高效液相色譜法測定高良姜中二苯基庚烷A的含量

1、高效液相色譜法測定高良姜中二苯基庚烷A的含量                             作者：周改蓮，姜建萍，劉凡凡，辛寧【摘要】  目的測定高良姜中活性成分二苯基庚烷A含量。方法高效液相色譜（HPLC）法；Elite，Hypersil ODS 25 m (4.6 mm×250 mm)

2、；檢測波長210 nm；柱溫30；流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸水（4060）；流速1 ml/min。結(jié)果二苯基庚烷A的線性范圍0.453.6 g，r=0.999 93，回收率99.62%，RSD 1.53%。結(jié)論該方法簡便，線性關(guān)系良好，可作為高良姜中二苯基庚烷A分離檢測的一種依據(jù)。 【關(guān)鍵詞】  高效液相色譜； 高良姜 二苯基庚烷AAbstract：ObjectiveThe purpose is to determine the content of 5 - hydroxyl -7- (4"- hydroxyl -3"- methoxyphenyl ) -1-ph

3、eny-3-heptanone from Alpinia officinarum Hance. MethodsThe HPLC was used to determine the content of 5 - hydroxyl -7- (4"- hydroxyl -3"- methoxyphenyl ) -1-pheny-3-heptanone from Alpinia officinarum Hance, the analysis was carried out on Elite Hypersil ODS 25 m (4.6mm×250mm), the mobi

4、le phase was Acetonitrile-0.1%H3PO4(40:60), flow-rate 1.0ml/min and wavelength was 210nm, the colum temperature was 30.ResultsThe linear range of 5 - hydroxyl -7- (4"- hydroxyl -3"- methoxyphenyl)-1-pheny-3-heptanone was 0.453.6 g and correlation(r) was 0.999 93,recovery was 99.62% and RSD

5、 was 1.53%.ConclusionThe method is simple and presents a good linear relationship, so it can be used to determine the content of 5-hydroxyl-7-(4"-hydroxyl-3"-methoxyphenyl)-1-pheny-3-heptanone from Alpinia officinarum Hance.Key words：HPLC;   Alpinia officinarum Hance;  

6、 5?hydroxyl?7-(4"?hydroxyl ?3"?methoxyphenyl ) ?1?pheny?3?heptanone     高良姜為姜科山姜屬(Alpinia)植物高良姜Alpinia officinarm  Hance的干燥根莖。別名良姜、小良姜、賀哈，始載于名醫(yī)別錄，列為中品，因出于高良郡（今廣東省湛江地區(qū)的茂名市一帶）故名，廣東省徐聞縣人工栽培高良姜已有一百多年的歷史，被認(rèn)定為道地藥材。本品性熱味辛，歸脾、胃經(jīng)，具溫胃散寒、消食止痛的功效，用于脘腹冷痛、胃寒嘔吐、噯氣吞酸等1。二苯基庚烷類作為高良姜中的活性成

7、分之一，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、抗氧化等藥理作用。其中二苯基庚烷A通過抑制前列腺素合成酶而起到鎮(zhèn)痛抗炎作用，另外具有抗氧化、改善心血管系統(tǒng)等藥理活性2，3，但目前還未見有關(guān)其含量測定的報(bào)道，本文采用HPLC法測定高良姜中二苯基庚烷A的含量，為其今后的質(zhì)量控制研究提供一種參考依據(jù)，以便更好地開發(fā)利用高良姜資源。1   材料與方法1.1    樣品藥材購自廣西南寧和廣東徐聞兩地，經(jīng)廣西中醫(yī)學(xué)院生藥教研室廖月葵鑒定均為姜科山姜屬植物高良姜Alpinia officinarm Hance的根莖。藥材洗凈，切段，曬干，粉碎，過4號(hào)篩，置干燥器中備用。1.

8、2    儀器與試藥  Agilent 1100高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）：紫外檢測器，Agilent化學(xué)工作站，色譜柱為大連依利特柱，Hypersil ODS 25 m (4.6 mm×250 mm)；BP211D電子分析天平(德國賽多利斯公司)；Millipore simplicity-185超純水器（美國密理博公司）；KQ-200VDB型雙頻數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）； 0.45 m微孔濾膜（德國MEMBRANA公司）；微量取液器（北京表云儀表有限公司）。乙腈（色譜純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）、石油醚（分析純，北京

9、長海化工廠）、95%乙醇（分析純，上海試一化學(xué)試劑有限公司）。二苯基庚烷A對(duì)照品（天津藥物研究所提供），水為高純水。1.3  方法  1.3.1   對(duì)照品溶液的制備  取二苯基庚烷A對(duì)照品，精密稱定，加乙腈溶解，分別制成濃度為0.045，0.060，0.090，0.180，0.360  mg/ml的溶液，搖勻，經(jīng)0.45 m微孔濾膜濾于高效液相進(jìn)樣瓶中，即得。1.3.2   供試品溶液的制備  取高良姜粉末，約1 g，精密稱定，置150 ml三角瓶中，加石油醚（6090）50 ml，超聲提取1

10、5 min，過濾，棄去石油醚液，藥渣蒸干，加95%乙醇50 ml超聲提取3次，30 min/次，合并3次濾液，濃縮后定容至50 ml，搖勻，經(jīng)0.45 m微孔濾膜濾于高效液相進(jìn)樣瓶中，作為供試品溶液。以上超聲功率為60%，頻率為45 kHz。1.3.3   色譜分析條件  色譜柱為大連依利特柱，Hypersil ODS 25 m(4.6 mm×250 mm)；檢測波長210 nm；柱溫30；流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸水（40：60）；流速1 ml/min。1.3.4   對(duì)照品的純度檢查 按上述色譜條件，照2005年中國藥典一部附錄D

11、，用面積歸一化法測得對(duì)照品純度高于98.3%。2  結(jié)果2.1    線性關(guān)系的考察  取“1.3.1”項(xiàng)中不同濃度的對(duì)照品溶液各進(jìn)樣10 l，按上述色譜條件測定，結(jié)果如表1。色譜峰和標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖12。表1  對(duì)照品線性關(guān)系（略）圖1  對(duì)照品圖譜（略）圖2  對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線（略）    以對(duì)照品濃度（g/l）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程為Y=34 255.74X+72.40,r=0.999 93；表明二苯基庚烷A在0.453.6 g之間呈良好線性關(guān)系。百事通

12、2.2    精密度實(shí)驗(yàn)  取下述“2.3”項(xiàng)重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中1號(hào)供試品溶液進(jìn)樣10l，按上述色譜條件，重復(fù)測定6次，測得對(duì)照品峰面積見表2。表2  精密度實(shí)驗(yàn)（略）2.3    重復(fù)性實(shí)驗(yàn)  取同一批樣品6份，按上述供試品溶液方法處理，各進(jìn)樣10 l，以上述色譜條件測定。結(jié)果見表3。表3  重復(fù)性實(shí)驗(yàn)（略）2.4    穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)  取上述“2.3”項(xiàng)中1號(hào)供試品溶液，分別于0.5，1，6，8，12，24h測定。結(jié)果見表4。表4  穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)（略）

13、平均值為2 551.3，RSD為0.52%，說明樣品至少在24 h內(nèi)是穩(wěn)定的。2.5    加樣回收率實(shí)驗(yàn)  取與重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)同一批樣品6份，每份約0.5 g，精密稱定，分別加入對(duì)照品1.5 mg，按供試品溶液方法處理，以上述色譜條件進(jìn)樣10 l測定。結(jié)果見表5。表5  加樣回收率實(shí)驗(yàn)（略）2.6    高良姜的含量測定  將從廣西南寧采回的新鮮藥材分為兩部分，其中一部分直接曬干，稱生曬品，另一部分在烘箱中烘干，稱烘制品；廣東徐聞的是直接購回的生曬品，各取約1 g,精密稱定，按供試品溶液方法處理，各進(jìn)樣10

14、 l，依上述色譜條件測定。結(jié)果見表6。表6  樣品含量測定結(jié)果（略）表6說明不同產(chǎn)地的高良姜二苯基庚烷A含量有差別，但同是廣西南寧產(chǎn)的生曬與烘制差別不大。3    討論    二苯基庚烷A在210 nm處有最大吸收，其次為281 nm，但同一濃度進(jìn)樣體積相同的該物質(zhì)在281 nm處的峰面積只有210 nm處的十分之一左右，且以281 nm為測定波長時(shí)樣品中其它物質(zhì)峰面積相對(duì)要高出許多；選210 nm為測定波長時(shí)樣品中該物質(zhì)峰保留時(shí)間在11 min 左右，分離度不低于1.5，理論塔板數(shù)不少于10 000，故選210 nm為測定

15、波長。    廣東徐聞長期以來都被作為高良姜的道地藥材產(chǎn)地，通過本實(shí)驗(yàn)可以看出廣西南寧產(chǎn)的高良姜在活性成分二苯基庚烷A的含量上要高于廣東徐聞產(chǎn)的。周漩等4研究發(fā)現(xiàn)廣西與廣東產(chǎn)的高良姜在揮發(fā)油總體含量上相似。李彩君等5研究表明在高良姜的專屬性成分高良姜素的含量上廣西梧州的不低于廣東徐聞的。由此可知廣西亦適合高良姜的生長，現(xiàn)廣西南寧已有上百畝的高良姜種植基地，這打破了長期以來廣西產(chǎn)高良姜以野生為主的局面，保證高良姜藥用資源的同時(shí)也在一定程度上推動(dòng)了廣西經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。    雙苯庚烷類化合物作為山姜屬植物的主要有效成分，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、抗氧化等廣泛的藥理作用。目前關(guān)于高良姜中二苯基庚烷類化合物分離純化及含量測定的報(bào)道不多。為了更好地開發(fā)利用高良姜資源，我們應(yīng)加強(qiáng)其單體分離、純化、含量測定尤其是藥效學(xué)方面的研究。【參考文獻(xiàn)】  1 國家藥典委員會(huì).中國藥典，部S. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2005:202. 2 沈 健, 張虎翼, 徐 波, 等. 高良姜中的抗氧化有效成分J. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 1998, 10(2): 33.3 Shin Ji-Eun.5-Hydroxy-7-(4"-hydroxy-3"-methoxyphenyl)-1-p