正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選洋參御糖丸最佳水提工藝研究

1、 收稿日期 :2007-07-10作者簡(jiǎn)介 :謝寧 (1957- , 男 , 湖北潛江人 , 教授 , 博士研究生導(dǎo)師 ,博士 , 主要從事中醫(yī)藥防治老年疾病的研究。藥與癥狀出現(xiàn)后用差別不大 (P >0. 05 可能與病例少有 關(guān) , 但第 9天后均低于同期空白對(duì)照組脾虛積分 , 差異顯著 (P 0. 01 。 第 21天中藥干預(yù)兩組脾虛積分接近正常人 水平 。 說明益氣健脾中藥干預(yù)后 , 可以促進(jìn)機(jī)體的修復(fù)能 力 , 使機(jī)體能較快的恢復(fù) 。這種脾虛證的出現(xiàn)往往伴隨著 血液毒性的發(fā)生 , 符合中醫(yī)認(rèn)為腎藏精 , 精生髓 , 髓居骨中 而化生血液 , 腎精又依賴脾的運(yùn)化功能正常 , 將水谷

2、精微輸 送于腎 , 依靠腎的滋養(yǎng) 、 溫煦作用 , 充盈于骨髓 , 化生為血液 注之于脈中的理論 。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用益氣健脾中藥干預(yù)后 , 使 化療后所致的血液學(xué)毒性發(fā)生率降低 , 嚴(yán)重程度減輕 , 與空 白對(duì)照組有顯著差異 (P <0. 05 。表明中醫(yī)藥可以減輕 化療所致的血液學(xué)毒性 , 或使化療所致的毒性程度減弱 , 提 高腫瘤患者對(duì)化療的耐受性 。與周愛香等 5觀察的結(jié)果 一致 。 T 細(xì)胞亞群變化看予益氣健脾中藥干預(yù)后 , 可以增加 T 細(xì)胞總數(shù) , 使 CD 4+/CD8+比值向 CD 4+方向漂移 , 增強(qiáng) 機(jī)體免疫能力 。結(jié)果表明 :抗腫瘤化療藥物可影響中醫(yī)證候 , 使腫瘤患者

3、 出現(xiàn)或加重脾虛證 , 出現(xiàn)較嚴(yán)重的毒副反應(yīng) , 損害機(jī)體抵抗力。 通過益氣健脾中藥干預(yù)后 , 可減輕或改善患者脾虛證 , 減輕化 療毒副反應(yīng)。 因此通過中醫(yī)的辨證論治的原則 , 指導(dǎo)臨床用 藥 , 改善化療患者的脾虛癥狀 , 提高機(jī)體免疫力 , 增加腫瘤細(xì)胞 對(duì)化療藥物的敏感性 , 提高腫瘤綜合治療的療效。 參考文獻(xiàn)1 孫建紅 , 郭勇 . 三種常用化療藥致正常大鼠脾虛證候的觀察J .浙江中醫(yī)雜志 , 2006, 41(6 :350-3512 湯釗猷 . 現(xiàn)代腫瘤學(xué) M.2版 . 北京 :人民衛(wèi)生出版社 , 2002:508-5113 沈壯雷 , 李刀英 , 葛小平 , 等 . 保元大黃湯治

4、療慢性腎功能衰竭的臨床研究 J .中國中西醫(yī)結(jié)合雜志 , 1994, 14(5 :2684 中西醫(yī)結(jié)合研究會(huì) . 中醫(yī)虛證辨證參考標(biāo)準(zhǔn) S.中西醫(yī)結(jié)合雜志 , 1983, 3(2 :1175 周愛香 , 李小芹 , 郭淑英 , 等 . 益氣生血片對(duì)脾虛動(dòng)物造血和免疫功能的影響 J .中藥新藥與臨床藥理 , 2002, 13(2 :95第 25卷 第 12期2007年 12月中 華 中 醫(yī) 藥 學(xué) 刊CH I N ESE ARCH I V ES O F TRAD I T I O NAL CH I N ESE M ED I C I N EVol . 25No . 12Dec . 2007中 華 中

5、 醫(yī) 藥學(xué) 刊正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選洋參御糖丸最佳水提工藝研究謝 寧 , 關(guān)慧波 , 侯淑峰 , 吳 頌 , 王小博(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) , 黑龍江 哈爾濱 150040 摘 要 :采用正交試驗(yàn)法對(duì)洋參御糖丸的水提工藝進(jìn)行篩選研究 , 以芍藥中芍藥苷的提取率作為考查指標(biāo) , 采用高效液相色譜法測(cè)定含量 , 最佳工藝為 A 3B 1C 3, 所得提取液中芍藥苷含量最高 。關(guān)鍵詞 :洋參御糖丸 ; 工藝研究 ; 芍藥苷 ; 高效液相色譜法中圖分類號(hào) :R284 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 :A 文章編號(hào) :1673-7717(2007 12-2446-02O rtho go na l Te s t App li ed t

6、o O p ti m a lW a te r -e xtra ting P r o ce s s f o r Yang she n Yu ta ng W anX I E N ing, G UAN Hui 2bo, HOU Shu 2feng,WU Song,WANG Xiao 2bo(Heil ongjiang University of Chinese Medicine, Harbin, Heil ongjiang, Ab s trac t:O rthogonal test app lied t o water -extracting p r -tractingratefr om paeon

7、y r oot used f or reference HP f best technique was A 3B 1C 3, and the extracting rate . Ke y wo rd or; HP LC 、 天花粉 、 黃芪 、 龜板 、 玉竹 、 烏梅 、 葛根 、 麥冬 、 山茱萸 、 女貞子 、 白芍等藥組成 , 具有益氣補(bǔ)腎 、 滋陰生津 、 活血通絡(luò)之功 。 它是以民間驗(yàn)方為基礎(chǔ) , 結(jié)合歷 代著名醫(yī)家治療消渴病證的經(jīng)驗(yàn)和大量的文獻(xiàn)資料擬訂而 成 , 也是筆者多年臨床實(shí)踐的經(jīng)驗(yàn) 。 本文采用正交設(shè)計(jì)法 , 考察加水量 、 煎煮時(shí)間及煎煮次數(shù)三者之間交互作用對(duì)提 取效果

8、的影響 , 以芍藥苷含量為指標(biāo) , 確定洋參御糖丸中水 提取部分最佳提取工藝 。1 儀器與試劑島津高效液相色譜儀 (210型泵 , 210檢測(cè)器 , N2000色譜工作站 。 實(shí)驗(yàn)用藥購自哈爾濱市松茂藥行 , 經(jīng)鑒定符 合 中國藥典 2000年版規(guī)定 。芍藥苷由中國藥品生物制 品檢定所提供 。色譜 條 件 :色 譜 柱 為 sy mm tryC 18(250mm ×4. 6mm, 5m , 以甲醇 :水 (30 70, 體積比 為流動(dòng)相 , 流速為 1mL /m in, 檢測(cè)波長(zhǎng)為 230n m, 柱溫為 25 。6442第 25卷 第 12期 2007年 12月中 華 中 醫(yī) 藥

9、學(xué) 刊CH I N ESE ARCH I V ES O F TRAD I T I O NAL CH I N ESE M ED I C I N EVol . 25No . 12Dec . 2007中 華 中 醫(yī) 藥學(xué) 刊2 實(shí)驗(yàn)方法2. 1 工藝流程根據(jù)處方中藥材的理化性質(zhì)及要求 , 確定工藝路線 , 見 圖 1。2. 2 正交設(shè)計(jì)一般認(rèn)為水煎煮兩次即可把主要有效成分提出 1, 并 可煎出所含成分的 80%以上 ; 浸泡時(shí)間為 60m in, 可提高煎 出效率 2。 本試驗(yàn)根據(jù)工藝選定黃芪等藥水提取的煎煮時(shí) 間、 加水量和煎煮次數(shù)考察的 3個(gè)因素 , 各取 3個(gè)水平 , 以芍 藥苷含量為考察指標(biāo)

10、 , 選用 L934正交表進(jìn)行試驗(yàn)。 見表 1。圖 1 工藝路線表 1因素水平 A (B(C(D (18倍 1. 0h 1次210倍 1. 5h 2次312倍 2. 0h 3次2. 3 指標(biāo)測(cè)定法2. 3. 1 樣品制備 根據(jù)正交試驗(yàn)表設(shè)計(jì) , 按處方量稱取芍 藥等干燥藥材 9份 , 每份 50g, 用恒溫電熱套按照表 1分 9組同時(shí)煎煮 , 過濾 , 濾液加 75%乙醇 50mL, 醇沉 24h 后 , 上 清液經(jīng) 0. 45m 微孔濾膜濾過后 , 吸取 5mL 用甲醇定容于 50mL 容量量瓶中 (供測(cè)試芍藥苷用 。2. 3. 2 對(duì)照液制備 精密稱取在 120 時(shí)減壓干燥至恒 重的芍藥苷

11、對(duì)照品 6. 96mg, 加甲醇定容于 10mL 量瓶中 , 即 配標(biāo)準(zhǔn)溶液 。2. 3. 3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 精密吸取對(duì)照品混合溶液 10、 20、 30、 40、 50L 注入高效液相色譜儀 。 以峰面積積分值為 縱坐標(biāo) , 對(duì)照品量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 , 并進(jìn)行線性回 歸 , 計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為 :Y =2×106X -155153, r =019992。 線性范圍為 :0. 69603. 4797g 。2. 3. 4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 本品經(jīng)甲醇提取后 , 供試液分別在1、 2、 3、 5、 8h 后測(cè)定 , 考察其穩(wěn)定性 , RS D 為 1. 29%。2. 3. 5 精

12、密度試驗(yàn) 取處理后的同一樣品 , 按含量測(cè)定方 法重復(fù)測(cè)定 5次 , 測(cè)定芍藥苷的峰面積 RS D 為 0. 56%。 2. 3. 6 重現(xiàn)性試驗(yàn) 精密稱取同一樣品 5份 , 按樣品溶液 的制備和測(cè)試方法測(cè)定 , RS D 為 1. 23%(n =5 。2. 3. 7 樣品測(cè)定 吸取各濃度混合溶液 10L 注入高效 液相色譜儀 。 測(cè)定峰面積 , 按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算樣品水煎液 中芍藥苷的相應(yīng)含量 , 結(jié)果見表 2, 方差分析見表 3。3 討 論本研究結(jié)果是以提取物中芍藥苷含量為評(píng)價(jià)指標(biāo) 。實(shí) 驗(yàn)結(jié)果表明 , 影響本研究提取物的因素 (加水量 A 、 煎煮時(shí) 間 B 、 煎煮次數(shù) C , 統(tǒng)計(jì)分析

13、知 A 、 C 因素對(duì)檢測(cè)指標(biāo)具有 顯著性影響 , 因素 B 對(duì)檢測(cè)指標(biāo)影響不大 。 工藝優(yōu)選結(jié)果 表明 , 3個(gè)因素的最佳組合為 A3B 1C 3。 因此 , 洋參御糖丸水 提正交試驗(yàn)的最佳工藝條件為每次加 12倍量水 、 煎煮 1h 、 水煎煮 3次 。表 2 水提工藝表頭安排及芍藥苷含量實(shí)驗(yàn)號(hào)列號(hào)因素表頭安排實(shí)驗(yàn)結(jié)果 芍藥苷含量 A B C D111111. 1568212221. 2532313331. 6184421231. 84515222. 286863121. 4850132. 889031. 84803212. 289811. 3431. 9641. 4971. 911均值

14、21. 8721. 7961. 7961. 876均值 32. 3421. 7982. 2651. 770極差 0. 9990. 1680. 7680. 141表 3 方差分析表 (=0. 05偏差平方和 自由度 F 比 F 臨界值 顯著性A 1. 500246. 87519. 000*B 0. 05621. 75019. 000C 0. 899228. 09419. 000*D 0. 03221. 00019. 000誤差 0. 032參考文獻(xiàn)1 鄭品清 . 中藥制劑學(xué) M.北京 :中國醫(yī)藥科技出版社 , 1998: 982 曹春林 . 中藥制劑學(xué) M.上海 :上?？萍汲霭嫔?, 1987:153 -157統(tǒng)計(jì)學(xué)符號(hào)