植物組織培養(yǎng)實驗報告

1、院（系、部）化學與生物工程學院專業(yè)生物技術(shù)（師范） 年級13級 學號17130208姓名 組別第二組課程名稱 植物細胞工程學實驗日期 201636指導老師實驗名稱 植物組織培養(yǎng)綜合實驗一、實驗目的1. 熟悉MS培養(yǎng)基的組成，掌握貯備液的配制方法2. 學習、掌握植物組織固體培養(yǎng)基的配制和滅菌方法；3. 掌握超凈工作臺上的接種方法與注意事項，了解接種室的滅菌方法；4. 了解組織培養(yǎng)的基本程序；5. 掌握接種的方法和材料的培養(yǎng)過程；6. 掌握無菌操作技術(shù)，包括外植體除菌和接種技術(shù)；7. 觀察外植體的生長狀況、染菌狀況，剔除染菌外植體；8. 了解MS培養(yǎng)基和1/2MS培養(yǎng)基的區(qū)別二、實驗原理1. 植物

2、細胞的全能性一切植物都由細胞構(gòu)成，細胞是構(gòu)成植物體的基本結(jié)構(gòu)與功能單位。植物細胞含有全套遺傳信息，具 有形成完整植物的潛能。2. 植物細胞表現(xiàn)岀全能性的條件1. 離體狀態(tài)；2. 有一定的營養(yǎng)物質(zhì)，激素和其他外界條件（無菌、溫度、pH ）；3. 選擇性能優(yōu)良、細胞全能性表達充分的基因型3. 無菌條件把植物的組織、器官等，使其在人工控制的無菌條件下，使植物在人工培養(yǎng)基上繁殖。用于進行組織 培養(yǎng)的組織、器官和細胞稱為外植體。在組培中外植體都死帶菌的，在接種前必須進行表面消毒，這時取 得培養(yǎng)成功的最基本和重要的前體。組織培養(yǎng)的主要過程都是在無菌條件下進行的，所以所有的器材、植 物體、接種室都應(yīng)是無菌的

3、。4. 脫分化與愈傷組織已有特定結(jié)構(gòu)與功能的植物組織，在一定條件下，其細胞被誘導改變原來的發(fā)育途徑，逐步逆轉(zhuǎn)其原 有的分化形態(tài)，轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂蟹稚芰Φ呐呒毎倪^程稱為脫分化。脫分化所用的化學物質(zhì)與MS培養(yǎng)基的區(qū)別是需要激素誘導。所以脫分化培養(yǎng)需在MS培養(yǎng)基上添加激素進行愈傷組織誘導。5. 培養(yǎng)基植物組織培養(yǎng)常用的培養(yǎng)基為 MS培養(yǎng)基。常用的凝固劑是瓊脂，它的主要作用是使液體培養(yǎng)基凝固，瓊脂本身并不提供任何營養(yǎng)，它只是一種高分予的碳水物從海藻中提取岀來，僅溶解于熱水，成為溶膠， 冷卻后（40 C以下）即凝固為固體狀凝膠。瓊脂的用量一般在4 10克/升之間。瓊脂的凝固能力除與原料、廠家的加工方式等有

4、關(guān)外，還與高壓滅菌時的溫度、時間、pH值等因素有關(guān)，長時間的高溫會使凝固能力下降，過酸過堿加之高溫會使瓊脂發(fā)生水解而喪失凝固能力，存放時間過久，瓊脂變褐，也會逐失去凝固 能力。MS培養(yǎng)基屬于富鹽平衡培養(yǎng)基，特點是：無機鹽濃度較高，元素間的比例適當，離子平衡性好，具 有較強的緩沖性，因而在培養(yǎng)的過程中可維持較好的穩(wěn)定性；營養(yǎng)豐富，在一般培養(yǎng)中無須額外加入復雜 的有機成分；微量元素種類全，濃度高。這類培養(yǎng)基是目前使用最廣泛的培養(yǎng)基。6. 生長調(diào)節(jié)物質(zhì)包括天然植物激素額人工激素類似物。植物激素是一類植物自身合成、同時對其生長發(fā)育具有重要調(diào) 節(jié)作用的有機化合物。生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對于離題培養(yǎng)中的細胞分裂分化

5、、器官形成和個體再生等均起著重要 而明顯的調(diào)節(jié)作用。一般來說，基本培養(yǎng)基只能保證培養(yǎng)物的生存，維持其最低的生理活動，而只有植物 激素的配合使用，才能完成離體培養(yǎng)物中按照需要設(shè)計的各個調(diào)節(jié)環(huán)節(jié)。常用的植物組培激素種類主要有 生長素類、細胞分裂素類、赤霉素。1）生長素的生理作用主要是促進細胞分裂和生長，有利于外植體脫分化并啟動細胞分裂，有利于形 成愈傷組織。同時生長素和細胞分裂素的協(xié)調(diào)作用，對于培養(yǎng)物的形態(tài)建立十分必要。在離體培 養(yǎng)的分化調(diào)節(jié)中，生長素促進不定根的形成而抑制不定芽的發(fā)生。在液體培養(yǎng)中，生長素還有利于體細胞胚胎發(fā)生。常用的生長素有吲哚乙酸（IAA ）、奈乙酸（NAA ）、二氯苯氧乙酸

6、 （2，4-D）和吲哚丁酸（IBA）等。在使用2, 4-D時，必須嚴格控制使用濃度和培養(yǎng)時期，因為高濃度的2，4-D常常抑制器官的發(fā)生，在分化培養(yǎng)時不能使用2, 4-D代替其他生長素。2）細胞分裂素的主要作用是促進細胞的分裂，調(diào)節(jié)器官分化，延遲組織衰老，增強蛋白質(zhì)合成等。 此外，它還能顯著改善其他激素。離體培養(yǎng)中，細胞分裂素能夠促進不定芽的發(fā)生，與生長素協(xié)調(diào)使用能有效調(diào)控培養(yǎng)物的生長與分化。常用的細胞分裂素包括6-卞基嘌吟（6-BA ）、激動素（KT）、異戊烯氨基嘌吟（2ip）、玉米素（ZT）等。3）赤霉素（GA ）是一類廣泛存在于植物體內(nèi)的激素，目前已發(fā)現(xiàn)的天然赤霉素有20多種。自然界植物體

7、內(nèi)的赤霉素具有促進細胞伸長生長、誘導花芽形成、打破種子休眠及誘導單性結(jié)實等生理功能。在離體培養(yǎng)條件下，赤霉素的主要作用時促進細胞伸長生長，與生長素協(xié)同作用對形成層的 分化具有一定影響，同時還能刺激體細胞胚進一步發(fā)育成植株。三、實驗材料、試劑和儀器設(shè)備1. 植物材料：馬齒莧、番茄種子誘導的無菌苗、外植體（盤龍參、波斯菊、金葉女貞、黃花苜蓿、菊花、香樟、杜鵑、月季）2. 實驗藥品（試劑）：甲醛、MS培養(yǎng)基母液（見表 1）、蔗糖、瓊脂、1%升汞、酒精（75%和90% ）、NaOH、HCI、6-BA、NNA、無菌水；3. 儀器設(shè)備和實驗用具：高壓滅菌鍋、天平、pH計、超凈工作臺、電爐、酒精燈、鑷子、解

8、剖刀、剪刀、燒杯、培養(yǎng)瓶、量筒、燒杯、玻璃棒、廣口試劑瓶、牛皮紙、濾紙、培養(yǎng)皿、藥勺、支架、打火 機等。四、實驗步驟（一）培養(yǎng)基母液的配制（2016/3/4）1. MS培養(yǎng)基貯備液配制貯備液I(g)(20 x)貯備液山(mg) (100 x )MgSO4 7H2O3.70500mLFeSO4 7H2O278100mLNH4NO316.50NazEDTA 2H2O373CaCl2 2H2O4.40生長調(diào)節(jié)劑KNO 319.006-BA50mg50mLKH 2PO41.70NAA50mg貯備液 II(mg) )(100 x )貯備液 IV(mg) )(100 x )KI8.3100mL肌醇1000

9、100mLH3BO362煙酸5MnSO 4 4H2O223鹽酸硫胺素1ZnSO4 7H2O86鹽酸吡哆醇5Na2MoO4 2H2O2.5甘氨酸20CuSO4 5H2O0. 25稱量溶解混合定容CoCl2 6H2O0. 25表11）每種母液中的幾種成分稱量完畢后，分別用少量的蒸餾水徹底溶解，然后再將它們混溶，定 容。2）貯備液III需加熱溶解。混合后調(diào)至pH5.5，定容，保存在棕色玻璃瓶內(nèi)。3）6-BA : 1 mg/mL（溶于少量1N鹽酸后以蒸餾水定容）。NAA : 1 mg/mL （先用少量95%乙醇溶解后以蒸餾水定容）。4）各種母液配制完成后，分別用玻璃瓶貯存，貼上標簽，注明母液號、配制倍

10、數(shù)、日期等，放入 冰箱冷藏室保存。一般無機物質(zhì)的母液在冰箱中可保存半年以上，有機物質(zhì)的母液保存時間在 半年以內(nèi)，但若發(fā)現(xiàn)有沉淀或霉變 ,應(yīng)立即需重新配制。2. 其他試劑的配置1）1 mol/L 的 NaOH ： 1 瓶2）1 mol/LHCL ：1 瓶3）0.1% 的升汞或 2%次氯酸鈉：每個超凈工作臺一瓶（用時處理 5-30min）4）7075% 酒精：每個超凈工作臺一瓶5）95%酒精：每個超凈工作臺一瓶6）75%酒精棉球：每個超凈工作臺一瓶（二 ） 培養(yǎng)基的配制與滅菌1. 培養(yǎng)基配制1）配制培養(yǎng)液（ MS 培養(yǎng)液）：按每次配制 500 mL 培養(yǎng)基計，用量筒或者移液管從各種母液中分別取岀貯

11、備液 I 25 mL、貯備液II、皿、W各 5 mL ;2）溶化瓊脂：用粗天平分別稱取 5g 瓊脂、 15g 蔗糖放入 500 mL 搪瓷缸中，加入蒸餾水 400mL ，用用電爐加熱，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體呈半透明狀。然后再將配好的混合 培養(yǎng)液加入到煮沸的瓊脂中，最后加蒸餾水定容至500 mL ，攪拌均勻。3）調(diào)pH :用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培養(yǎng)基中，邊滴邊攪拌，并隨時用精密的pH試紙（5.47.0）測培養(yǎng)基的pH，一直到培養(yǎng)基的 pH為5.8為止（培養(yǎng)基的 pH 必須嚴格控制在 5.8）。4）培養(yǎng)基的分裝 ? 溶化的培養(yǎng)基應(yīng)該趁熱分裝。分

12、裝時，先將培養(yǎng)基倒入燒杯中，然后將燒杯 中的培養(yǎng)基倒入組培瓶（ 50 mL 或100 mL ）中。注意不要讓培養(yǎng)基沾到瓶口和瓶壁上。組培 瓶中培養(yǎng)基的量約 50 mL。每500 mL培養(yǎng)基，可分裝 1015瓶。5）培養(yǎng)基分裝完畢后，應(yīng)及時封蓋瓶口。最后在組培瓶外壁貼上標簽。2. 培養(yǎng)基滅菌（高壓滅菌）1）放培養(yǎng)瓶。將裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶直立于金屬小筐中，再放入高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi)。如果沒有 金屬小筐，可以在兩層錐形瓶之間放一塊玻璃板隔開。2）放置其他需要滅菌的物品。將其他需要滅菌的物品也放入高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi)，如裝有蒸餾水 的錐形瓶、帶螺口蓋的玻璃瓶、燒杯、廣口瓶（以上物品都要用牛皮紙封口），用牛皮紙

13、包 裹的培養(yǎng)皿、剪刀、解剖刀、鑷子、濾紙、鉛筆等。3）待需要滅菌的物品碼放完畢，蓋上鍋蓋。在98 kPa、121.3 C下，滅菌20 min。滅菌后取岀培養(yǎng)瓶，讓其中的培養(yǎng)基自然冷卻凝固。最好放置1 d 后再使用。3. 其他滅菌1）不耐熱的物質(zhì)將采用過濾滅菌如赤霉素、玉米素、脫落酸、尿素和某些維生素等。 過濾滅菌的原理:溶液通過濾膜后，細菌的細胞和孢子等因大于濾膜孔徑而被阻。2）玻璃器皿及耐熱用具等可采用干熱滅菌即利用烘箱加熱到 160-180 C的溫度來殺滅微生物。3）用于無菌操作的器械采用灼燒滅菌（三 ） 接種室和超凈工作臺的滅菌處理1. 接種室熏蒸滅菌 長期不用的培養(yǎng)室或接種室要進行熏蒸

14、。方法:甲醛、高錳酸鉀熏蒸。 甲醛的用量通常按每立方米空間 2-6 毫升計算，高錳酸鉀的用量是甲醛的一半。室內(nèi)準備妥當后， 把稱好的高錳酸鉀放在瓷碗或燒杯內(nèi) （最好在碗或杯下面鋪一張報紙，以利清洗 ），然后將甲醛也倒入碗 或杯內(nèi)，立即岀屋關(guān)門。幾秒鐘后，甲醛溶液即沸騰揮發(fā)。高錳酸鉀是一種氧化劑，當它與一部分甲醛作用時，由氧化反應(yīng)產(chǎn)生的熱可使其余的甲醛揮發(fā)為氣體。甲醛熏蒸接種室應(yīng)至少在使用前24小時進行，熏蒸后密閉保持 4小時以上再進入室內(nèi)工作。甲醛對人的眼、鼻有強烈刺激作用。因此，可在使 用前用氨進行中和。取與甲醛等量的氨水，倒在另一個燒杯里，迅速放入熏蒸室內(nèi)，使甲醛和氨水發(fā) 生中和反應(yīng)，以消

15、除甲醛味，減少對人體的刺激作用。使用氨水應(yīng)在工作前2小時進行。對有材料的培養(yǎng)室，也可以采用乙二醇加熱熏蒸2. 準備組培室將組培室打掃干凈，調(diào)至適宜溫度3. 超凈工作臺處理1）材料準備用75%酒精擦拭，準備好超凈工作臺內(nèi)物品，包括酒精棉球、75%和90%酒精、廢液缸、打火機、酒精燈、支架、鑷子、解剖刀、解剖剪等2）滅菌處理實驗開始前先用 75%酒精擦拭工作臺面，然后開啟紫外燈，紫外照射20min-30min。關(guān)閉紫外燈，開啟風機10min后打開日光燈。用 70 - 75 %的酒精拭擦臺面并消毒雙手。試驗用具也應(yīng)該用 酒精消毒。點燃酒精燈，將金屬器械在其火焰上灼燒，冷卻待用。注意：所有操作應(yīng)在火焰

16、近處并經(jīng)過灼燒進行。金屬器械不能過度灼燒，以防退火。移液管不能灼燒，培養(yǎng)瓶口、塑料材料、橡膠材料過火焰不能時間太長。（四） 無菌苗的培養(yǎng)（2016/3/11）1. 培養(yǎng)基配制（方法同（二）培養(yǎng)基的配制與滅菌）種子的萌發(fā)采用 1/2MS培養(yǎng)基1/2MS培養(yǎng)基貯備液I貯備液H貯備液皿貯備液W蔗糖瓊脂12.5mL2.5mL2.5mL2.5mL15g5g2. 馬齒莧（番茄）種子處理1）洗去浮塵和上漂的種子，挑選飽滿種子，置于培養(yǎng)瓶中流水沖洗30min后倒掉水備用；2）將種子置于培養(yǎng)瓶中，用75%酒精消毒滅菌3060s，用無菌水沖洗干凈；3）用1%升汞處理810min，然后用無菌水沖洗 34次，放入無菌

17、培養(yǎng)皿中，置于酒精燈火焰下 方，用無菌接種器械進行分離接種。3. 接種及培養(yǎng)1）用酒精擦洗工作臺和手，對接種器具進行灼燒滅菌；2）打開培養(yǎng)瓶，瓶口在燈焰處旋轉(zhuǎn)灼燒，用鑷子（90%酒精浸泡并灼燒） 將培養(yǎng)材料置于培養(yǎng)基上，灼燒瓶口，蓋上瓶塞。3）培養(yǎng)瓶貼上標簽，做好標記，然后放到光照培養(yǎng)箱中或培養(yǎng)室培養(yǎng)架上進行培養(yǎng)，條件為 2000-3000LX，26 ± 1C,培養(yǎng)一周。實驗結(jié)果：所有馬齒莧無菌苗均染菌（未拍照）實驗分析：馬齒莧種子消毒、滅菌時間不足 接種室和培養(yǎng)實滅菌不徹底，環(huán)境較臟 實驗操作不正確 超凈工作臺不干凈（五）愈傷組織誘導（2016/3/25）1. 培養(yǎng)基的配制（方法同

18、（二）培養(yǎng)基的配制與滅菌）愈傷組織誘導培養(yǎng)基組別6-BANNA貯備液I貯備液n貯備液貯備液IV蔗糖瓊脂-一一0.5%0.5%25mL5mL5mL5mL15g5g-二二0.5%1%三0.5%0.5%四1%1%2. 無菌苗和外植體的處理1）無菌苗處理從培養(yǎng)瓶中取岀無菌苗，用無菌水洗凈培養(yǎng)基，切成0.5cm大小，葉片較大的進行裁剪，置于無菌培養(yǎng)皿備用；2）夕卜植體處理a將野外植物洗干凈塵土并用洗衣粉刷干凈；b將洗凈植物切去葉柄，將葉片從葉脈處剪開，再切成34 mm2的小塊；嫩莖需切取兩個節(jié)之間的節(jié)間部分，長約1 cm，流水沖洗30min ；c將外植體置于培養(yǎng)瓶中，用75%酒精持續(xù)消毒滅菌 18s,然

19、后用無菌水沖洗d 用1%升汞處理1215min，然后用無菌水沖洗 34次，放入無菌培養(yǎng)皿中，置于酒精燈 火焰下方，用無菌解剖刀切去兩端后進行接種。3. 接種及培養(yǎng)（同無菌苗的建立）4. 剔除長菌嚴重的培養(yǎng)瓶，其余繼續(xù)培養(yǎng)5. 觀察實驗現(xiàn)象實驗結(jié)果：組別材料染菌率枯死率存活率-二二馬齒莧100% ( 2)所有葉柄基部沒 有散開，一起消 毒75%酒精15s 升汞：15min盤龍參根00100% ( 2)盤龍參-葉綠色0100%盤龍參-葉基部050% (1)50% (1)苜蓿（花+葉）0花-0 葉-50%花：100%葉：50%波斯菊葉00100%材馬齒莧盤龍參根第一周(2016/4/8)料結(jié)果材盤龍

20、參葉盤龍參葉基部料結(jié)果材苜蓿花+葉波斯菊葉實驗分析:1、僅有無菌苗染菌：無菌苗本身染菌，但未被發(fā)現(xiàn)；實驗培養(yǎng)基凝固不徹底，粘到瓶子壁上；培養(yǎng)基pH未調(diào)好；操作時，動作不正確無菌苗僅用無菌水洗滌，未用酒精和升汞開始愈傷組織長勢良好長愈傷組織2、外植體有部分枯死：滅菌過度，時間過長3、盤龍參組織無變化：可能由于培養(yǎng)基中植物激素不適宜，培養(yǎng)室溫度、光照等不恰當4、波斯菊長愈傷組織明顯，此培養(yǎng)基較適宜波斯菊5、不同植物對植物激素的要求不同，所以在同一濃度下岀現(xiàn)不同的結(jié)果（六）生根實驗（類似扦插）（2016/4/15）1. 生根培養(yǎng)基配制（方法同（二）培養(yǎng)基的配制與滅菌）生根培養(yǎng)基（1/2MS ）組別6

21、-BANNA貯備液I貯備液H貯備液皿貯備液W蔗糖瓊脂-二二00.2%12.5mL2.5mL2.5mL2.5mL15g5g三0.4%四0.6%2.無菌苗和外植體的處理1）無菌苗處理從培養(yǎng)瓶中取岀無菌苗，用無菌水洗凈培養(yǎng)基，保留部分幼嫩葉片，切成0.5cm大?。ú牧媳M量幼嫩），置于無菌培養(yǎng)皿備用；2）夕卜植體處理a將野外植物洗干凈塵土并用洗衣粉刷干凈；b將洗凈植物切去老葉，保留頂端嫩葉、嫩莖，切成長約2 cm莖段，流水沖洗 30min ；c將外植體置于培養(yǎng)瓶中，用75%酒精持續(xù)消毒滅菌 18s,然后用無菌水沖洗d 用1%升汞處理13min，然后用無菌水沖洗 34次，放入無菌培養(yǎng)皿中，置于酒精燈火焰

22、 下方，用無菌解剖刀切去兩端后（約1.5cm）進行接種。3. 接種及培養(yǎng)（同無菌苗的建立）一瓶接種23個莖段，直接插入培養(yǎng)基中，形態(tài)學上端朝上;4. 剔除長菌嚴重的培養(yǎng)瓶，其余繼續(xù)培養(yǎng)5. 觀察實驗現(xiàn)象實驗結(jié)果：組別材料染菌率枯死率存活率-二二菊花莖（1）0100%075%酒精15s 升汞：15min月季莖（2）100%( 2)月季花（2）第一周 50%（ 1）第二周 100%（ 2）女貞莖（4）0100%（ 1長愈傷組織、3無變化）香樟（1）100% （有愈傷）杜鵑（1）100%波斯菊莖（1）100% （略長根， 第二周長菌）材月季花月季莖第一周(206/4/29)綻開，無根花苞長真菌，無根

23、 菊花莖長真菌，無根葉稍長，無根，未染菌 香樟有白色菌點？ or愈傷組織?波斯菊莖結(jié)無根，幾乎無變化 果長勢旺盛，略微生根材女貞莖料結(jié)無變化，無根材料月季花波斯菊結(jié)果開始枯萎，無根波斯菊開始長菌，黃色細菌，菌落光滑 稍長根，但不明顯第二周（2016/5/6）其余材料均無明顯變化綜合對比不同濃度NAA對波斯菊生根的影響(2016/5/6)NAA濃度實驗結(jié)果顯示：較高濃度NAA誘導長根效果更好。如圖所示，隨NAA濃度的增加，波斯菊生根越多，長勢越好（七）生芽實驗（2016/5/6）1. 生芽培養(yǎng)基配制（方法同（二）培養(yǎng)基的配制與滅菌）0.5cm大小，葉片較大的進行裁剪，置生芽培養(yǎng)基（MS）組別6-

24、BANNA貯備液I貯備液H貯備液皿貯備液W蔗糖瓊脂-一一5%0.4%12.5mL2.5mL2.5mL2.5mL15g5g-二二5%0.2%三4%0.4%四4%0.2%2. 無菌苗和外植體的處理（同上）1） 無菌苗處理從培養(yǎng)瓶中取岀無菌苗，用無菌水洗凈培養(yǎng)基，切成 于無菌培養(yǎng)皿備用；2）夕卜植體處理a將野外植物洗干凈塵土并用洗衣粉刷干凈；b將洗凈植物除葉留芽，切成長約2 cm，流水沖洗30min ;c將外植體置于培養(yǎng)瓶中，用75%酒精持續(xù)消毒滅菌18s,然后用無菌水沖洗d 用1%升汞處理1215min，然后用無菌水沖洗 34次，放入無菌培養(yǎng)皿中，置于酒精燈 火焰下方，用無菌解剖刀切去兩端后進行接

25、種。3. 接種及培養(yǎng)（同無菌苗的建立）4. 剔除長菌嚴重的培養(yǎng)瓶，其余繼續(xù)培養(yǎng)5. 觀察實驗現(xiàn)象實驗結(jié)果：組別材料染菌率枯死率存活率長芽率-二二波斯菊第三周有染菌12.5%87.5%100%75%酒精15s 升汞：15min番茄100%材波斯菊料(2016/5/20)有部分 死亡， 未死亡 的均已 生芽， 長勢好 該培養(yǎng) 基適宜 用于誘 導波斯 菊生芽材料番茄結(jié)果無生芽 趨勢， 但是可 能要長 愈傷組 織該培養(yǎng) 基濃度 不適宜 誘導番 茄生芽第二周（2016/5/27）材料波斯菊結(jié)莖段生果芽長勢良好開始形成愈傷組纟只材番茄料結(jié)番茄長果勢較波斯菊緩慢第-二二周生芽（腋一芽較多）也形成愈傷組織第三周（2016/6/3）材料波斯菊結(jié)部分長勢良好，愈傷組織和芽軍生長旺盛；波斯菊部分死亡，部分開始長菌，果多數(shù)為真菌：1、可能是植物本身含有的菌，培養(yǎng)一段時間后開始生長；2、培養(yǎng)瓶蓋子上部的通氣孔有破損3、培養(yǎng)室內(nèi)不干凈材料番茄結(jié)果番茄是無菌苗，未岀現(xiàn)染菌情