儀器分析復(fù)習(xí)重點(diǎn)南京工業(yè)大學(xué)生物與制藥工程學(xué)院

1、儀器分析重點(diǎn)提要GC 1、 GC儀和HPLC儀在結(jié)構(gòu)原理上有何異同？答：同：氣源 色譜柱檢測(cè)器記錄儀 進(jìn)樣 異：（1）氣源用氣泵或貯氣瓶供氣；（2）要讓被測(cè)樣品組分充分氣化，相關(guān)通路中應(yīng)具備高溫（100400）環(huán)境。2、 能夠在GC上檢測(cè)的化合物，應(yīng)具哪些主要的理化特性？答：具有易揮發(fā)性、高溫不分解、不能與載氣發(fā)生反應(yīng)。3、 GC常用載氣有哪些？答：N2、H2、Ne4、 固定相、吸附劑、擔(dān)體、固定液有何異同？常見(jiàn)的氣-固吸附色譜有哪些？常見(jiàn)的擔(dān)體、固定液有哪些？答：一、固定相主要分二大類： （1）固體固定相 （2）液體固定相 氣-固（吸附）色譜固定相 吸附劑分類：吸附劑 （1） 非極性吸附劑：

2、如活性炭 （2） 極性吸附劑：如硅膠、氧化鋁、分子篩等 氣-液色譜（分配色譜）固定相 （1） 固定液 （2） 惰性擔(dān)體 擔(dān)體 ：又稱為載體，是一種化學(xué)惰性的多孔固體顆粒，作用是提供惰性表面，支持固定液，使固定液以薄膜狀態(tài)分布在其表面。二、常見(jiàn)的氣-固吸附色譜 （1） 非極性吸附劑：如活性炭 （2） 極性吸附劑：如硅膠（較強(qiáng)極性）、活性氧化鋁（弱極性）、分子篩等 三 、常見(jiàn)的擔(dān)體有：（1）硅藻土型 （紅色硅藻土 白色硅藻土） （2）非硅藻土型 常見(jiàn)固定液第一類：非極性固定液 多數(shù)是飽和烷烴，如：異角鯊?fù)椤９潭ㄒ汉徒M分分子間的作用力是色散力，主要用于分離烴類和非極性化合物 第二類：弱極性固定液 主

3、要是含甲基的硅氧烷類。固定液和組分分子間的作用力為色散力。 第三類：中等極性固定液 種類多、應(yīng)用廣，如硅氧烷（OV17）等5、 GC檢測(cè)器可分為哪幾種類型（英文縮寫），其工作原理是什么？哪些屬于濃度型檢測(cè)器，哪些屬于質(zhì)量型檢測(cè)器？答：（1）熱導(dǎo)池檢測(cè)器（TCD） 檢測(cè)原理：基于不同的物質(zhì)有不同的導(dǎo)熱系數(shù) （2）（氫）火焰離子化檢測(cè)器（FID） 原理：根據(jù)氣體的導(dǎo)電率與該氣體中所含帶電離子的濃度呈正比這一事實(shí)而設(shè)計(jì)的。 一般情況下，組分蒸汽不導(dǎo)電，但在能源作用下，組分蒸汽可被電離生成帶電離子而導(dǎo)電。 （3）電子捕獲檢測(cè)器（ECD） 原理：第一步:形成約10-8A的基流 N2 + N2+ + e-

4、 第二步：電子捕獲 AB + e- AB- + E AB + e- A· + B- + E 第三步：生成中性化合物AB- + N2+ AB + N2A- 或 B- + N2+ 中性分子 由載氣帶出 （4）火焰光度檢測(cè)器（FPD） 原理：利用在一定外界條件下（即在富氫條件下燃燒）促使一些物質(zhì)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過(guò)波長(zhǎng)選擇、光信號(hào)接收，經(jīng)放大把物質(zhì)及其含量和特征的信號(hào)聯(lián)系起來(lái)。按輸出信號(hào)與組分含量關(guān)系：（1）濃度型檢測(cè)器(熱導(dǎo)池檢測(cè)器、電子捕獲檢測(cè)器) （2）質(zhì)量型檢測(cè)器(（氫）火焰離子化檢測(cè)器、火焰光度檢測(cè) 器)6、 各種檢測(cè)器一般用什么載氣？氫焰檢測(cè)器、火焰光度檢測(cè)器涉及到哪幾種氣體？答

5、： 熱導(dǎo)池檢測(cè)器（TCD：用N2作載氣，靈敏度較低，He、H2，靈敏度高 （氫）火焰離子化檢測(cè)器（FID）：選用N2作載氣 電子捕獲檢測(cè)器（ECD）：載氣一般為N2或Ar 火焰光度檢測(cè)器（FPD）：N2氫焰檢測(cè)器涉及：H2、O2、N2火焰光度檢測(cè)器涉及：H2、O2、N27、 各種檢測(cè)器在性能上各有什么特點(diǎn)？各有什么缺點(diǎn)？各有什么側(cè)重應(yīng)用？答： （1）熱導(dǎo)池檢測(cè)器（TCD）由于結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，性能穩(wěn)定，通用性好，而且線性范圍寬，價(jià)格便宜，因此是應(yīng)用最廣，最成熟的一種檢測(cè)器。其主要缺點(diǎn)是靈敏度較低。 （2）（氫）火焰離子化檢測(cè)器（FID）特點(diǎn)：靈敏度很高，比熱導(dǎo)檢測(cè)器的靈敏度高約103倍；能檢測(cè)大多數(shù)含

6、碳有機(jī)化合物；死體積小，響應(yīng)速度快，線性范圍也寬；結(jié)構(gòu)不復(fù)雜，操作簡(jiǎn)單，是目前應(yīng)用最廣泛的色譜檢測(cè)器之一缺點(diǎn)：不能檢測(cè)永久性氣體；燃燒會(huì)破壞離子原形，無(wú)法回收 （3）電子捕獲檢測(cè)器（ECD） 特點(diǎn)： g 電子俘獲檢測(cè)器是選擇性很強(qiáng)的、濃度型檢測(cè)器 g 具有靈敏度高、選擇性好 g 對(duì)電負(fù)性物質(zhì)特別敏感 g 分析痕量電負(fù)性有機(jī)物最有效的檢測(cè)器 g 廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥殘留量、大氣及水質(zhì)污染分析，以及生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥物學(xué)和環(huán)境監(jiān)測(cè) 缺點(diǎn)：是線性范圍窄，只有103左右，且響應(yīng)易受操作條件的影響，重現(xiàn)性較差 （4）火焰光度檢測(cè)器（FPD） 它是一種對(duì)含磷、硫有機(jī)化合物具有高選擇性和高靈敏度的質(zhì)量型檢測(cè)器，檢

7、出限可達(dá)10-12g（對(duì)P）或10-11g·（對(duì)S）用于大氣中痕量硫化物以及農(nóng)副產(chǎn)品，水中的毫微克級(jí)有機(jī)磷和有機(jī)硫農(nóng)藥殘留量的測(cè)定。8、 GC試驗(yàn)條件涉及哪些因素？答：一、分離效果指標(biāo)1、 柱效能2、 選擇性 3、總分離效能指標(biāo)分離度（又稱為分辨率）4、基本分離方程（n、k、R 之間的關(guān)系） 二、色譜分離操作條件的選擇 1、載氣及流速 2、固定液的配比（又稱為液擔(dān)比）： 影響CLu3、柱溫的選擇 4、氣化溫度的選擇 5、色譜柱長(zhǎng)和內(nèi)徑的選擇 6、進(jìn)樣時(shí)間和進(jìn)樣量的選擇7、檢測(cè)室溫度8、樣品的預(yù)處理：分解法和衍生法9、 載氣的流速一般為多少？柱溫的選擇原則？答：一、流速大?。喝粜栌昧魉?/p>

8、大的載氣可用分子量小，擴(kuò)散系數(shù)大的 H2或He，減小氣相傳質(zhì)阻力；若需載氣流速小的載氣，則可用分子量大，擴(kuò)散系數(shù)小的N2或Ar為載氣，減小分子擴(kuò)散的影響 對(duì)于填充柱，N2的最佳實(shí)用線速為1020cm/s， H2的最佳實(shí)用線速為1520cm/s 二、柱溫的選擇 1. 在能保證R的前提下盡量使用接近或略低于組分的平均沸點(diǎn)的溫度。2. 絕不能高于固定液使用溫度。3. 寬沸程樣品應(yīng)采用程序升溫10、 固定液的選擇及用量，組分的流出先后（要會(huì)舉一反三）。答：固定液用量及其配比的選擇：固定液用量太少，易存在活性中心，致使峰形拖尾；且會(huì)引起柱容量下降，進(jìn)樣量減少常采用固定液和載體總重量之比來(lái)表示，簡(jiǎn)稱液載比

9、，在填充柱色譜中，液擔(dān)比一般為 525。 固定液選擇及其組分流出先后關(guān)系：（i）分離非極性物質(zhì)：一般選用非極性固定液 F 組分和固定液分子間的作用力主要是色散力 F 試樣中各組分按沸點(diǎn)由低到高的順序出峰 F 常用的有：角鯊?fù)椋ó惾椋?、十六烷、硅油?（ii）分離中等極性物質(zhì)：一般選用中等極性固定液F 組分和固定液分子間作用力主要是色散力和誘導(dǎo)力。 F 試樣中各組分按沸點(diǎn)由低到高的順序出峰 （iii）分離極性物質(zhì)：選用極性固定液 F 組分和固定液分子間的作用力主要是定向力 F 待測(cè)試樣中各組分按極性由小到大的順序出峰 例：用極性固定液聚乙二醇(PEG)-600，分析乙醛、丙烯醛氣體混合物的情

10、形就是這樣，乙醛的極性比丙烯醛小，故先出峰11、 如何應(yīng)用GC法進(jìn)行化合物的定性鑒別和定量測(cè)定？答：詳見(jiàn)Word版資料（第四章中定性鑒別與定量測(cè)定）12、 掌握內(nèi)標(biāo)法計(jì)算方法。2、 答：內(nèi)標(biāo)法：選擇適宜的物質(zhì)作為待測(cè)組分的參比物，定量加到樣品中去，根據(jù)待測(cè)組分和參比物在檢測(cè)器上的響應(yīng)值之比和參比物加入量進(jìn)行定量分析的方法。關(guān)鍵：選擇合適的內(nèi)標(biāo)物內(nèi)標(biāo)物的選擇原則：A、內(nèi)標(biāo)物必須是原樣品中不存在的物質(zhì)，其性質(zhì)盡量與待測(cè)組分相近(同系物、異構(gòu)體) B、內(nèi)標(biāo)物不能和被測(cè)組分起化學(xué)反應(yīng)，要能完全溶于被測(cè)樣品中；C、內(nèi)標(biāo)物的峰盡可能接近待測(cè)組分的峰，或位于幾個(gè)待測(cè)組分的中間，但必須和樣品中的所有峰完全分離

11、；D、內(nèi)標(biāo)物的加入量應(yīng)和待測(cè)組分相近。 待測(cè)組分(i)的量mi為：設(shè)樣品的總量為m，則待測(cè)組分i的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為內(nèi)標(biāo)法的特點(diǎn)： 無(wú)歸一化法的限制，即只要被測(cè)組分能出峰，不和其他峰重疊，不管其他組分是否出峰或是否重疊，都可以用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析 定量準(zhǔn)確，受操作條件影響較小 可部分補(bǔ)償待測(cè)組分在樣品前處理時(shí)的損失 若加入幾種內(nèi)標(biāo)物，還可提高定量分析的精度 內(nèi)標(biāo)物的選擇比較困難，同時(shí)內(nèi)標(biāo)物稱量要求準(zhǔn)確，操作麻煩·內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法從內(nèi)標(biāo)公式可知 如果每次稱取同樣量(m)的試樣，每次加入相等量(ms)的內(nèi)標(biāo)物，則上式中m，ms，fi均為常數(shù)，計(jì)算公式可寫為：例:取二甲苯生產(chǎn)母液1500mg，母液中

12、合有乙苯、對(duì)二甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯及溶劑和少量苯甲酸，其中苯甲酸不能出峰。以150mg壬烷作內(nèi)標(biāo)物，測(cè)得有關(guān)數(shù)據(jù)如下：物質(zhì) 壬烷 乙苯 對(duì)二甲苯 間二甲苯 鄰二甲苯Ai/cm2 98 70 95 120 80 fm 1.02 0.97 1.00 0.96 0.98求:各組分的含量。解：母液中苯甲酸不能出峰，所以只能用內(nèi)標(biāo)法計(jì)算。由各組分的絕對(duì)校正因子計(jì)算得壬烷、乙苯、對(duì)二甲苯、間二甲苯、鄰二甲苯的相對(duì)校正因子分別為1.00，0.95，0.98，0.94，0.96。根據(jù)內(nèi)標(biāo)法計(jì)算公式，對(duì)于乙苯有：同樣可以計(jì)算出對(duì)二甲苯、間二甲苯、鄰二甲苯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為9.5%，11.5%，7.84%。HP

13、LC1、 按功能結(jié)構(gòu)高效液相色譜儀可分為那幾個(gè)大部分？答：分為五個(gè)部分：梯度淋洗系統(tǒng)、高壓輸液泵與流量控制系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離住與檢測(cè)系統(tǒng)。2、 根據(jù)分離原理，高效液相色譜儀的檢測(cè)器分為哪幾大類？哪些是通用檢測(cè)器，哪些是選擇性檢測(cè)器？哪些是濃度型檢測(cè)器，哪些是質(zhì)量型檢測(cè)器？答：紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、示差檢測(cè)器（選擇性檢測(cè)器、濃度型檢測(cè)器） 示差檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）（通用型檢測(cè)器。質(zhì)量型檢測(cè)器）3、 各種檢測(cè)器的檢測(cè)原理？流速對(duì)各種檢測(cè)器的檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)度和峰面積有何影響？答：（1）紫外檢測(cè)器（選擇性檢測(cè)器）原理：基于被分析組分對(duì)特定波長(zhǎng)紫外光或可見(jiàn)光的選擇性吸收。吸光

14、度與試樣組分濃度之間的定量關(guān)系符合朗伯-比爾定量。（2）熒光檢測(cè)器（選擇性檢測(cè)器）原理：化合物受到紫外光的照射后，吸收輻射能，發(fā)出比吸收波長(zhǎng)長(zhǎng)的特征輻射，這種特征輻射光線就是熒光,測(cè)定發(fā)出的熒光能量即可定量（3）電導(dǎo)檢測(cè)器（選擇性檢測(cè)器）原理：根據(jù)某些物質(zhì)在溶液中可分生電離從而引起溶液電導(dǎo)率的變化的特性進(jìn)行檢測(cè)。（4）示差檢測(cè)器（通用型檢測(cè)器）原理：示差折光檢測(cè)器是通過(guò)連續(xù)監(jiān)測(cè)參比池和測(cè)量池中溶液的折光指數(shù)之差來(lái)測(cè)定樣品濃度濃度型響應(yīng)信號(hào)與流速無(wú)關(guān)，峰面積與流速有關(guān)（流速越快，峰寬越小，峰面積越?。╉憫?yīng)信號(hào)與流動(dòng)相中組分的濃度有關(guān)的檢測(cè)器稱為濃度型檢測(cè)器。響應(yīng)信號(hào)與耽誤時(shí)間內(nèi)進(jìn)入檢測(cè)器中組分的

15、量的多少有關(guān)的檢測(cè)器稱為質(zhì)量型檢測(cè)器。質(zhì)量型檢測(cè)器的響應(yīng)值與流量成正比、峰面積與流速無(wú)關(guān)。輸出信號(hào)：HPLC圖，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，以信號(hào)強(qiáng)度mv為縱坐標(biāo)。4、 檢測(cè)器的性能指標(biāo)有哪些？理解各種指標(biāo)的含義，比較檢出限D(zhuǎn)、最小檢測(cè)量Q0異同？答：衡量檢測(cè)器性能的主要指標(biāo): 靈敏度、檢測(cè)限和檢測(cè)器的線性范圍（1）靈敏度：?jiǎn)挝粷舛然蛸|(zhì)量的組分通過(guò)檢測(cè)器時(shí)所產(chǎn)生的響應(yīng)信號(hào)R的大小叫靈敏度。（2）檢測(cè)限D(zhuǎn)定義： 某組分的峰高(mV)恰為噪音的2倍（或3倍）時(shí)，單位體積(或時(shí)間)引入檢測(cè)器的試樣量。（3）最低檢出量最小檢測(cè)量Q0表示檢測(cè)器能產(chǎn)生和噪音相鑒別的信號(hào)時(shí)，進(jìn)入色譜柱的最小物質(zhì)量（或濃度）對(duì)于質(zhì)量型檢

16、測(cè)器：對(duì)于濃度型檢測(cè)器：5、 什么叫吸附平衡常數(shù)，吸附平衡常數(shù)與組分流出先后的關(guān)系？理論上組分從色譜柱中流出曲線呈什么形狀？答：吸附平衡常數(shù)：一定溫度下，各組分在兩相間的 K 不同 ，在色譜柱中的移動(dòng)速度不同，使得原來(lái)K 僅有微小差異的各組分在經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的分配后，產(chǎn)生很大的分離效果 K小的組分，較早流出色譜柱 K大的組分，較晚流出色譜柱 理論上組分從色譜柱中流出曲線呈正態(tài)分布。6、 根據(jù)分離原理，色譜可分為那幾大類？理解其分離原理。答：1、吸附色譜法（ adsorption chromatography ） 根據(jù)吸附劑表面對(duì)不同組分物理吸附能力的強(qiáng)弱差異進(jìn)行分離的方法。 2、分配色譜法 （p

17、artition chromatography ） 根據(jù)不同組分在固定相中的溶解能力和在兩相間分配系數(shù)的差異進(jìn)行分離的方法。 3、離子交換色譜法（ion exchange chromatography ） 根據(jù)不同組分離子對(duì)固定相親和力的差異進(jìn)行分離的方法。 4、排阻色譜法（ size exclusion chromatography） 又稱凝膠色譜法 （gel chromatography ） 根據(jù)不同組分的分子體積大小的差異進(jìn)行分離的方法。其中：以水溶液作流動(dòng)相的稱為凝膠過(guò)濾色譜法 ；以有機(jī)溶劑作流動(dòng)相的稱為凝膠滲透色譜法 5、親和色譜法 (affinity chromatography)

18、 利用不同組分與固定相共價(jià)鍵合的高專屬反應(yīng)進(jìn)行分離的方法 7、 什么叫固定相，什么叫流動(dòng)相，什么叫正相色譜，什么叫反相色譜？答：試樣混合物在色譜儀中的分離是在色譜柱中的兩相之間進(jìn)行的，分離過(guò)程也就是隨著試樣中各組分在色譜分離柱中的運(yùn)動(dòng)，組分在兩相間不斷重復(fù)進(jìn)行著分配過(guò)程，其中的一相固定不變，稱為固定相（可以是無(wú)機(jī)固體吸附劑或有機(jī)化合物液膜），另一相是攜帶混合物流過(guò)此固定相的流體（可以是氣體、液體、超臨界流體），稱為流動(dòng)相。（1） 正相色譜固定液極性 > 流動(dòng)相極性 極性小的組分先出柱，極性大的組分后出柱,適于分離極性組分（2） 反相色譜固定液極性 < 流動(dòng)相極性 極性大的組分先出柱

19、，極性小的組分后出柱,適于分離非極性組分8、 常見(jiàn)的所謂C18柱是什么意思？以C18柱的HPLC屬于正相色譜還是反相色譜？是吸附色譜還是分配色譜？固定液是什么？固定液的支持載體是什么？固定液與支持載體是怎么連接的？答：C18柱，即十八烷基鍵合硅膠柱又稱ODS柱，是最常見(jiàn)的反相柱。 以C18柱的HPLC屬于反相色譜，是分配色譜。 固定液是十八烷基化合物，支持載體是硅膠。 將十八烷基通過(guò)化學(xué)反應(yīng)鍵合到硅膠表面的硅羥基上。9、 離子交換色譜中，固定相上的離子交換功能基團(tuán)有哪些？了解交換能力的大小。答： 陽(yáng)離子交換樹(shù)脂 (1) 強(qiáng)酸性 (2) 弱酸性 陰離子交換樹(shù)脂 (1) 強(qiáng)堿性 (2) 弱堿性 1

20、0、準(zhǔn)確理解基本術(shù)語(yǔ)，基線、噪音、保留值、保留體積、相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)保留體積、死時(shí)間、死體積、峰高、峰寬、半峰寬、分離度、拖尾因子、理論板數(shù)、峰面積。答：詳見(jiàn)書本P6811、 為什么半峰寬不等于峰寬/2，分離度，理論板數(shù)的計(jì)算。答：半(高)峰寬：峰高一半處的色譜峰寬度，分離度：相臨兩組分間峰頂間距離是峰底寬平均值的幾倍（衡量色譜分離條件優(yōu)劣的參數(shù)）12、 按極性大小順序，寫出45種常見(jiàn)的HPLC流動(dòng)相用溶劑？答： 常用溶劑的極性順序?yàn)椋?水（極性最大）、甲酰胺、乙睛、甲醇、丙醇、丙酮、四氫呋喃、醋酸乙酯、乙醚、二氯甲烷、氯仿、環(huán)己烷、己烷、 13、當(dāng)流動(dòng)相中含有水時(shí)，其比例不得大于多少？答：

21、HPLC中，流動(dòng)相中含水比例不得大于95%，即有機(jī)溶劑的比例不得低于5%.14、 用C18柱的HPLC中，甲醇：水（2:8）、甲醇：水（4:6）、甲醇：水（6:4）三種流動(dòng)相，哪種洗脫能力強(qiáng)，哪種洗脫能力弱？在同一C18色譜柱上，對(duì)于同一的組分來(lái)說(shuō)，用哪種流動(dòng)相時(shí)組分的保留時(shí)間短，哪種流動(dòng)相時(shí)組分的保留時(shí)間長(zhǎng)？答：C18柱，反相色譜柱中，流動(dòng)相的極性越小，組分流出速度越快，反之越慢。甲醇：水（6:4）（組分保留時(shí)間短）的洗脫能力強(qiáng)；甲醇：水（2:8）組分保留時(shí)間長(zhǎng)）的洗脫能力弱15、在同一C18色譜柱上使用同一流動(dòng)相，下列幾種化合物，哪個(gè)保留時(shí)間長(zhǎng)、哪個(gè)保留時(shí)間短？哪個(gè)先出峰、哪個(gè)后峰？ 苯甲

22、酸、苯甲醇、對(duì)羥基苯甲酸、對(duì)羥基苯甲醇、甲苯、對(duì)羥基甲苯。答：在反相色譜中，極性大的組分先流出，極性小的組分后流出；極性大?。簩?duì)羥基苯甲酸>對(duì)羥基苯甲醇>對(duì)羥基甲苯>苯甲酸>苯甲酸>苯甲醇>甲苯保留時(shí)間逐漸增加，對(duì)羥基苯甲酸保留時(shí)間最短，先出峰。16、 用硅膠柱的HPLC中，二氯甲烷：甲醇（2:8）、二氯甲烷：甲醇（4:6）、二氯甲烷：甲醇（6:4）三種流動(dòng)相，哪種洗脫能力強(qiáng)、哪種洗脫能力弱？在同一硅膠柱上，對(duì)于同一組分來(lái)說(shuō)，用哪種流動(dòng)相時(shí)組分的保留時(shí)間短，用哪種流動(dòng)相時(shí)組分的保留時(shí)間長(zhǎng)？答：硅膠色譜柱 正相色譜柱中流動(dòng)相的極性越大，組分流出速度越快，反之，

23、越慢。 二氯甲烷：甲醇（2:8）極性大（保留時(shí)間短），洗脫能力強(qiáng)；二氯甲烷：甲醇（6:4）極性小（保留時(shí)間長(zhǎng)），洗脫能力弱；17在同一硅膠柱色譜上使用同一流動(dòng)相，下列幾種成分化合物，哪個(gè)保留時(shí)間長(zhǎng)、哪個(gè)保留時(shí)間短？哪個(gè)先出峰，哪個(gè)后出峰？ 苯甲酸、苯甲醇、對(duì)羥基苯甲酸、對(duì)羥基苯甲醇、甲苯、對(duì)羥基甲苯。答：正相色譜中，極性小的組分先流出、極性大的組分后流出。 甲苯先流出、保留時(shí)間短；對(duì)羥基苯甲醇后流出，保留時(shí)間長(zhǎng)；18、 如何應(yīng)用HPLC法進(jìn)行藥物成分的定性鑒別和定量測(cè)定？答：一、定性鑒別HPLC中用保留值定性的方法保留值定性的主要方法： 直接與已知標(biāo)準(zhǔn)物對(duì)照 某一未知峰和已知標(biāo)準(zhǔn)物的保留值完全

24、相 同-可能是 改變色譜柱或流動(dòng)相，保留時(shí)間仍完全相同-基本是利用文獻(xiàn)的數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比和定性分析 注意HPLC的柱填充技術(shù)的復(fù)雜性，定性受到限制最簡(jiǎn)單的方法：標(biāo)準(zhǔn)添加法 前提：要有標(biāo)準(zhǔn)物 判斷的標(biāo)準(zhǔn)：加入標(biāo)準(zhǔn)樣后，使未知樣色譜峰增高，改變色譜條件，未知峰仍能增高2、 定量分析方法：內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法、標(biāo)準(zhǔn)加入法（詳見(jiàn)Word版資料P5）19、常見(jiàn)HPLC柱的規(guī)格尺寸，流動(dòng)相的常見(jiàn)流速？答：內(nèi)徑26mm,常見(jiàn)的有：4、6mm ； 長(zhǎng)1550cm ，常見(jiàn)的有15、20、25cm 常見(jiàn)的流速：60ml/minUV可見(jiàn)吸收光譜法1、 光譜的分區(qū)，紫外、可見(jiàn)、紅外光的波長(zhǎng)范圍？答：通常所說(shuō)的紫外可見(jiàn)吸收光譜是

25、指（近紫外、可見(jiàn)光區(qū)分子吸收光譜）。紫外可見(jiàn)光區(qū)（P250）：遠(yuǎn)紫外區(qū)；近紫外區(qū)；可見(jiàn)光區(qū)；紅外光：0.752.5m 近紅外 ；2.550m 中紅外 ；501000m 遠(yuǎn)紅外；2、 分子內(nèi)部的運(yùn)動(dòng)形式有哪些？各種運(yùn)動(dòng)形式能級(jí)及其能級(jí)的大小順序？答：分子的內(nèi)部運(yùn)動(dòng)可分為：分子內(nèi)價(jià)電子（外層電子）運(yùn)動(dòng)、分子內(nèi)原子的振動(dòng)、分子饒其重心的轉(zhuǎn)動(dòng)，分別對(duì)應(yīng)能級(jí)：電子能級(jí)、分子振動(dòng)能級(jí)、分子轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)。分子轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí) 分子振動(dòng)能級(jí) 電子能級(jí)3、 可見(jiàn)-紫外吸收光譜帶較寬的原因？答：=c/頻率越大，波長(zhǎng)越短，能量越強(qiáng)；頻率越小，波長(zhǎng)越長(zhǎng)，能量越弱；電磁波的能量與頻率成正比、與波長(zhǎng)成反比。分子的“電子光譜” 是由許

26、多線光譜聚集在一起的帶光譜組成的譜帶，稱為“帶狀光譜”。紫外光譜曲線上的吸收峰都是寬峰，這是由于電子躍遷與振轉(zhuǎn)次能級(jí)的變化相互疊加所致。4、 電子能級(jí)躍遷可同時(shí)伴有哪些能級(jí)的躍遷，基團(tuán)振動(dòng)能級(jí)的躍遷可同時(shí)伴有哪些的躍遷？答：電子能級(jí)躍遷可同時(shí)伴有振動(dòng)能級(jí)、轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí) 基團(tuán)振動(dòng)能級(jí)的躍遷可同時(shí)伴有轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)5、 分子軌道的能量高低順序？答：成鍵軌道與反鍵軌道：<<n <*<* 低 高6、 各類分子軌道上的電子能級(jí)躍遷的難易？答：s s* > ns* ³ pp* > n p*7、 有機(jī)化合物的可見(jiàn)紫外吸收，主要依賴于哪些軌道上的電子的躍遷？答：有機(jī)化合物結(jié)

27、構(gòu)與紫外信息的關(guān)系（1）200-400nm 無(wú)吸收峰。飽和化合物，單烯。（2） 270-350 nm有吸收峰（=10-100）醛酮 n* 躍遷產(chǎn)生的R 帶。（3） 250-300 nm 有中等強(qiáng)度的吸收峰（=200-2000），芳環(huán)的特征 吸收（具有精細(xì)解構(gòu)的B帶）。（4） 200-250 nm有強(qiáng)吸收峰（³104），表明含有一個(gè)共軛體系（K）帶。 ¾b,a不飽和醛酮：K帶230 nm ，R 帶310-330 nm 260nm,300 nm,330 nm有強(qiáng)吸收峰，3,4,5個(gè)雙鍵的共軛體系。8、 紅外、可見(jiàn)-紫外光線照射物質(zhì)分子各可引起分子哪些能級(jí)躍遷？答：9、 什么叫生

28、色團(tuán)？什么叫助色團(tuán)？寫出常見(jiàn)多的生色團(tuán)、助色團(tuán)及它們的電子躍遷類型。答：（1）生色團(tuán)（發(fā)色團(tuán)）：具有 p 軌道的不飽和官能團(tuán)稱為發(fā)色團(tuán) 有機(jī)化合物：具有不飽和鍵和未成對(duì)電子的基團(tuán) 具n 電子和電子的基團(tuán) 產(chǎn)生n *躍遷和 *躍遷 躍遷E較低ü 例： CC；CO；CN；NN 注：當(dāng)出現(xiàn)幾個(gè)發(fā)色團(tuán)共軛，則幾個(gè)發(fā)色團(tuán)所產(chǎn)生的吸收帶將消失，代之出現(xiàn)新的共軛吸收帶，其波長(zhǎng)將比單個(gè)發(fā)色團(tuán)的吸收波長(zhǎng)長(zhǎng)，強(qiáng)度也增強(qiáng)（2）助色團(tuán)：本身無(wú)紫外吸收，但可以使生色團(tuán)吸收 峰加強(qiáng)同時(shí)使吸收峰長(zhǎng)移的基團(tuán) 有機(jī)物：連有雜原子的基團(tuán)例：OH，OR，NH2 ，NR2，X 當(dāng)這些基團(tuán)單獨(dú)存在時(shí)一般不吸收紫外-可見(jiàn)區(qū)的光

29、輻射。但當(dāng)它們與具有軌道的生色基團(tuán)相結(jié)合時(shí)，將使生色團(tuán)的吸收波長(zhǎng)長(zhǎng)移（紅移），且使吸收強(qiáng)度增強(qiáng)（助色團(tuán)至少要有一對(duì)與生色團(tuán) p 電子作用的孤對(duì)電子） 10、 什么叫紅移？什么叫紫移？答： 由于化合物結(jié)構(gòu)變化（共軛、引入助色團(tuán)取代基）或采用不同溶劑后 吸收峰位置向長(zhǎng)波方向的移動(dòng)，叫紅移（長(zhǎng)移） 吸收峰位置向短波方向移動(dòng)，叫藍(lán)移（紫移，短移）11、 什么叫K吸收帶？K吸收帶有什么特點(diǎn)？（P256）答：K帶： 由共軛雙鍵的 *躍遷產(chǎn)生ü (CHCH)n CHCCO max >200nm，max>104 共軛體系增長(zhǎng)，max紅移，max 溶劑極性， 對(duì)于(CHCH)n max不變

30、 對(duì)于CHCCO max紅移12、 什么叫R吸收帶？R吸收帶有什么特點(diǎn)？答：R帶： 由含雜原子的不飽和基團(tuán)的n *躍遷產(chǎn)生ü CO；CN；NN E小，max250 400nm，max<100 溶劑極性，max 藍(lán)移（短移）13、 什么叫E吸收帶？E吸收帶有什么特點(diǎn)？答：E帶： 由苯環(huán)環(huán)形共軛系統(tǒng)的 *躍遷產(chǎn)生ü 芳香族化合物的特征吸收帶 E1 180nm max>104 （常觀察不到） E2 200nm max=7000 強(qiáng)吸收 苯環(huán)有發(fā)色團(tuán)取代且與苯環(huán)共軛時(shí)，E2帶與K帶合并 一起紅移（長(zhǎng)移）14、 什么叫B吸收帶？B吸收帶由什么引起？有哪些特點(diǎn)？答：B帶：由

31、 *躍遷和苯環(huán)的振動(dòng)的重疊引起的產(chǎn)生ü 芳香族化合物的主要特征吸收帶 max =254nm，寬帶，具有精細(xì)結(jié)構(gòu)； max=200 極性溶劑中，或苯環(huán)連有取代基，其精細(xì)結(jié)構(gòu)消失15、 溶劑對(duì)紫外吸收光譜有哪些影響？甲醇、乙晴、乙酸、二氯甲烷、苯的最低使用波長(zhǎng)極限？答：溶劑效應(yīng)： Ø 對(duì)max影響： N -*躍遷：溶劑極性，max藍(lán)移 -*躍遷：溶劑極性 ，max紅移 溶劑極性， 溶劑的選擇極性；純度高；截止波長(zhǎng)< max苯環(huán)精細(xì)結(jié)構(gòu)消失甲醇205nm、乙晴190nm、乙酸 ？ 、二氯甲烷235nm、苯280nm16、 Beer-Lambert定律及其應(yīng)用？答：（1） L

32、ambert 定律 當(dāng)一束單色光通過(guò)濃度一定的溶液時(shí)，液層厚度愈大，光線強(qiáng)度減弱愈顯著。 （2） Beer 定律 當(dāng)一束單色光通過(guò)液層厚度一定的溶液時(shí)，溶液的濃度愈大，光線強(qiáng)度減弱愈顯著。 令：A = - log T，A定義為吸光度 A=-logT=ELC 應(yīng)用; 進(jìn)行光度分析時(shí)，試劑或溶劑有吸收，則可由所測(cè)的總吸光度 A 中扣除，即 以試劑或溶劑為空白的依據(jù)； 測(cè)定多組分混合物； 校正干擾。 17、 如何使用UV吸收光譜進(jìn)行化合物的定性鑒別？在定性鑒別試驗(yàn)中應(yīng)注意哪些問(wèn)題？答：定性鑒別的依據(jù)吸收光譜的特征：吸收光譜的形狀；吸收峰的數(shù)目；吸收峰的位置（波長(zhǎng)）；吸收峰的強(qiáng)度；相應(yīng)的吸光系數(shù)；(一

33、）比較吸收光譜法 根據(jù)化合物吸收光譜的形狀、吸收峰的數(shù)目、強(qiáng)度、位置進(jìn)行定性分析 待測(cè)樣品 相同條件 樣品譜 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 標(biāo)準(zhǔn)譜（二）計(jì)算lmax的經(jīng)驗(yàn)規(guī)律18、 給你兩個(gè)UV吸收光譜，讓你判斷這兩個(gè)吸收光譜是否可能來(lái)源于同一個(gè)物質(zhì)（要注意儀器讀數(shù)的正常誤差）？答：不能判斷，因?yàn)椴煌镔|(zhì)具有相似的譜圖，所以譜圖“完全一致”并不是確認(rèn)結(jié)構(gòu)的充分條件。 當(dāng)未知化合物與已知化合物的紫外光譜一致時(shí)，可以認(rèn)為兩者具有同樣的發(fā)色基團(tuán)，即具有同樣的骨架結(jié)構(gòu)。19、 如何利用吸收光譜進(jìn)行化合物的純度檢查？答：待測(cè)樣品中主成分在某波長(zhǎng)處無(wú)吸收，而雜質(zhì)有吸收，直接觀察樣品在該波長(zhǎng)處的吸收光譜即可。樣品中的主成分在某

34、波長(zhǎng)處與雜質(zhì)在該波長(zhǎng)處的吸收差異較大（待測(cè)主成分在某波長(zhǎng)處有吸收，雜質(zhì)無(wú)吸收；主成分有弱吸收，雜質(zhì)有強(qiáng)吸收）可通過(guò)測(cè)定其 進(jìn)行判斷，若max與標(biāo)準(zhǔn)小于1%可認(rèn)為一致。試樣主成分與雜質(zhì)在某波長(zhǎng)處均無(wú)吸收，則不能用該法進(jìn)行純度檢查（檢查雜質(zhì)最大吸收峰波長(zhǎng)處的吸收強(qiáng)度）。20、 為了減少儀器讀數(shù)的誤差，我們?cè)趹?yīng)用光譜法進(jìn)行試樣的含量測(cè)定時(shí)，應(yīng)控制試樣溶液的濃度在多少為宜？21、 百分吸收系數(shù)與摩爾吸收系數(shù)之間如何換算？答：（1）摩爾吸光系數(shù)： 含義：指濃度為 1mol/L 的溶液，在液層厚度為1cm時(shí)的吸光度。 104 ，為強(qiáng)吸收 102104，為中強(qiáng)吸收 102，為弱吸收 （2）比吸收系數(shù)或稱為百

35、分吸收系數(shù)， 含義：指濃度為1（w/v）的溶液，用厚度為1cm吸收池時(shí)的吸光度 例：氯霉素（Mr 323.15）的水溶液在278nm有最大吸收。假設(shè)用純品配制100ml含2.00mg的溶液，以1.00cm厚的吸收池在278nm處測(cè)得透光率為24.3。求吸光度A和吸光系數(shù)、 。解：A=-logT=-log0.243=0.614 光譜分析、 紅外光譜分析中常用的紅外線波長(zhǎng)范圍（、）。（P277）答：紅外光區(qū)的波長(zhǎng)范圍為0.751000m0.752.5m 近紅外 ；2.550m 中紅外 ；50100m 遠(yuǎn)紅外；、 波數(shù)與波長(zhǎng)的換算關(guān)系？答：、 紅外吸收光譜的產(chǎn)生條件是什么？答：紅外光譜產(chǎn)生條件： Ø 分子吸收紅外輻射的頻率恰等于分子振動(dòng)頻率整數(shù)倍。Ø 分子在振、轉(zhuǎn)過(guò)程中的凈偶極矩的變化不為0， 即分子產(chǎn)生紅外活性振動(dòng)，且輻射與分子振動(dòng)發(fā)生能量耦合。、 什么叫紅外活動(dòng)性振動(dòng)、什么叫非紅外活性振動(dòng)？答：紅外活性振動(dòng)：分子振動(dòng)產(chǎn)生偶極矩的變化，從而產(chǎn)生紅外吸收的性質(zhì) 紅外非活性振動(dòng)：分子振