消化道平滑肌生理特性及藥物對(duì)平滑肌收縮的影響

1、消化道平滑肌生理特性及藥物對(duì)平滑肌收縮的影響 【目的和原理】觀察家兔離體胃腸平滑肌的電生理特性和一般特性;熟悉哺乳動(dòng)物離體器官灌 流的一種方法;觀察不同濃度乙酰膽堿對(duì)家兔離體腸平滑肌的作用及阿托品對(duì)乙酰 膽堿的拮抗作用;熟悉研究藥物量效關(guān)系的實(shí)驗(yàn)方法。消化道平滑肌具有自動(dòng)節(jié)律性,較大的伸展性,對(duì)化學(xué)物質(zhì)、溫度改變及牽張 刺激較為敏感等一般生理特性。電位變化方面,消化道平滑肌除了具有一般可興奮 組織的靜息電位和動(dòng)作電位,還有其特有的慢波電位。乙酰膽堿通過激動(dòng)腸管平滑 肌上的 M 型膽堿受體可引起腸管平滑肌收縮,在一定劑量范圍內(nèi),其收縮強(qiáng)度呈劑 量依賴性。阿托品作為 M 型膽堿受體阻斷劑,可競(jìng)爭(zhēng)性

2、地拮抗乙酰膽堿對(duì) M 受體的 激動(dòng)作用。【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】 家兔,體重 2.53.0Kg?！緦?shí)驗(yàn)器材和藥品】 超級(jí)恒溫器、恒溫浴管、BL-410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)、木槌、 萬(wàn)能支架臺(tái)、 雙凹夾 2個(gè)、 溫度計(jì)、 燒杯、 石蠟作底面的表面皿、 玻璃微電極、 Ag-AgCl 電極絲、張力換能器、注射器(1.0ml7支、注射針頭、手術(shù)器械、蛙心夾、彈簧夾、 兔手術(shù)臺(tái)。臺(tái)氏液、1:10,000腎上腺素、1N NaOH、1N HCl、不同濃度(3X10-1、 3X10-3、3X10-5、3X10-7、3X10-9、3X10-11mol/L氯化乙酰膽堿。【實(shí)驗(yàn)步驟和觀察項(xiàng)目】1.標(biāo)本制作及實(shí)驗(yàn)裝置準(zhǔn)備(1 首先裝

3、好超級(jí)恒溫器和恒溫浴管, 恒溫浴管是循環(huán)供液式, 恒溫工作點(diǎn)定 在室溫 20o C。調(diào)節(jié)出氣管,使氣泡一個(gè)一個(gè)、不斷地逸出。(2用木槌猛擊家兔頭枕部致昏,迅速剖開腹腔,找出胃與十二指腸交界處, 用線結(jié)扎,將與十二指腸相連的腸系膜沿腸緣剪開,在結(jié)扎線近胃?jìng)?cè)剪斷小腸,立 即取出長(zhǎng)約 2030cm的腸管。把離體腸管置于 4o C的臺(tái)氏液中輕輕漂洗將腸內(nèi)容物 沖洗干凈,并將腸管剪成 23cm數(shù)段,再換臺(tái)氏液備用。(3連接標(biāo)本及記錄:輕取一段離體腸管標(biāo)本,一端連于 L 型管的小鉤上,另 一端用蛙心夾與張力換能器相連。掛好腸管后穩(wěn)定約 10min 開機(jī)進(jìn)入程序,可以描 1記一段離體腸平滑肌正常收縮曲線。2

4、.電生理特性觀察:(1灌制微電極:配置 2N KCl溶液做為電極液,拉制玻璃微電極,充入電極 液,使微電極尖端無氣泡,電極電阻 1030M。(2輕取一段離體腸管標(biāo)本,放于盛有臺(tái)氏液的表面皿中,剪開腸管,用小鋼 針將標(biāo)本固定在石蠟底面上,不要過分牽拉。表面皿中臺(tái)氏液略高于標(biāo)本表面約 1mm。(3 將微電極安裝到微電極操縱器上, 并將一根 Ag-AgCl 電極絲插入玻璃微電 極內(nèi),電極絲另一端連于微電極放大器“+”極輸入端。微電極放大器的“-”極輸 入端接參考電極,與表面皿中臺(tái)氏液接通。(4 開機(jī)進(jìn)入程序, 降下微電極, 使其尖端刺入平滑肌細(xì)胞內(nèi), 觀察電位變化。 3.一般特性觀察:(1記錄腸管在

5、室溫臺(tái)氏液里的活動(dòng)。(2將臺(tái)氏液溫度逐漸升高至 38o C,記錄腸管運(yùn)動(dòng)的變化。(3待臺(tái)氏液溫度穩(wěn)定于 38o C后, 加腎上腺素 (1:10, 000 1-2滴于浴管中, 觀察腸管運(yùn)動(dòng)的變化。在觀察到有明顯效應(yīng)后,立刻用 38o C臺(tái)氏液沖洗 3次,使腸 管活動(dòng)恢復(fù)正常。(4同法,分別加入 1N NaOH溶液 1-2滴;1N HCl溶液 1-2滴,觀察對(duì)腸管 運(yùn)動(dòng)的影響。(5用含Ca 2+臺(tái)氏液沖洗 3次,換入無Ca 2+臺(tái)氏液,觀察腸管運(yùn)動(dòng)變化。(6將結(jié)果填入下表。家兔離體小腸平滑肌一般生理特性觀察項(xiàng)目 緊張性 收縮頻率 收縮幅度室溫臺(tái)氏液38o C臺(tái)氏液1:10,000腎上腺2素1N N

6、aOH1N HCl38o C無Ca 2+臺(tái)氏液注:表中虛線上方各項(xiàng)內(nèi)容均為在含Ca 2+臺(tái)氏液的條件下進(jìn)行4.乙酰膽堿量效關(guān)系曲線的描繪及阿托品對(duì)乙酰膽堿競(jìng)爭(zhēng)性拮抗作用的觀察 (1準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)裝置:此裝置由恒溫、供氣和排液以及記錄部分組成。恒溫部分 控制水浴溫度38±1。供氣部分由L型通氣管和氣源組成,氣流量以12個(gè)氣泡/秒為宜.供液及排液部分主要是水浴管,其下端連有膠管及膠管夾以供排液使用, 其上口端可隨時(shí)充人新的恒溫營(yíng)養(yǎng)液。(2連接標(biāo)本1在1通道的輸入接口上安裝好張力傳感器。2輕取一段離體腸管標(biāo)本,一端連于通氣管L型的小鉤上,另一端連于張力換 能器上的L型的小鉤上,然后將標(biāo)本懸浮在盛

7、有30ml臺(tái)氏液的浴管中。(3設(shè)置計(jì)算機(jī):1打開計(jì)算機(jī),選擇BL-410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)。2選擇“輸入信號(hào)”菜單中的“1通道”子菜單。3在“1通道”子菜單中選擇“張力”信號(hào)。4設(shè)置增益(一般為50、濾波(一般為30Hz、T(一般為DC、速度(一 般為6。(4記錄給藥沖洗:開始記錄正常平滑肌收縮曲線。1使用鼠標(biāo)單擊工具條上的“開始”命令按鈕。2 記錄正常平滑肌收縮曲線后, 從低濃度開始, 依次向浴管內(nèi)加入各濃度的乙 酰膽堿,同時(shí)選擇“通用標(biāo)記”命令,記錄給藥后的平滑肌收縮曲線,每次加入乙 酰膽堿,待離體腸平滑肌收縮幅度達(dá)到最大后,用臺(tái)氏液沖洗三次,使腸管恢復(fù)到 給藥前狀態(tài),然后再加入下一個(gè)濃度的

8、乙酰膽堿,每次沖洗時(shí)一定選擇“暫?！泵?3令按鈕,以減少對(duì)張力傳感器的刺激。3 給予各濃度乙酰膽堿后, 腸管經(jīng)沖洗恢復(fù)正常, 再用含有阿托品的臺(tái)氏液沖 洗,然后以含有阿托品的臺(tái)氏液作為營(yíng)養(yǎng)液重復(fù)步驟(2。4記錄結(jié)束后,選擇“停止”命令按鈕,起文件名保存實(shí)驗(yàn)結(jié)果。(5求出Di和Ei:計(jì)算Di均以×10-6mol/L為單位, 效應(yīng)E以克為單位。(計(jì)算機(jī) 內(nèi)部計(jì)算時(shí),會(huì)自動(dòng)將Di轉(zhuǎn)化為mol/L進(jìn)行計(jì)算。(6數(shù)據(jù)處理:選擇“數(shù)據(jù)處理”菜單中的“計(jì)算PA 2、PD 2”子菜單:1選擇“計(jì)算PD 2”計(jì)算類型后,分別輸入已計(jì)算好的無DH數(shù)據(jù)中相應(yīng)Di值和 Ei值,然后點(diǎn)擊“計(jì)算結(jié)果”;再點(diǎn)擊“

9、量效曲線”即得PD 2值和其相應(yīng)曲線。 2選擇“計(jì)算PA 2”計(jì)算類型后;分別輸入已計(jì)算好的無DH數(shù)據(jù)和加DH數(shù)據(jù)中 相應(yīng)的Di值和Ei值,然后點(diǎn)擊“計(jì)算結(jié)果”;再點(diǎn)擊“量效曲線”即得PA 2值和其相 應(yīng)曲線?！咀⒁馐马?xiàng)】1.在加藥前,必須先準(zhǔn)備好更換用的 38o C臺(tái)氏液。2.每次加藥出現(xiàn)效果后,必須立即更換浴管內(nèi)的臺(tái)氏液,待腸管恢復(fù)正?；?動(dòng)后再觀察下一項(xiàng)目。3.記錄電位時(shí),要保持安靜,避免振動(dòng)實(shí)驗(yàn)臺(tái),防止微電極移位或折斷;降 下微電極時(shí)要小心,當(dāng)微電極接近平滑肌時(shí),緩緩下移,刺入平滑肌。4.隨時(shí)檢查恒溫裝置,確保水浴管內(nèi)溫度控制在38±1。5.離體腸管時(shí),標(biāo)本及其張力傳感器的連線不要觸及浴管及通氣管管壁,而 且標(biāo)本與張力傳器的連線要垂直,不要過緊,也不要過松。6.給藥時(shí)要將藥液直接滴于液面上,不要滴在線及管壁上,而且每次加藥的 方式要保持一致。7.實(shí)驗(yàn)中盡量不要按“停止”命令按鈕,以免丟失實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。8.洗浴管時(shí)一定選擇“暫?！泵畎粹o,以減少對(duì)張力傳感器的影響