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1、Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the ProgrammeValidation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Tablet of Content目錄1. 目的和范圍 . 42. 驗(yàn)證小組職責(zé) . 43. 驗(yàn)證小組簽名 . 54. 定義與縮寫(xiě) . 55. 參考文件 . 56. 概述 . 57. 確認(rèn)前準(zhǔn)備 . 78. 消毒劑消毒效力試驗(yàn) . 89. 消毒劑有效期確認(rèn)試驗(yàn) . 1310. 驗(yàn)證偏差和變更 . 1611. 附錄列表 . 171.1.1. 目的和范圍 目的確認(rèn)各潔凈級(jí)別的操作間及設(shè)備外表面按照規(guī)定的消毒
2、程序消毒能夠達(dá)到消毒、防止污染的目的,并在消毒劑有效期內(nèi)能確保其消毒效力能符合要求。1.2. 范圍本驗(yàn)證方案適用于本公司潔凈區(qū)的墻面、天花板、門(mén)窗、機(jī)器設(shè)備、儀器、操作臺(tái)、地漏、推車(chē)、桌椅等表面以及操作人員雙手(手套)的消毒等。2.2.1. 驗(yàn)證小組職責(zé) 驗(yàn)證小組組長(zhǎng)職責(zé)保證方案和記錄的起草。保證在執(zhí)行前完成對(duì)方案及記錄的審核和批準(zhǔn)。負(fù)責(zé)對(duì)驗(yàn)證小組成員進(jìn)行本方案的培訓(xùn)。保證完全按照方案實(shí)施。確保能及時(shí)發(fā)現(xiàn)偏差,并按照已經(jīng)達(dá)成一致偏差處理方法對(duì)其進(jìn)行記錄、糾正、調(diào)查和最終確認(rèn)。驗(yàn)證過(guò)程中,如有變更,參照變更控制執(zhí)行。確保報(bào)告的生成、審核和批準(zhǔn),以便對(duì)方案進(jìn)行最終批準(zhǔn)。2.2. QA職責(zé)執(zhí)行前完成
3、對(duì)方案及記錄的審核。負(fù)責(zé)驗(yàn)證過(guò)程的監(jiān)控和檢查,保證驗(yàn)證方案的實(shí)施,參與驗(yàn)證結(jié)果評(píng)價(jià)。參與驗(yàn)證偏差的調(diào)查、處理和評(píng)估。驗(yàn)證過(guò)程中,如有變更,參照變更控制執(zhí)行。2.3. 其它成員職責(zé)執(zhí)行前確認(rèn)方案已批準(zhǔn),并經(jīng)過(guò)培訓(xùn)。按驗(yàn)證方案實(shí)施驗(yàn)證,收集、整理驗(yàn)證數(shù)據(jù),完成驗(yàn)證記錄和報(bào)告。參與驗(yàn)證偏差的調(diào)查和處理,確認(rèn)并通過(guò)偏差修訂和解決方案。3. 驗(yàn)證小組簽名4. 5. 5.1. 5.2. 5.3. 5.4. 5.5. 5.6. 5.7. 5.8. 6. 6.1.定義與縮寫(xiě) 無(wú) 參考文件變更控制(SOP0501-01); 驗(yàn)證主計(jì)劃(SOP0702-01); 驗(yàn)證的組織和實(shí)施(SOP0701-01); 微生物
4、棉簽擦拭取樣方法驗(yàn)證報(bào)告VR8012-01 清潔劑和消毒劑管理(SOP2005-01); 菌液配制及計(jì)數(shù)(TM7006-01) 藥品生產(chǎn)驗(yàn)證指南2003版微生物檢測(cè)驗(yàn)證技術(shù)(中國(guó)醫(yī)藥科技出版社) 概述本公司的潔凈區(qū)分為A級(jí)、C級(jí)和D級(jí),擬定用于潔凈區(qū)表面消毒的有七種消毒劑:75%乙醇、0.1%新潔爾滅溶液、0.3%新潔爾滅溶液、0.1%醋酸洗必泰、0.5%醋酸洗必泰、40mg/L的二氧化氯、60mg/L的二氧化氯。本次驗(yàn)證方案將選用以上7種消毒劑分別進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。作用對(duì)象一樣的消毒劑每月輪換使用,避免表面微生物產(chǎn)生耐藥菌株。在利用消毒劑進(jìn)行表面擦拭消毒過(guò)程中消毒劑的作用時(shí)間應(yīng)不少于10分鐘,利
5、用消毒劑進(jìn)行浸泡消毒的不少于10分鐘。消毒劑的種類(lèi)、消毒對(duì)象、消毒方法和有效期6.2. 為了確認(rèn)消毒劑的消毒效力,通過(guò)實(shí)驗(yàn)室考察部分和現(xiàn)場(chǎng)考察部分分別進(jìn)行驗(yàn)證。其中,用定量懸浮試驗(yàn)法和表面實(shí)驗(yàn)法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室考察試驗(yàn)部分。潔凈區(qū)設(shè)施表面材質(zhì)有不銹鋼和玻璃兩種,故表面試驗(yàn)法選用不銹鋼載片和玻璃裁片模擬潔凈區(qū)設(shè)施表面進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。 兩種試驗(yàn)方法作用的消毒劑見(jiàn)表?,F(xiàn)場(chǎng)考察試驗(yàn)部分選擇固體車(chē)間(D級(jí))的制粒一、QC微生物檢測(cè)室(C級(jí))、QC微生物檢測(cè)室超凈工作臺(tái)(A級(jí))設(shè)備表面消毒前和消毒后分別進(jìn)行取樣,測(cè)定其微生物數(shù)量。7. 7.1.確認(rèn)前準(zhǔn)備確認(rèn)的相關(guān)SOP和在驗(yàn)證過(guò)程中用到的相關(guān)文件,將檢查結(jié)果記錄
6、在文件檢查內(nèi),見(jiàn)附錄1。7.2.驗(yàn)證小組的成員已進(jìn)行該驗(yàn)證方案及相關(guān)SOP的培訓(xùn),將檢查結(jié)果記錄在培訓(xùn)內(nèi),見(jiàn)附錄2。7.3. 7.3.1.驗(yàn)證用試劑與材料 菌種7.3.2. 培養(yǎng)基7.3.3. 消毒液擬定選用的中和劑7.3.4. 稀釋液0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液(NS)7.3.5. 器具及設(shè)備7.4. 8. 8.1. 8.1.1.驗(yàn)證用試劑與材料記錄見(jiàn)附錄3。 消毒劑消毒效力試驗(yàn) 中和劑鑒定試驗(yàn) 試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^(guò)該試驗(yàn),確認(rèn)所用的中和劑對(duì)對(duì)應(yīng)的消毒劑有良好的中和作用,對(duì)試驗(yàn)用菌劑及其恢復(fù)期培養(yǎng)示范有害或不良影響。8.1.2. 菌液的制備及計(jì)數(shù)8.1.2.1. 金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌
7、工作菌液的制備8.1.2.2.8.1.3.8.1.3.1.8.1.3.2.接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,3035培養(yǎng)1824小時(shí)。取上述培養(yǎng)物用0.9無(wú)菌氯化鈉溶液做10倍系列稀釋成5×1055×106CFU/ml的工作菌液(如肉湯培養(yǎng)物的濃度已為1×1085×108CFU/ml,可不再用0.9無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋?zhuān)?計(jì)數(shù)時(shí),將5×1055×106CFU/ml的工作菌液10倍系列稀釋成含50100CFU/ml菌液,并同時(shí)采用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基3035培養(yǎng)2天計(jì)數(shù)。計(jì)算該稀釋級(jí)的平均菌落數(shù),將
8、計(jì)數(shù)結(jié)果換算成每毫升濃菌液的菌落數(shù)。 白色念珠菌工作菌液的制備 接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,2328培養(yǎng)2448小時(shí)。取上述培養(yǎng)物用0.9無(wú)菌氯化鈉溶液做10倍系列稀釋成5×1055×106CFU/ml的工作菌液(如肉湯培養(yǎng)物的濃度已為5×1055×106CFU/ml,可不再用0.9無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋?zhuān)S?jì)數(shù)時(shí),將5×1055×106CFU/ml的工作菌液10倍系列稀釋成含50100CFU/ml菌液,并同時(shí)采用改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基2328培養(yǎng)3天計(jì)數(shù)。計(jì)算該稀釋級(jí)的平均菌落數(shù),將計(jì)數(shù)結(jié)果換算成每毫升濃菌液的菌落數(shù)。 鑒
9、定試驗(yàn)操作 配制75%乙醇、0.1%新潔爾滅溶液、0.3%新潔爾滅溶液、0.1%醋酸洗必泰、0.5%醋酸洗必泰、40mg/L的二氧化氯、60mg/L的二氧化氯,具體操作執(zhí)行清潔劑和消毒劑管理。將配置好的消毒劑置20±1恒溫水浴鍋中備用。 分組操作試驗(yàn)分組及稀釋操作方法簡(jiǎn)表具體操作 第1組目的:觀(guān)察消毒液對(duì)試驗(yàn)菌有無(wú)殺滅或抑制能力。 操作:取消毒劑4.5ml+工作菌液0.5ml,混勻作用10min后,取混合液B 0.5ml+稀釋液4.5ml,混勻作用10min,取混合液B和10-10.5ml注皿,平行制備2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,倒置3035培養(yǎng)
10、3天計(jì)數(shù);白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基,倒置2328培養(yǎng)5天計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)。 第2組目的:觀(guān)察殘留消毒劑被中和后受到消毒劑作用后的試驗(yàn)菌是否恢復(fù)生長(zhǎng)。 操作:取消毒劑4.5ml+工作菌液0.5ml,混勻作用10min后,取混合液A 0.5ml +中和劑4.5ml,混勻作用10min,用稀釋液稀釋成10-1。分別取未稀釋溶液即混合液B(混合液0.5mll+中和劑4.5ml的混合液)及10-1 0.5ml注皿,各平行制備2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,倒置于3035培養(yǎng)3天計(jì)數(shù);白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基,倒置于2328培養(yǎng)5天計(jì)數(shù)。 第3組目的:觀(guān)察中和劑是否有
11、抑菌性、毒性操作:取中和劑4.5ml+工作菌液0.5ml,混勻作用10min,取混合液0.5ml l+稀釋液4.5ml,混勻作用10min后,用稀釋液進(jìn)行10倍系列稀釋成10-2、10-3。取相應(yīng)稀釋級(jí)0.5ml注皿,各稀釋級(jí)平行制備2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,倒置3035培養(yǎng)3天計(jì)數(shù);白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基,倒置2328培養(yǎng)5天計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)。 第4組目的:觀(guān)察中和產(chǎn)物,或未被完全中和殘留消毒劑對(duì)試驗(yàn)菌的生長(zhǎng)繁殖是否有影響。 操作:取消毒劑和中和劑1:1的混合液4.5ml+工作菌液0.5ml,混勻作用10min,取混合液0.5ml l+稀釋液4.5ml
12、,混勻作用10min后,用稀釋液進(jìn)行10倍系列稀釋成10-2、10-3。取相應(yīng)稀釋級(jí)0.5ml注皿,各稀釋級(jí)平行制備2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,倒置3035培養(yǎng)3天計(jì)數(shù);白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基,倒置2328培養(yǎng)5天計(jì)。 第5組目的:作陽(yáng)性對(duì)照用操作:取稀釋液4.5ml+工作菌液0.5ml,混勻作用10min,取混合液0.5ml l+稀釋液4.5ml,混勻作用10min后,用稀釋液進(jìn)行10倍系列稀釋成10-2、10-3。取相應(yīng)稀釋級(jí)0.5ml注皿,各稀釋級(jí)平行制備2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,倒置3035培養(yǎng)3天計(jì)
13、數(shù);白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基,倒置2328培養(yǎng)5天計(jì)數(shù)。 第6組目的:作為陰性對(duì)照用操作:分別取稀釋液和中和劑各1.0ml注入無(wú)菌平皿中,各制備2皿。8.1.3.3. 結(jié)果判斷8.1.4.8.2.8.2.1.8.2.2.8.2.2.1.8.2.2.2.試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合下列全部條件,判斷所選中和劑合格。 第1組無(wú)菌生長(zhǎng),或僅有少數(shù)試驗(yàn)菌菌落生長(zhǎng)。 第2組菌落數(shù)比第1組菌落數(shù)多,但比第3、4、5組菌落數(shù)少,且符合下表要求 第3、4、5組有相似菌落數(shù)生長(zhǎng),其每組間菌落數(shù)誤差率不超過(guò)15%。計(jì)算公式如下: (3組間菌落平均數(shù)-各組菌落平均數(shù))的絕對(duì)值之和 誤差率×100 3×3
14、組間菌落平均數(shù) 第6組無(wú)菌生長(zhǎng)。否則,說(shuō)明試劑有污染,應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。中和劑鑒定試驗(yàn)記錄見(jiàn)附錄4。 定量懸浮試驗(yàn) 試驗(yàn)?zāi)康?由于0.3%的新潔爾滅溶液、0.1%新潔爾滅溶液、60mg/L二氧化氯溶液、0.1%醋酸洗必泰溶液、0.5%醋酸洗必泰溶液是通過(guò)浸泡或液封消毒,通過(guò)定量懸浮試驗(yàn),確定其消毒效力是否符合要求。 試驗(yàn)操作 配制0.3%的新潔爾滅溶液、0.1%新潔爾滅溶液、60mg/L二氧化氯溶液、0.1%醋酸洗必泰溶液、0.5%醋酸洗必泰溶液,操作執(zhí)行清潔劑和消毒劑管理。將配置好的消毒劑置20±1恒溫水浴鍋中備用。 由于0.3%的新潔爾滅溶液、0.1%新潔爾滅溶液中低效消毒劑,且不
15、能殺滅芽孢,故定量懸浮試驗(yàn)用菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌。 0.1%醋酸洗必泰、0.5%醋酸洗必泰溶液、60mg/L二氧化氯溶液為高效消毒劑,能殺滅芽孢,故定量懸浮試驗(yàn)用菌枯金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、枯草芽孢桿菌。8.2.2.3. 將菌液制備成1×1071×107CFU/ml的工作菌液,菌液的制備及計(jì)數(shù)同。8.2.2.4. 將試管按需要分組排列在試管架上,試驗(yàn)組分3組(8min、10min、12min各一組),并由左向右逐管標(biāo)明消毒劑、中和劑、10-1、10-2。對(duì)照組分1組,并由左向右逐管標(biāo)明稀釋液、中和劑、10-1、10-2、10-3、10-
16、4。8.2.2.5. 向個(gè)試管加入4.5ml相應(yīng)的試劑,標(biāo)明10-1、10-2、10-3、10-4。加入4.5ml的稀釋液。8.2.2.6. 吸取工作菌液0.5ml加入標(biāo)明消毒劑的試管中,對(duì)照組加入標(biāo)明稀釋液的試管中,迅速混勻,并開(kāi)始計(jì)時(shí)。8.2.2.7. 待菌液與消毒劑相互作用至8min、10min、12min,吸取菌液和消毒劑混合液0.5ml,加入標(biāo)明中和劑的試管中,迅速混勻。8.2.2.8. 中和作用10min后,吸取0.5ml加入標(biāo)明10-1的試管中,混勻后吸取0.5ml加入標(biāo)明10-2試管中(對(duì)照組以此類(lèi)推,對(duì)照組直至10-4)。8.2.2.9. 試驗(yàn)組分別取中和劑管、10-1、10
17、-2管溶液1ml按平皿法測(cè)定存活菌數(shù);對(duì)照組取10-3、10-41ml按平皿法測(cè)定存活菌數(shù)。每管平行制備2皿。8.2.2.10. 金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,倒置于3035培養(yǎng)2天計(jì)數(shù);白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基,倒置于2328培養(yǎng)3天計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)。8.2.3. 結(jié)果計(jì)算計(jì)算試驗(yàn)組和對(duì)照組的活菌濃度 (CFU/ml),并換算為對(duì)數(shù)值(N),并按下式計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值:殺滅對(duì)數(shù)值 (KL)對(duì)照組平均活菌濃度的對(duì)數(shù)值(NO)試驗(yàn)組活菌濃度對(duì)數(shù)值(NX)8.2.4. 可接受標(biāo)準(zhǔn)殺滅對(duì)數(shù)值 (KL)應(yīng)不低于35個(gè)對(duì)數(shù)單位。8.2.5.8.3.8.3.1. 定量懸浮試驗(yàn)記錄見(jiàn)
18、附錄5 表面試驗(yàn)法 試驗(yàn)?zāi)康?.3.2.8.3.3.8.3.4.8.3.4.1.8.3.4.2.由于75%乙醇、40mg/L二氧化氯溶液、0.1%新潔爾滅溶液是通過(guò)擦拭消毒,故選用不銹鋼載片和玻璃裁片進(jìn)行表面試驗(yàn)法,確定其消毒效力是否符合要求。 菌種選擇 由于75%乙醇、0.1%新潔爾滅溶液中低效消毒劑,且不能殺滅芽孢,故表面試驗(yàn)用菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌。 40mg/L二氧化氯溶液為高效消毒劑,能殺滅芽孢,故表面試驗(yàn)用菌枯金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、枯草芽孢桿菌。 工作菌液制備 工作菌液的制備方法、濃度及驗(yàn)證同步計(jì)數(shù)操作同。 試驗(yàn)操作 (1) 染菌不銹鋼載片制備
19、 將經(jīng)滅菌的載片平鋪于無(wú)菌平皿內(nèi),滴加金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌含菌量為1×1085×108CFU的菌液0.1ml,并均勻涂布于整個(gè)載體表面。滴染菌液后,載片置超凈工作臺(tái)晾干后備用。每種菌平行制備兩個(gè)染菌不銹鋼載片。 (2)染菌玻璃載片制備 因培養(yǎng)皿的材質(zhì)為玻璃,故用培養(yǎng)皿代替玻璃載片進(jìn)行染菌試驗(yàn)。進(jìn)行菌液滴染前,用記號(hào)筆在培養(yǎng)皿菌液滴染面的背面畫(huà)出染菌面積(50mm×50mm),標(biāo)注清晰。菌液滴染操作同染菌不銹鋼載片制備。 試驗(yàn)組: 將消毒劑擦拭在制備好的染菌載片上,消毒劑作用時(shí)間分別為8min、10min、12min,不銹鋼載片和玻璃載片每個(gè)作用
20、時(shí)間分別制備2個(gè)。作用結(jié)束后,用接觸碟取樣(接觸碟規(guī)格: 55mm,取樣面積為25m2)。取金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基接觸碟(編號(hào):BZW12085);取樣白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基接觸碟(編號(hào):BZW15129)。 接觸碟取樣方法:打開(kāi)接觸碟蓋,使無(wú)菌培養(yǎng)基表面與取樣面直接接觸,均勻按壓接觸碟底板,確保全部瓊脂表面與取樣面表面均勻接觸10秒左右,在蓋上跌蓋。8.3.4.3.8.3.4.4.8.3.4.5.8.3.5.8.4.8.4.1.8.4.2.8.4.3.8.4.4.8.4.5. 對(duì)照組 對(duì)照組的活菌濃度計(jì)數(shù)見(jiàn)。. 陰性對(duì)照: 用接觸碟在已滅菌的
21、載片上(未染菌片的載)按壓取樣,操作同上。每種載片及每種接觸碟平行制備兩份。 培養(yǎng) 將取樣金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌的接觸碟倒置于3035培養(yǎng)2天計(jì)數(shù);取樣白色念珠菌的接觸碟倒置于2328培養(yǎng)3天計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)。 結(jié)果計(jì)算 計(jì)算試驗(yàn)組和對(duì)照組的活菌濃度 (CFU/ml),并換算為對(duì)數(shù)值(N),并按下式計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值: 殺滅對(duì)數(shù)值 (KL)對(duì)照組平均活菌濃度的對(duì)數(shù)值(NO)試驗(yàn)組活菌濃度對(duì)數(shù)值(NX) 可接受標(biāo)準(zhǔn) 殺滅對(duì)數(shù)值 (KL)應(yīng)不低于35個(gè)對(duì)數(shù)單位。 表面試驗(yàn)法記錄見(jiàn)附錄6 現(xiàn)場(chǎng)考察試驗(yàn) 消毒前對(duì)潔凈區(qū)進(jìn)行表面微生物取樣。 取樣地點(diǎn):固體車(chē)間(D級(jí))的制粒間一墻壁和設(shè)備表面、 QC微生物檢測(cè)室(C級(jí))墻壁和設(shè)備表面、QC微生物檢測(cè)室超凈工作臺(tái)(A級(jí))下設(shè)備表面。取樣操作及檢驗(yàn)執(zhí)行表面微生物檢驗(yàn)。 生產(chǎn)操作結(jié)束后操作人員按照生產(chǎn)區(qū)清潔對(duì)潔凈區(qū)進(jìn)行清潔消毒。 清潔消毒完畢15分鐘后,現(xiàn)場(chǎng)QA對(duì)清潔消毒后的潔凈區(qū)進(jìn)行表面微生物取樣。 固體車(chē)間(D級(jí))的制粒間一墻壁和設(shè)備表面、 QC微生物檢測(cè)室(C級(jí))墻壁和設(shè)備表面、QC微生物檢測(cè)室超凈工作臺(tái)(A級(jí))下設(shè)備表面。取樣操作及檢驗(yàn)執(zhí)行表面微生物檢驗(yàn)。 至少進(jìn)行3次試驗(yàn)。 可接受標(biāo)準(zhǔn)消毒后:A級(jí):<1CFU/25cm2C級(jí):<25CFU/25cm2D級(jí):&
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