HIV實驗室標準操作規(guī)程

1、沙洋縣人民醫(yī)院艾滋病篩查實驗室作業(yè)指導書編制人：王笑石審核人：王笑石批準人：李克華批準日期：2016/1/1實施日期：2016/1/1G受控編號：輸血科目 錄序號主 題 內(nèi) 容代 號頁 號1全自動化學發(fā)光儀操作規(guī)程2全自動化學發(fā)光儀溶液配制操作3生物安全柜(BSC-1500A2-X型)標準操作規(guī)程4HIV臨床檢驗標準操作規(guī)程（化學發(fā)光法）567891011121314151617181920修 訂 頁序號文件編號頁碼需更改的內(nèi)容更改內(nèi)容批準人批準日期1234567891011121314151617181920 CHEMCLIN 600全自動化學發(fā)光儀標準化操作規(guī)程（SOP）一 工作環(huán)境溫度：

2、1030濕度：小于70%電源：220V，50Hz二 開機前的的準備工作1 確保廢液桶已清空；2 配制洗針液，確保洗針液的量足夠做完一批試驗；配置方法見附錄1；3 配制洗板液，并裝入洗板液桶中，確保洗板液的量足夠做完一批試驗（每整板微孔板實驗需準備洗板液500ml左右）；配置方法見附錄2；4 準備好試劑和標本。三 開機1 打開儀器電源開關（儀器正面左側）2 打開打印機電源3 打開顯示器及電腦主機電源，待電腦啟動后雙擊桌面 圖標，即可啟動儀器。四 開機維護在運行實驗之前，需要對儀器做一次日常維護，具體步驟如下：1. 點擊主界面中的“維護”按鈕 ，就進入到維護界面，如下圖所示：圖1 維護界面2. 準

3、備好洗針液、洗板液及酒精等系統(tǒng)液體，確保洗板液管路在洗板液桶中，點擊“開機維護”按鈕，儀器開始執(zhí)行開機維護動作；3. 開機維護完成后，點擊窗口右上角“關閉”按鈕 ，即可退出維護界面；4. 將酒精溶液收好并蓋好瓶蓋。五 選擇項目和樣本在儀器進行完日常維護后，就可以編制工作列表，具體流程如下：1. 點擊主界面中的“項目”按鈕 ，進入“項目選擇”界面中選擇此次試驗需要做的項目，點擊“確認”返回到主界面；2. 在主界面的樣本輸入框 中輸入此次試驗需要做的樣本數(shù)，點擊 按鈕，就能將所需做樣本添加到項目中；3. 預選擇樣本對應的項目。在樣本和項目對應表中可通過點擊或拖住鼠標左鍵來選擇，被選中的樣本列表變?yōu)?/p>

4、黃色；也可通過再次點擊左鍵來取消預選的樣本；可通過點擊 按鈕選定所有的樣本，同樣可通過點擊 按鈕取消所有的選擇；4. 確認樣本和項目對應表。檢查無誤后點擊對應表中項目的名稱欄，被選中的項目列表則變?yōu)樯罹G色。六 運行檢測樣本在選擇好檢測項目和樣本后，就可以進行如下操作：1. 在主界面點擊“運行”按鈕 ，系統(tǒng)會彈出一對話框，提示選擇試劑批號。若為默認批號直接點“確定”按鈕，若需更改試劑批號或質控品、校準品重復孔數(shù)，可點擊“更改”按鈕進行更改。2. 根據(jù)軟件提示的標本、微孔板、試劑、校準品的位置來擺放這些組分的位置。（注意：一定按照儀器提示的位置來擺放）3. 點擊“運行”按鈕，儀器開始工作。（注意：

5、當儀器檢測到有的試劑量或樣本量不夠時，儀器會彈出提示框，按提示補充試劑或樣品后再點擊“重試”）。4. 當所有實驗結束后，儀器提示“實驗已完成”，點擊“確定”；再點擊“退出”按鈕回到主界面。5. 通過點擊主界面的“結果”按鈕可進入到數(shù)據(jù)處理界面，在此界面可進行數(shù)據(jù)的結果的顯示、查詢、打印等功能。七 關機維護在測試結束后，需要對儀器再進行一次日常維護，具體步驟基本與第四部分“開機維護”相同，唯一不同的是確保洗板液管路在去離子水桶中，點擊“關機維護”功能按鈕。將微孔板蓋用酒精擦拭干凈。八 關機點擊主界面中“退出”按鈕即可退出測試軟件，之后關閉電腦。九 保養(yǎng)1. 日保養(yǎng)A. 每次實驗前后都需要執(zhí)行維護

6、程序，具體參照第四部分“開機維護”和第七部分“關機維護”；B. 做完試驗后請用酒精擦拭臺面，保持臺面清潔；C. 每次實驗后需要執(zhí)行維護程序，要將微孔板蓋用酒精擦拭干凈；D. 做完實驗后，關閉電源，用棉簽蘸上酒精分別對四根加樣針的外壁進行擦拭。2. 周保養(yǎng)在日保養(yǎng)的基礎上增加管路消毒和試劑瓶清洗，具體按如下步驟進行操作：A. 將置于去離子水中的洗板機管路放置到保養(yǎng)液中（二氧化氯，配置方法見附錄3），多次執(zhí)行維護程序中的“洗板機維護液灌洗”；然后再將管路放回到去離子水瓶中，再反復執(zhí)行“洗板機維護液灌洗”，直至沖洗干凈。B. 將盛放A、B底物、稀釋液等通用試劑瓶用去離子水進行清洗并晾干備用。3. 月

7、保養(yǎng)在周保養(yǎng)的基礎上增加對試劑桶的維護保養(yǎng)，倒掉殘余的洗針液和洗板液，用去離子水進行涮洗，直至桶內(nèi)無異物。十 注意事項1、為確保實驗的順利進行，在實驗過程中請關閉倉門；2、儀器運行時，請不要操作電腦運行其它程序，也不能使用U盤或其他即插即用設備，否則會造成儀器運行錯誤；3、載架放置一定要正確，注意觀察指示燈，燈亮表示放置正確；燈不亮表示放置不正確，需重新放置；4、擺放試劑一定要注意位置編號，不要放錯；試劑量要足夠，禁止液面有氣泡；5、試劑瓶瓶內(nèi)液體不能加注得過滿，以免在分配試劑的過程中吸入空氣，造成部分孔加不上試劑；6、標本一定要處理好，切忌有血凝塊及纖維蛋白原；7、血清的最少量為 (300+

8、1.1*A)ul A為標本所做項目的所需血清數(shù)量之和；8、拼板時，不夠8孔時一定要用廢孔填充，且要平，以達到最佳效果；9、確保洗針臺的廢液管路通暢，廢液管路不能深入到廢液桶內(nèi)過長；10、儀器進行日維護，要確保針管路中無氣泡。 CHEMCLIN 600化學發(fā)光儀器溶液配制規(guī)程 洗針液配制方法1、 將去離子水加入到配液桶內(nèi)，加至接近2L刻度處；2、 取20mL專用洗針濃縮液加到配液桶中；3、 再加去離子水定容至2L刻度處；4、 蓋緊配液桶蓋，搖勻待用；5、 從洗針液傳感器秤上取出洗針液桶，倒立后擰開瓶蓋，將配好的洗針液倒入該桶中；6、 依據(jù)上述方法，將洗針液桶灌滿；7、 擰緊洗針液桶瓶蓋，將管路和

9、瓶蓋裝好，配制工作結束。附錄2洗板液配制方法1、 將去離子水加入到配液桶內(nèi)，加至接近2L刻度處；2、 取1瓶（每瓶100ml）專用洗板濃縮液加到配液桶中；3、 再加去離子水定容至2L刻度處；4、 蓋緊配液桶蓋，搖勻倒入到洗板液桶中；5、 配制工作結束。附錄3洗板機管路沖洗液二氧化氯溶液配制方法1、 將去離子水加入到桶內(nèi)，加至1L刻度處；2、 取兩粒二氧化氯的片劑置于桶中；3、 蓋緊配液桶蓋，搖勻直至片劑完全溶解，待用；4、 配制工作結束。 生物安全柜(BSC-1500A2-X型)標準操作規(guī)程1目的為規(guī)范BSC-1500A2-X型生物安全柜的操作，確保該儀器的正確使用，依據(jù)輸血實驗室管理程序4.

10、2.1(2)條款的要求制定本規(guī)程。2適用范圍適用于輸血科（血庫）技術人員進行實驗技術操作。3職責輸血科（血庫）技術人員負責BSC-1500A2-X型生物安全柜的操作。4原理（略）5所需設備和材料（略）6環(huán)境條件（略）7操作步驟7.1實驗前，先用75%乙醇擦拭操作臺表面以去除污染，劃分好生物安全柜內(nèi)的清潔區(qū)、半污染區(qū)與污染區(qū)，將儀器的“Light”按鈕按到“U.V.”標志處，打開紫外燈消毒30min，然后將實驗全部物品按照相應分區(qū)分別移入生物安全柜內(nèi)。7.2消毒結束后，將“Light”按鈕按到“ON”標志處，關閉紫外燈，開啟實驗照明燈。7.3將“Blower”按鈕按到“ON”位置，打開鼓風機，然

11、后把生物安全柜前玻璃窗拉升到適當位置（不能高于25.4cm,否則儀器會報警），待鼓風機運轉15min后，將雙臂緩緩伸入安全柜內(nèi)，靜止1min,待壓力指示儀表穩(wěn)定以后，再進行實驗操作。7.4操作時應按照從清潔區(qū)到污染區(qū)進行，以避免交叉污染。為防止可能濺出的液滴，可在操作臺面上鋪一層用消毒劑浸泡過的紗布，但不能覆蓋生物安全柜氣流通道。7.5實驗完成后，先用消毒液溶液擦拭操作臺面，然后關閉玻璃窗，保持風機繼續(xù)運轉1015min，同時打開紫外線燈，消毒30min。7.6消毒30min后，關閉紫外燈和鼓風機。8注意事項8.1生物安全柜內(nèi)不得放入與本次實驗無關的物品，物品放置不得擋住氣道口，以免干擾氣流正

12、常流動。8.2操作時，嚴禁使用酒精燈等明火，以避免產(chǎn)生的熱量干擾柜內(nèi)氣流穩(wěn)定，且明火可能損壞高效過濾器。8.3操作時，盡量減少實驗室內(nèi)人員走動，以防止柜內(nèi)氣流不穩(wěn)定。8.4在實驗操作時，操作者應保證臉部在工作窗口之上，動作應輕柔、舒緩，防止柜內(nèi)氣流受到影響。8.5生物安全柜應定期進行檢測與保養(yǎng)。工作中一旦發(fā)現(xiàn)生物安全柜運行異常，應立即停止使用，采取相應處理措施，并通知相關人員檢查維修。9相關文件及表單（略）人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒（化學發(fā)光法）臨床檢驗標準操作規(guī)程一、項目名稱：人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒（化學發(fā)光法）二、實驗原理：采用雙抗原夾心（兩步法）分析模式，預先采用基因工程HI

13、V(1+2) 特異性蛋白抗原包被固相發(fā)光微孔板。加入血清或血漿標本后，待測抗體與包被抗原形成復合物，再加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的相同抗原，三者結合形成雙抗原夾心結構，洗滌除去未結合的酶標抗原，加入HRP化學發(fā)光底物液，測定其發(fā)光強度（RLU），根據(jù)臨界值判斷樣本中是否含有HIV特異性抗體。三、試劑：為北京科美生物技術有限公司提供人類免疫缺陷病毒抗體化學發(fā)光診斷試劑盒，規(guī)格為96T，2-8貯存，有效期6個月；在效期內(nèi)使用試劑。四、 儀器：可適用北京科美生物技術有限公司提供的GloRun、CDM-I發(fā)光分析儀、ECLIA-II發(fā)光分析儀、CHEMCLIN-600全自動發(fā)光儀、CHEMCLI

14、N-1500全自動發(fā)光儀。五、操作步驟： 5.1自4冰箱中取出試劑盒，室溫(1825)平衡20分鐘。5.2將發(fā)光板從密封袋中取出，設空白對照一孔，不加樣本稀釋液和樣本，設陰性對照3孔，陽性對照2孔，取陰性對照和陽性對照分別加入100l 于相對應對照孔中。其余每孔先加樣本稀釋液50l，再加入樣本50l。微量震蕩器充分振蕩混勻，用不干膠片封蓋反應板。 5.3發(fā)光板置37溫育30分鐘，小心甩去反應液，用稀釋后的洗滌液洗板5次，每孔加滿洗滌液，每次浸泡10秒，最后在干凈的吸水紙上拍干。5.4空白孔除外，每孔加入酶結合物100l，輕輕振蕩混勻后，用不干膠片封蓋反應板。5.5發(fā)光板置37溫育30分鐘，洗板

15、5次，操作同上，拍干。5.6將發(fā)光底物A液與B液 1:1混合后，每孔加入底物工作液100l。5.7置室溫避光反應5分鐘后，須于加化學發(fā)光底物液后的第5-30分鐘內(nèi)用發(fā)光儀測定各孔RLU值（測量時間1秒/孔）。六、質量控制： 6.1 質控血清符合規(guī)定；6.2 一旦發(fā)現(xiàn)失控，應即時查找和分析原因，并在該結果欄作詳細的批注和記錄解決的過程；失控情況處理及原因分析按照實驗室內(nèi)失控分析程序進行。七、結果計算7.1臨界值（CUTOFF） 2.1×陰性對照孔平均RLU值。7.2待測樣品RLU值 臨界值為HIV抗體陽性。7.3待測樣品RLU值 臨界值為HIV抗體陰性。對呈陰性反應的樣品，可由實施檢測

16、的實驗室出具HIV抗體陰性報告；對呈陽性反應的樣品，須進行復檢，不能出陽性報告。陽性樣品的復檢試驗：對初篩呈陽性反應的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復檢測。如兩種試劑復測均呈陰性反應，則報告HIV抗體陰性；如均呈陽性反應，或一陰一陽，需送艾滋病確認實驗室進行確認（見圖1）。樣品篩查試劑陽性反應均陰性反應初篩檢測陰性反應原有試劑加另外一種篩查試劑陽性反應一陰一陽均陽性反應送確認實驗室確認 報告陰性八、性能指標：8.1精密性：分析內(nèi) CV% 15%（n=10） 8.2有效期：在28貯存，有效期12個月。8.3交叉反應：對臨床確診的22例風疹病人血清、13例類風濕關節(jié)炎病人血

17、清、15例系統(tǒng)紅斑狼瘡病人血清、16例干燥綜合癥病人血清、8例多肌炎病人血清進行HIV1+2型抗體檢測未出現(xiàn)陽性。九、方法局限性：9.1本試劑盒僅用于血清或血漿樣本的測定，對其它體液樣本測定的可靠性尚未得到充分的實驗確認。9.2此試劑不能用于HIV抗原的篩查。9.3低滴度的HIV抗體在感染的初期不能被檢出，陰性結果不能排除HIV1、HIV2的感染。9.4變異的HIV1型（M群和O群）HIV2型可能出現(xiàn)假陰性，已知檢測方法中，尚無法完全保證消除漏檢。9.5加熱標本可以影響結果。十、臨床意義：10.1 HIV抗體檢測可用于監(jiān)測、診斷、血液篩查。10.2 以監(jiān)測為目的的檢測是為了解不同人群HIV感染

18、率及其變化趨勢而進行的檢測，檢測的人群包括各類高危人群和一般人群。10.3 以診斷為目的的檢測是為了確定個體HIV感染狀況而進行的檢測，包括臨床檢測和自愿咨詢檢測、術前檢測、根據(jù)特殊需要進行的體檢等。10.4 以血液篩查為目的的檢測是為了防止輸血傳播HIV而進行的檢測，包括獻血員篩查和原料血漿篩查。十一、標本采集及處理： 1 檢測標本種類要求：靜脈血或動脈血的血清或血漿標本均可作為檢測標本；溶血、脂血、黃疸血不宜使用，如需使用，應在報告單上注明“標本溶血/脂血/黃疸”。2 受檢者準備：受檢者無需做特殊準備；3 標本采集及處理：宜空腹采集靜脈血，無需抗凝，采用離心方法分離血清，分離血清應徹底，不

19、含纖維蛋白；病人標本無需特殊制備處理，采用正確醫(yī)用技術收集全血標本，離心分離后提取血清用于檢測。使用抗凝劑（濃度為21.8mmol/L枸櫞酸鈉，5mmol/L EDTA-Na，15IU/ml肝素，10mmol/L草酸鈉）不影響檢測結果。4 標本保存：留取的標本最好在當天檢測，不能立即檢測的應放置于2-8不應超過3天，血清置于-20以下可長期保存，但應避免反復冰融。5. 同規(guī)格的塑料離心管；6 標本外送：如涉及到需要外送的標本，必須以規(guī)定的容器（0.5ml塑料離心管）存放并密封，并根據(jù)郵寄規(guī)則和要求進行包裝，運送時還要放入冰袋（2-8）或干冰（-10）由專人運送至指定地點指定接收人。7 標本拒收：凡與以上所述內(nèi)容不符的標本，檢驗人員應向臨床或就診者說明拒收標本的原因，并提出解決的方案或建議。十二、注意事項：1 84消毒液等強氧化劑能引起發(fā)光底物液發(fā)生反應，導致結果誤判，故發(fā)光操作實驗室應禁止使用此類消毒劑.2 檢測必須符合實驗室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴格防止交叉污染。所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應當按傳染物處理。3 不要使用過期的試劑，操作前應仔細閱讀使用說明書，嚴格按照說明書的操作程序進行，不同批號