的柱壓下會產生氣泡，使流動相流動受阻，對分離樣品產生不利影響。（二）固相萃取柱使用前應用5mL甲醇和10mL水活化。（陳凌云）第二節(jié) 液相色譜-串聯(lián)質譜法測定水產品中的氟苯尼考一、實驗目的（一）基本熟悉現(xiàn)代食品安全檢測技術中高效液相色譜-串聯(lián)質譜聯(lián)用技術的測定方法和特點；（二）了解液質聯(lián)用技術的基本原理以及在食品安全檢測中的重要性。二、實驗原理氟苯尼考又名氟洛芬、氟甲砜霉素，分子式為C1

6、2H14Cl2FNO4S；分子量為358.2127；結構式為。氟苯尼考是一種獸用抗菌藥，用于敏感細菌所致的豬、雞及魚的細菌性疾病，尤其對呼吸系統(tǒng)感染和腸道感染療效顯著。樣品中的氟苯尼考在堿性條件下，用乙酸乙酯提取，提取液經旋轉蒸發(fā)揮干，殘渣以水溶解，經正己烷液-液萃取脫脂。液相色譜-串聯(lián)質譜儀，以氘代氯霉素（d5-氯霉素）為內標，MRM離子對方式檢測，內標法定量。三、試劑和儀器甲醇（HPLC）、乙酸乙酯（AR）、正己烷（AR）、氨水（AR，25%28%）、無水硫酸鈉（AR）、氟苯尼考和氘代氯霉素（d5-氯霉素）標準物質（純度99%）、超純水。液相色譜-串聯(lián)質譜儀（API 4000 Qtrap）

7、，配電噴霧電離離子源（ESI）；分析天平，感量0.01mg和0.001g；離心機，4000r/min；小型臺式離心機，13000r/min；組織搗碎機；勻漿機；減壓旋轉蒸發(fā)儀；渦旋振蕩器；聚丙烯離心管：帶蓋，50mL，1.5mL；雞心瓶：25mL；具塞比色管等。四、操作步驟（一）標準溶液配制1100g/mL標準儲備液的配制：稱取適量氟苯尼考標準物質，用甲醇配成100g/mL的標準儲備液，于-18冰箱保存?zhèn)溆谩?.1g/mL標準儲備液的配制：準確吸取1.00mL 100g/mL標準儲備液于100mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，于-18冰箱保存?zhèn)溆谩?.內標標準溶液：氘代氯霉素（d5-氯霉素），1

8、00g/mL，溶劑為乙腈，氘化度98%。4.1g/mL內標標準儲備液：準確吸取1.00mL內標標準溶液于100mL容量瓶中，用甲醇稀釋、定容至刻度，于-18冰箱保存?zhèn)溆谩?.20ng/mL內標標準中間液：準確吸取1.00mL內標標準儲備液于50mL容量瓶中，以超純水稀釋至刻度，于4冰箱保存?zhèn)溆谩?.標準工作溶液的配制：分別準確吸取一定量的標準儲備液和內標標準中間液，以空白基質溶液配成10、50、100、200、500ng/mL，含內標10ng/mL的標準工作溶液。（二）樣品的制備1.標記：從所取樣品中，取出有代表性的可食部分約500g，用組織搗碎機充分搗碎均勻，裝入潔凈容器，密封，并標明標記。

9、2.提?。悍Q取5g充分搗碎均勻的試樣，精確至0.001g，置于50mL聚丙烯離心管中，加入內標標準中間液75.0L，加入25mL乙酸乙酯，0.75mL氨水，3g無水硫酸鈉，勻漿提取30s，4000r/min離心5min，上清液轉移至50mL比色管中。另取一50mL離心管，加入20mL乙酸乙酯，0.60mL氨水，洗滌勻漿刀10s，洗滌液轉移至第一支離心管中，用玻棒攪動殘渣，渦旋振蕩提取1min，超聲波振蕩提取5min，4000r/min離心5min，上清液合并至50mL比色管，乙酸乙酯定容至50.0mL。搖勻后移取10.0mL乙酸乙酯提取液于25mL雞心瓶，45減壓旋轉濃縮至干。3.凈化：雞心瓶

10、中的殘渣用2.00mL水溶解，渦旋振蕩混勻，超聲5min，加入3mL正己烷渦旋振蕩混合30s，靜置分層，棄掉上層的正己烷，再加3mL正己烷渦旋振蕩混合30s，靜置分層，移取部分下層的水相至1.5mL的聚丙烯離心管中，13000r/min離心5min，0.2m濾膜過濾后，供液相色譜-串聯(lián)質譜測定。4.空白基質溶液的制備：稱取5g空白樣本，精確至0.001g，除不加入內標標準中間液，其它按照樣品制備、凈化的步驟進行。（三）液相色譜條件1.色譜條件色譜柱：安捷倫 Zorbax XDB C-18，5m，150mm2.1mm；柱溫：40；流動相：甲醇-水（4/1）；流速：0.40mL/min；進樣量：1

11、0L。2.質譜條件離子源：電噴霧電離離子源（ESI）；掃描方式：負離子；檢測方式：多反應選擇離子檢測（MRM）；質譜條件的優(yōu)化：以1g/mL的氟苯尼考和氘代氯霉素內標溶液，針泵直接進樣，流速5L/min，分別進行MS1、MS2的優(yōu)化，確定相應質譜參數，選擇合適的檢測離子對。電噴霧電壓(IS)：-4200V；輔助氣溫度（TEM）：600，其它參數見下表5-2-1：表5-2-1氟苯尼考、氘代氯霉素（d5-氯霉素）質譜參數名 稱定性離子對(m/z)定量離子對(m/z)采集時間（ms）去簇電壓DP（V）碰撞能量CE（V）氟苯尼考356.0/336.0356.0/336.0200-75-15356.0/

12、185.0-25氘代氯霉素326.0/157.0326.0/157.0-55-26五、結果計算以內標法定量，在優(yōu)化的最佳條件下，對基質標準工作溶液進樣，以標準溶液中被測組分的峰面積與氘代氯霉素峰面積的比值為縱坐標，標準溶液中被測組分的濃度（或被測組分濃度與氘代氯霉素濃度的比值）為橫坐標繪制標準工作曲線，用標準工作曲線對樣品進行定量，得提取液的含量C。按下式計算出蔬菜中被測組分的含量式中：X試樣中被測組分殘留量，單位為微克每千克（g/kg）；C從標準工作曲線得到的被測組分溶液濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；V樣品溶液最終的定容體積，單位為毫升（mL）；m稱取試樣的質量，單位為克（g）。六、

13、注意事項（一）樣品采集要均勻、具有代表性；（二）試樣要搗碎、勻漿徹底；（三）流動相要過濾、脫氣，并現(xiàn)時配制；（四）避免樣品污染；（五）色譜柱要充分平衡。（馬安德）第三節(jié) 電感耦合等離子體質譜法檢測茶葉中鉛、砷及鎘含量一、實驗目的（一） 掌握電感耦合等離子體質譜法（ICP-MS）測定元素含量的原理、分析過程中的各項干擾情況及其消除方法、基本分析步驟（二） 熟悉電感耦合等離子體質譜儀的基本構造及操作（三） 掌握元素（總量）分析的樣品前處理方法二、實驗原理ICP-MS由進樣系統(tǒng)、離子源和質譜儀三個主要部分構成。樣品溶液經過霧化由載氣送入ICP炬焰中，經過蒸發(fā)、解離、原子化、電離等過程，轉化為帶正電荷

14、的正離子，經離子采集系統(tǒng)進入質譜儀，質譜儀根據質荷比進行分離。對于一定的質荷比，質譜積分面積與進入質譜儀中的離子數成正比。即樣品的濃度與質譜的積分面積成正比，通過測量質譜的峰面積來測定樣品中元素的濃度。三、試劑和儀器（一）試劑硝酸（優(yōu)級純）H2O2（優(yōu)級純）純水：電阻率大于18.0Mcm。鉛（Pb）、砷（As）、鎘（Cd）混合標準使用溶液：10 mg/L。鍺（Ge）、銦（In）、鉍（Bi）內標溶液：100 g/L（二）儀器Thermo fisher XSeriesII電感耦合等離子體質譜儀Millipore超純水制備儀美國CEM Mars微波消解儀及配套消解管和架子精確控溫電熱消解器千分之一天

15、平100 mL、1 mL、5 mL可調移液器各一支，以及相應吸頭若干100 mL容量瓶11個、1000 mL燒杯1個、10 mL量筒1個、1000 mL量筒1個四、操作步驟(一) 儀器開機預熱（以下步驟基于實驗老師將儀器預先調整到Vacuum ready狀態(tài)下進行）檢查Ar氣壓力是否在0.60.7MPa范圍內，排風是否正常，電源是否穩(wěn)定；打開計算機，啟動Windows，打開循環(huán)冷卻水的電源；雙擊“Plasma Lab” 圖標，進入操作軟件主窗口。檢查蠕動泵、ICP炬管、霧化室，關閉ICP等離子體發(fā)生器窗門；點擊on點火；待儀器點火后，預熱；（二） 標準溶液系列的制備1. 于1000 mL燒杯中

16、加入594 mL去離子水，再定量吸取6 mL濃硝酸加入燒杯中，攪拌、冷卻，配制成（1+99）的硝酸溶液；2. 于5個100 mL的容量瓶中分別加入0、50 mL、200 mL、1 mL和2.5 mL的鉛（Pb）、砷（As）、鎘（Cd）混合標準使用溶液（10 mg/L），用（1+99）的硝酸溶液定容至刻度，配制成濃度濃度分別為0、5、20、100、250 mg/L標準溶液系列；（三） 樣品處理1. 稱取0.5g茶葉樣品，記下樣品具體重量（精確到小數點后第三位），平行樣品數為三份2. 將稱量好的三份平行樣分別放入3支微波消解管中，再取3支微波消解管作制備試劑空白用；每支消解管中分別加入5 mL濃硝

17、酸和1 mL H2O2，蓋上消解管瓶塞及蓋子；6支消解管對稱放入微波消解架上，放入微波消解儀中，按照表5-3-1消解程序進行樣品消解；表5-3-1 茶葉樣品微波消解程序功率爬升時間溫度保持800 W5 min1785 min3. 微波消解程序結束后，將消解管放到精確控溫電熱消解器上進行趕酸操作，溫度設定100 ，加熱10 h；4. 趕好酸的試劑空白及樣品分別轉入6個100 mL容量瓶中，每支消解管用少量超純水清洗35次，清洗液也轉移至容量瓶中，最后用超純水定容至刻度，制備成樣品溶液劑試劑空白。（四） 測定1. 使用調諧液調整儀器各項指標，使儀器靈敏度、氧化物、雙電荷分辨率等各項指標達到測定要求

18、，儀器參考條件如下：RF功率為1400 W，載氣流量為0.93 L/min，采樣深度為150 mm，霧化器為同心霧化器、采樣錐類型為鎳錐，具體儀器條件應該以實際調整所獲條件為主；2. 編輯測定方法、干擾方程、選擇各測定元素及內標元素、選擇校準方法、輸入標準系列濃度；3. 引入在線內標溶液，觀測內標靈敏度、待內標信號穩(wěn)定后分別測定試劑空白、標準系列、樣品溶液；4. 繪制標準曲線、計算回歸方程、獲取試劑空白及樣品溶液濃度（五） 關機測定完畢，分別用5%硝酸溶液、超純水沖洗樣品管和內標管直至儀器響應值回到基線；點擊off熄火，關閉循環(huán)水及Ar氣，將進樣系統(tǒng)的蠕動泵管放松，關閉計算機。五、結果計算茶葉

19、樣品中各待測元素的含量由以下公式計算：其中，W為茶葉樣品中各待測元素的含量（mg/g）；C樣為儀器所測定的樣品溶液濃度（mg/L）；為儀器所測定的試劑空白濃度的平均值（mg/L）；m為茶葉樣品重量（g）最終茶葉樣品中各待測元素的含量應以三個平行樣品的含量均值來表示：。其中為茶葉樣品中各待測元素的含量均值；SD為標準偏差。六、注意事項（一）干擾及其消除電感耦合等離子體質譜法測定復雜樣品時常存在以下干擾，在試驗過程中應該注意消除干擾影響。1 同量異位素干擾相鄰元素間的異位素有相同的質荷比，不能被四極質譜分辨，可能引起異位素嚴重干擾，選擇待測元素時應避免選擇有同量異位素干擾的元素。2. 豐度較大的同

20、位素對相鄰元素的干擾豐度較大的同位素會產生托尾峰，影響相鄰質量峰的測定。可調整質譜儀的分辨率以減少這種干擾。3. 多原子（分子）離子干擾由兩個或三個原子組成的多原子離子，并且具有和某些待測元素相同的質荷比所引起的干擾，本實驗中可能存在的多原子（分子）離子干擾見表5-3-2。多原子（分子）離子干擾很大程度上受儀器操作條件的影響，通過調整或者干擾校正方程可以減少這種干擾。表5-3-2 常見的分子離子干擾分子離子質量受干擾元素40Ar35Cl+75AsZrO106112CdMoO108116Cd本實驗中，氧化物的干擾可通過調整儀器參數、降低氧化物生成來減少干擾；而As的干擾可以通過干擾校正方程來消除

21、，校正方程為：75As=75Mx82My (83M-z83Kr)其中，x、y、z的參考值分別為3.1285、0.8740、1.0074，具體數值以77ArCl、82Se和83Kr的實際儀器響應來計算。4. 物理干擾包括檢測樣品標準溶液的粘度、表面張力和溶解性總固體的差異所引起的干擾。用內標物可校正物理干擾。5. 基體抑制（電離干擾）易電離的元素增加將大大增加電子數量而引起等離子體平衡轉變，通常會減少分析信號，稱基體抑制。用內標法可以校正基體干擾。6. 記憶干擾經常清洗樣品導入系統(tǒng)以減少記憶干擾。（二）儀器穩(wěn)定性監(jiān)測測定過程中，應隨時留意內標元素的儀器響應情況，如內標元素儀器響應出現(xiàn)大幅度波動，

22、應查明原因再重新測定。（三）樣品制備由于樣品趕酸過程較長，樣品制備應提前進行。(劉洪濤)第四節(jié) 離子色譜法測定自來水中氟離子、氯離子含量一、 實驗目的（一）掌握離子色譜法測定自來水中氟離子、氯離子含量的基本原理及實驗方法。 （二）熟悉離子色譜儀的測定方法。（三）了解化學抑制的工作原理。二、 實驗原理 樣品通過進樣閥注入儀器，并隨碳酸鹽-重碳酸鹽淋洗液進入離子交換柱系統(tǒng)（由保護柱和分離柱組成），由于樣品中各種陰離子對分離柱中陰離子交換樹脂的親和力不同，移動速度亦不同，從而進行分離。已分離的陰離子流經陽離子交換柱或抑制器系統(tǒng)轉換成具高電導度的強酸，淋洗液則轉變?yōu)槿蹼妼Ф鹊奶妓帷Ｓ呻妼z測器測量出各

23、陰離子組分的電導率，以相對保留時間和峰高或面積定性和定量。 三、儀器和試劑（一）儀器 1.離子色譜儀2.全自動進樣器3.陰離子分離柱4.超聲波清洗器5.超純水系統(tǒng)6.真空泵7.過濾器8.十萬之一分析天平9.濾膜：0.22mm10.聚乙烯塑料容量瓶：1000m1、100m1（二）試劑 1.氟標準儲備液（1000mg/L）2.氯標準儲備液（1000mg/L）3.碳酸鈉：分析純4.碳酸氫鈉：分析純5.硫酸：優(yōu)級純6.去離子水四、操作步驟（一）水樣預處理吸取10mL自來水樣過0.22mm孔徑的微濾膜過濾除去渾濁物質，然后上機待測。（二）溶液的配制1.氟(10.0 mg/L)、氯(100.0 mg/L)

24、混合標準使用液：分別吸取將氟標準貯備液1m1，氯標準儲備液10m1，置于100mL容量瓶中，然后用去離子水稀釋至刻度，搖勻。2.氟、氯標準溶液的繪制：準確吸取1、2、5、10、20mL氟、氯混合標準使用液分別置于100mL容量瓶中，最后用去離子水稀釋至刻度，搖勻。3.淋洗液的配制(碳酸鈉1.8 mmol/L /碳酸氫鈉1.7mmol/L)：準確稱取碳酸鈉0.1908g/L、碳酸氫鈉0.1428g/L（于105下烘干2小時，并保存在干燥器內），溶于去離子水中，并轉移到1000mL容量瓶中，用去離子水稀釋至刻度，搖勻，并經真空泵過濾、除氣，備用。4.再生液的配制（50mmol/L）：準確吸取3mL

25、硫酸到1000mL容量瓶中，用去離子水稀釋至刻度，搖勻。5.沖洗液：去離子水。（三）儀器的條件1.柱溫：室溫2.淋洗液流速：1.0 m L/min3.進樣量：20ml（四）樣品測定1.裝上淋洗液，依次打開全自動進樣器、主機、連接色譜工作站的電腦開關。2.調節(jié)淋洗液和再生液流速，使儀器達到平衡，并指示穩(wěn)定的基線。3.建立測定方法。4.待基線走穩(wěn)后，用氟離子、氯離子的混合標準系列溶液進樣（可分別得到兩種離子的工作曲線）繪制標準曲線。5.將預處理后的自來水樣品注入色譜儀進樣系統(tǒng)，記錄峰高或峰面積。6.測量完畢后，沖洗柱子。7.關泵。 五、結果計算 根據測出的樣品峰面積，儀器可直接在標準曲線上查得各陰

26、離子的質量濃度（mg/L）。如有稀釋需乘以稀釋倍數。C樣=C檢稀釋倍數式中：C樣為樣品的質量濃度，單位為毫克每升mg/L；C檢為在標準曲線上查出的質量濃度，單位為毫克每升mg/L。六、注意事項（一）由于進樣量很小，操作中必需嚴格防止純水、器皿以及水樣預處理過程中的污染，淋洗液應用去離子水配制，不宜配制太多、放置時間太長。（二）為了防止保護柱和分離柱堵塞，樣品必須過0.22mm孔徑的微濾膜。（三）每次開機后，觀察白色的再生液和沖洗液的廢液管是否有液體流出，是否被堵。（四）離子色譜儀長期不用時也要定期用超純水清洗或將柱子卸下密封保存。（沈梅）第五節(jié) 氣相色譜-質譜法測定蔬菜中的敵敵畏和甲拌磷含量一

27、、 實驗目的（一）了解氣相色譜-質譜聯(lián)用儀的基本結構及原理；（二）了解氣相色譜-質譜儀使用的方法；（三）了解蔬菜中有機磷農藥的提取方法；（四）熟悉氣相色譜-質譜法的定性、定量的方法；（五）掌握內標標準曲線法的定量方法。二、 實驗原理樣品用乙腈勻漿后過濾，濾液鹽析后離心，取上清液經固相萃取柱凈化，用乙腈+甲苯（3+1）洗脫，洗脫液濃縮后，用氣相色譜-質譜儀測定。氣相色譜-質譜儀的工作原理：樣品中各組份經氣相色譜分離后進入質譜儀，被離子源轟擊成不同質荷比（m/z）的碎片離子。碎片離子經過質量分析器后，由離子流檢測器檢測，并按照m/z的大小輸出質譜圖，以離子流強度為縱坐標，保留時間為橫坐標輸出色譜圖

28、。利用組分的保留時間和質譜圖進行定性分析，用峰面積或者峰高進行定量分析。內標標準曲線法：將待測組分的純物質配置成不同濃度的系列標準溶液（），分別加入等量的內標物質，在一定實驗條件下分析，測得待測組分的峰面積及內標的峰面積，以對作圖得內標標準曲線。再將同樣量的內標物加入到待測樣品中，進樣分析，測出，由標準曲線求得待測組分的含量。三、試劑和儀器（一）儀器 GC-MS（2010QPPlus，日本島津公司)；自動固相萃取儀或手動固相萃取儀；均質器；離心機，電子天平（精度分別為0.001g和0.00001g）；氮氣吹干儀；100uL/ 1000uL可調移液器；雞心瓶；微量進樣器。（二）試劑 乙腈、甲苯、

29、正己烷、氯化鈉，均為優(yōu)級純。Envi-18和Envi-Carb活性炭固相萃取小柱（3 mL,0.5 g）。敵敵畏、甲拌磷和環(huán)氧七氯標準品 (純度95%，國家標準物質研究中心)。敵敵畏、甲拌磷和環(huán)氧七氯標準母液（1.0 mg/mL）: 精確稱取10.00 mg標準物質于10.0 mL容量瓶中用正己烷定容。準確移取敵敵畏和甲拌磷標準母液各1 mL置10 mL量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，得含0.1 mg/mL敵敵畏和甲拌磷的混合標準溶液。準確移取該溶液0，0.0025，0.005，0.01，0.02，0.05mL于5 mL容量瓶中由空白基質提取液定容，得標準工作液0，0.05，0.10，0.20，0

30、.40，1.00 mg/mL。環(huán)氧七氯內標工作標準溶液（40.0 mg/mL）： 準確移取1 mL環(huán)氧七氯母液于25 mL量瓶中，用正己烷稀釋至刻度。四、操作步驟（一）儀器操作步驟：1. 確認處于正常工作狀態(tài)。2. 對儀器進行調諧，獲得調諧報告。3. 編輯檢測方法，將檢測方法發(fā)送給儀器，等待儀器達到設定好的條件。4. 編輯樣品測定序列，將標準溶液和樣品溶液放于自動進樣器樣品盤中。5. 儀器穩(wěn)定后，開始測試。6. 樣品測定完畢后，進行數據分析。（二）檢測條件色譜柱：Rxi-5ms,30m0.25mm0.25mm；色譜柱溫度程序：50保持2 min，然后以50/min程序升溫至180，再以5/mi

31、n升溫至280，保持1min,在以50/min升溫至300，保持1min；載氣：氦氣，純度99.999%，流速：1.0mL/min；進樣口溫度：250；進樣量：1 L；進樣方式：無分流進樣，4.5 min后打開流閥和隔墊吹掃閥；電子轟擊源：70 eV；離子源溫度：250。GC-MS接口溫度：250；掃描方式：選擇離子監(jiān)測。監(jiān)測離子見下表5-5-1：表5-5-1 待測組分及內標的定量離子和定性離子化合物名稱定量離子（強度）定性離子（強度）駐留時間/s敵敵畏109（100）185（22），145（6）0.15甲拌磷260（100）121（429），231（110）0.15環(huán)氧七氯353（100）3

32、55（80），351（53）0.15（三）樣品處理：1. 提取稱取20 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL離心管中，加入40 mL乙腈，用均質器在15 000r/min勻漿提取1 min，加入5 g氯化鈉，再勻漿提取1 min，將離心管放入離心機，在3 000r/min離心5 min，取上清液20 mL（相當于10 g試樣量），待凈化。2. 凈化（1） 將Envi-C18柱放入固定架上，加樣前先用10 mL乙腈預洗柱，下接雞心瓶，移入雞心瓶，移入上述20 mL提取液，并用15 mL乙腈洗滌柱，將收集的提取液和洗滌液在40水浴中旋轉濃縮至約1 mL，備用。（2） 在Envi-Carb柱中加

33、入約2 cm高無水硫酸鈉，下接雞心瓶放在固定架上，加樣前先用4 mL乙腈+甲苯（3+1）預洗柱，當液面到達硫酸鈉的頂部時，迅速將樣品濃縮液（1）轉移至凈化柱上，再每次用2 mL乙腈+甲苯（3+1）三次洗滌樣液瓶，并將洗滌液移入柱中。在串聯(lián)柱上加上50 mL貯液器，用25 mL乙腈+甲苯（3+1）洗滌串聯(lián)柱，收集所有流出物于雞心瓶中，并在40水浴中旋轉濃縮至約0.5 mL。每次加入5 mL正己烷在40水浴中旋轉蒸發(fā)，進行溶劑交換二次，最后使樣液體積為1 mL，加入40 L內標溶液，混勻，用于氣相色譜-質譜測定。五、結果計算（一）定性分析：進行樣品測定時，如果檢出的色譜峰的保留時間與標準樣品相一致

34、，并且在扣除背景后的樣品質譜圖中，所選擇的離子均出現(xiàn)，而且所選擇的離子豐度比與標準樣品的離子豐度比相一致（相對豐度50%,允許10%偏差；相對豐度20%50%，允許15%偏差；相對豐度10%20%，允許20%偏差；相對豐度10%，允許50%偏差），則可判斷樣品中存在這種農藥或相關化學品。如果不能確證，應重新進樣，以掃描方式（有足夠靈敏度）或采用增加其他確證離子的方式或用其他靈敏度更高的分析儀器來確定。（二）定量分析：分別以敵敵畏、甲拌磷及內標的定量離子的質量色譜圖進行面積積分，獲得標準系列中待測組分的峰面積及內標的峰面積，以對作圖得內標標準曲線。再測得樣品中待測組分的峰面積及內標的峰面積，計算

35、，由標準曲線求得待測組分的含量。（三）含量計算按下式計算出蔬菜中被測組分的含量：式中：X蔬菜試樣中敵敵畏或甲拌磷的含量，單位為mg/kg； C從標準曲線計算得到的被測組分溶液濃度，單位為mg/mL；V試樣溶液定容體積，單位為mL；M試樣溶液所代表的試樣質量，單位為g。六、注意事項（一）為減少基質的影響，定量用標準溶液通常采用空白基質提取液配置標準工作溶液。（二）在進行測定前，常進樣一針溶劑空白，以檢查儀器的狀況。七、參考文獻1.郭愛民 主編，衛(wèi)生化學實驗，北京：人民衛(wèi)生出版社，2007。2.唐英章 主編，現(xiàn)代食品安全檢測技術，北京：科學出版社，2004。（周枝鳳）第六節(jié) 原子吸收光譜法測定水中

36、的鋅和銅一、實驗目的 (一) 掌握火焰原子吸收光譜法測定水中鋅、銅的基本原理和操作技術。 (二) 熟悉原子吸收分光光度計的工作原理及火焰原子法的操作。實驗原理在使用銳線光源條件下，基態(tài)原子蒸汽對共振線的吸收，符合朗伯-比爾定律，即： （A為中心頻率處的吸光度；L為原子蒸氣的厚度；峰值吸收系數） 在試樣原子化時，火焰溫度低于3000 K時，對大多數元素來講，原子蒸汽中基態(tài)原子的數目實際上十分接近原子總數。在一定實驗條件下，待測元素的原子總數目與該元素在試樣中的濃度呈正比。則A=kc用A-c標準曲線法或標準加入法，可以求算出元素的含量。 試劑和儀器(一) 試劑：不同濃度的鋅、銅標準溶液；水樣。(二

37、) 儀器：原子吸收分光光度計；鋅、銅空心陰極燈；電熱板。四、操作步驟 (一) 鋅、銅系列標準溶液的配制配制鋅系列標準溶液：0.100，0.200，0.300，0.400，0.500 gmL-1。配制銅系列標準溶液：0.200，0.400，0.600，0.800，1.000 gmL-1。(二) 工作條件的設置表5-6-1儀器參數的設置測試元素工作模式空心陰極燈電流空心陰極燈預熱時間狹縫寬度波長噴頭高度鋅火焰8 mA20 min0.4nm213.8 nm7mm銅火焰8 mA20 min0.7nm324.5nm7mm表5-6-1儀器參數的設置（續(xù)）測試元素測定方法工作曲線計算方式測定時間重復次數標準

38、品數量濃度單位背景校正樣品數延遲時間鋅濃度自續(xù)直線回歸積分335g/mL否30銅濃度自續(xù)直線回歸積分335g/mL否30 (三) 鋅、銅的測定 1%硝酸為空白，測定鋅、銅系列標準溶液和自來水樣的吸光度A。 (四) 實驗結束后，用1%硝酸噴洗原子化系統(tǒng)5 min，按關機程序關機。最后關閉乙炔鋼瓶閥門，旋松乙炔穩(wěn)壓閥，關閉空壓機和通風機電源。 (五) 繪制鋅、銅的A-c標準曲線，由未知樣的吸光度A，求算出自來水中鋅、銅含量（g/mL），按一元線性回歸計算程序，計算鋅、銅的含量。五、 注意事項 乙炔為易燃易爆氣體，必須嚴格按照操作步驟工作。在點燃乙炔火焰之前，應先開空氣，后開乙炔；結束或暫停實驗時，

39、應先關乙炔，后關空氣。乙炔鋼瓶的工作壓力，一定要控制在所規(guī)定范圍內，不得超壓工作。必須切記，保障安全。（韓偉立）第七節(jié) 氣相色譜法檢測飲料中的防腐劑苯甲酸一、 實驗目的（一）掌握氣相色譜氫火焰離子化（FID）分析方法的原理和實驗操作技術。 （二）熟悉內標標準曲線法的定量分析方法。二、 實驗原理食品防腐劑因具有殺滅或抑制微生物增殖的作用，而被廣泛應用于各類食品、飲料中，防止食品變質及延長食品的保質期, 但過量食用對人體有一定毒性。所以有必要對其進行檢測監(jiān)控。氣相色譜法的工作原理：是利用試樣中各組份在流動相和固定相間的分配系數不同，當汽化后的試樣被載氣帶入色譜柱中運行時，組份就在其中的兩相間進行反

40、復多次分配，由于固定相對各組份的吸附或溶解能力不同，因此各組份在色譜柱中的保留時間不同，便彼此分離，按順序離開色譜柱進入檢測器，產生的離子流訊號經放大后，在記錄器上描繪出各組份的色譜峰。利用保留時間對樣品中的組分進行定性分析，用峰面積進行定量分析。內標標準曲線法：在一定實驗條件下，待測組分的含量m或濃度C與樣品峰面積Ai內標峰面積As成正比例。先用待測組分的標準品配置一系列已知濃度的標準溶液，加入相同量的內標物；再將同樣量的內標物加入到同體積的待測樣品溶液中，分別進樣，測出Ai/As，作 Ai/Asm或Ai/AsC圖，由Ai（樣）/As即可從標準曲線上查得待測組分的含量。食品中苯甲酸先經乙醚萃取，以正十一烷酸作內標，采用內標標準曲線法定量。三、試劑和儀器（一）儀器 天美，GC-7900氣相色譜儀；FID檢測器；2010雙通道色譜工作站；中惠普NHA-300S氣源發(fā)生器；微量進樣器。（二）試劑 正十一烷酸，乙醇，乙醚均為分析純。苯甲酸 (國家標準物質研究中心提供)，食品防腐劑標準工作液：1.0g/L，用乙醇配制；正十一烷酸內標溶液：3.0g/L，用乙醇配制。鹽酸（1+1）：取100mL鹽酸，加蒸餾水稀釋至200mL。四、操作步驟（一）氣相色譜儀操作步驟：1. 確認所需使用檢測器，并相應的安裝好分析柱。FID使用N2做