動物細胞工程2

1、2.2 動物細胞工程動物細胞工程教學(xué)目標教學(xué)目標n了解動物細胞融合的原理、過程了解動物細胞融合的原理、過程和意義。和意義。n理解單克隆抗體制備的過程和理解單克隆抗體制備的過程和 應(yīng)用應(yīng)用材料材料: 1970年，有兩位科學(xué)家做了一個人年，有兩位科學(xué)家做了一個人鼠細胞融鼠細胞融合的實驗，以證明細胞膜的流動性。那么，如何實現(xiàn)合的實驗，以證明細胞膜的流動性。那么，如何實現(xiàn)人人鼠細胞的融合，動物細胞融合后還有什么用途呢？鼠細胞的融合，動物細胞融合后還有什么用途呢？一、動物細胞融合1.概念：概念： 動物細胞融合（動物細胞融合（cell fusion）也稱）也稱細胞雜細胞雜交，交，是指是指兩個或多個動物細胞

2、兩個或多個動物細胞結(jié)合形成結(jié)合形成一個細一個細胞胞的過程。的過程。 融合形成的融合形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳物具有原來兩個或多個細胞遺傳物質(zhì)質(zhì)的單核細胞，稱為的單核細胞，稱為雜交細胞雜交細胞。誘導(dǎo)方法：誘導(dǎo)方法：物理方法：物理方法：化學(xué)法：化學(xué)法：生物法：生物法： 滅活的病毒滅活的病毒電激等電激等聚乙二醇（聚乙二醇（PEG)3.融合過程：融合過程： 為什么滅活的為什么滅活的 病毒能作誘導(dǎo)劑病毒能作誘導(dǎo)劑？3.融合過程：融合過程：滅活喪滅活喪失感染性失感染性保留融合活性保留融合活性4.動物細胞融合技術(shù)的意義和應(yīng)用動物細胞融合技術(shù)的意義和應(yīng)用小結(jié)：植物體細胞雜交與動物細胞融合的比較小結(jié)：植物

3、體細胞雜交與動物細胞融合的比較比較項目比較項目植物體細胞雜交植物體細胞雜交動物細胞融合動物細胞融合原理原理融合前處理融合前處理使用的酶使用的酶誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法主要用途主要用途細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞的全能性細胞的全能性細胞膜的流動性細胞膜的流動性纖維素酶、果膠酶纖維素酶、果膠酶胰蛋白酶胰蛋白酶 物理方法物理方法（離心、振蕩、電激）離心、振蕩、電激） 化學(xué)方法（化學(xué)方法（PEG）物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法滅活的病毒滅活的病毒獲得雜種植株獲得雜種植株獲得雜交細胞獲得雜交細胞、制備單克隆抗體制備單克隆抗體去除細胞壁后誘去除細胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細胞分散后使細胞分散后誘導(dǎo)細

4、胞融合誘導(dǎo)細胞融合【例【例1】能使動物細胞融合的特有的誘導(dǎo)因子是】能使動物細胞融合的特有的誘導(dǎo)因子是 （ ）A.離心離心 B.滅活的病毒滅活的病毒 C.電刺激電刺激 D.振動振動【例【例2】融合后的雜交細胞的遺傳物質(zhì)有何特點（】融合后的雜交細胞的遺傳物質(zhì)有何特點（ ）A.具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息 B.能無限增殖能無限增殖C.可形成新個體可形成新個體 D.培養(yǎng)過程會貼壁培養(yǎng)過程會貼壁【例【例3】動物細胞融合的作用中最重要的是（】動物細胞融合的作用中最重要的是（ ）A.克服遠源雜交不親和克服遠源雜交不親和 B.制備單克隆抗體制備單克隆抗體 C.培育新物種培育

5、新物種 D.生產(chǎn)雜種細胞生產(chǎn)雜種細胞 BBA抗體：能夠與抗原發(fā)生特抗體：能夠與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的異性結(jié)合的免疫球蛋白免疫球蛋白。能產(chǎn)生抗體的細胞是能產(chǎn)生抗體的細胞是漿細漿細胞（即效應(yīng)胞（即效應(yīng)B細胞）。細胞）。二、單克隆抗體二、單克隆抗體抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法從從血血清清中中分分離離抗抗體體該法制備抗體的特點：該法制備抗體的特點： 產(chǎn)量低、純度低，且抗產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。體的特異性差、靈敏度低。多多種種效效應(yīng)應(yīng)B細細胞胞動動物物體體內(nèi)內(nèi)多多種種抗抗體體抗抗原原 讀下面一段資料，找出單克隆抗體的概念讀下面一段資料，找出單克隆抗體的概念 人人們發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)

6、生免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的們發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的B細胞細胞可以產(chǎn)生多達百萬種以上的特異性抗體，但是每個可以產(chǎn)生多達百萬種以上的特異性抗體，但是每個B細胞只細胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體。要想獲得大量的分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個單一抗體，必須用單個B細胞進行無性繁殖，即克隆。細胞進行無性繁殖，即克隆。 1.單克隆抗體的概念單克隆抗體的概念 單克隆抗體：單克隆抗體：單個單個B細胞克隆產(chǎn)生的細胞克隆產(chǎn)生的化學(xué)化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強性質(zhì)單一、特異性強的抗體的抗體提示提示1：對：對B細胞進行細胞培養(yǎng)可細胞進行細胞培養(yǎng)可行嗎？行

7、嗎？提示提示2：我們所學(xué)的哪種細胞是可以無限增殖的？：我們所學(xué)的哪種細胞是可以無限增殖的？問題：問題：如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請嘗試設(shè)如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請嘗試設(shè)計一個方案。計一個方案。 2.單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備提示提示3 3：有什么方法能使：有什么方法能使B B細胞產(chǎn)生抗體細胞產(chǎn)生抗體 的能力和腫瘤細胞無限增殖能的能力和腫瘤細胞無限增殖能 力同時具備呢？力同時具備呢？一個一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體淋巴細胞只分泌一種特異性抗體 骨髓瘤細胞能無限增殖骨髓瘤細胞能無限增殖雜交瘤細胞雜交瘤細胞動物細胞培養(yǎng)技術(shù)動物細胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計方案：設(shè)計方案：動物細胞融合技術(shù)動物細胞融合技術(shù)

8、單克隆單克隆抗體抗體 既能產(chǎn)生特異性抗體，既能產(chǎn)生特異性抗體， 又能大量增殖的細胞又能大量增殖的細胞為什么給小鼠注射特定的為什么給小鼠注射特定的抗原蛋白？抗原蛋白？ 會有哪幾種融合方式？會有哪幾種融合方式？ 雜交瘤細胞是如何篩選出雜交瘤細胞是如何篩選出來的？有何特點？來的？有何特點？ 是否所有的雜交瘤細胞都是否所有的雜交瘤細胞都能產(chǎn)生專一性抗體？能產(chǎn)生專一性抗體？ 如何大規(guī)模進行培養(yǎng)得到如何大規(guī)模進行培養(yǎng)得到大量的單克隆抗體？大量的單克隆抗體？BB 、B瘤瘤 、瘤瘤瘤瘤 （B、瘤）、瘤）（一選）（一選）選選擇性培養(yǎng)基擇性培養(yǎng)基：只有只有雜交瘤雜交瘤細胞細胞才能存才能存活活獲得產(chǎn)生相應(yīng)獲得產(chǎn)生相

9、應(yīng)抗體的抗體的B細胞細胞（二選）：選（二選）：選能產(chǎn)生所需能產(chǎn)生所需專專一抗體的雜交一抗體的雜交瘤細胞瘤細胞單克隆抗體的優(yōu)點單克隆抗體的優(yōu)點特異性強、靈敏度高特異性強、靈敏度高，并能大量制備。并能大量制備。（1）作為診斷試劑）作為診斷試劑最廣泛應(yīng)用最廣泛應(yīng)用準確、高效、簡易、快速準確、高效、簡易、快速單抗制備過程分哪幾步？單抗制備過程分哪幾步？請用箭頭把以下代表單克隆抗請用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順序是？序是？ 兩個過程兩個過程動物細胞融合過程動物細胞融合過程單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程三個三個

10、“一一”一個誘導(dǎo)細胞融合的新方法一個誘導(dǎo)細胞融合的新方法 滅活病毒滅活病毒一個新細胞一個新細胞雜交瘤細胞雜交瘤細胞一個優(yōu)勢一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性強、單克隆抗體特異性強、 靈敏度高的優(yōu)勢靈敏度高的優(yōu)勢1 1、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是（ ） A.A.經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的B B淋巴細胞淋巴細胞 B.B.沒經(jīng)過免疫的沒經(jīng)過免疫的T T淋巴細胞淋巴細胞C.C.經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的T T淋巴細胞淋巴細胞 D.D.沒經(jīng)過免疫的

11、淋巴細胞沒經(jīng)過免疫的淋巴細胞A2.動物細胞融合與植物體細胞雜交的比較中，正確的是動物細胞融合與植物體細胞雜交的比較中，正確的是（ ）A. 誘導(dǎo)融合的方法完全相同誘導(dǎo)融合的方法完全相同 B.所用的技術(shù)手段基本相同所用的技術(shù)手段基本相同 C. 操作步驟基本相同操作步驟基本相同 D. 都能形成雜種細胞都能形成雜種細胞 D3. 3. 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和B B淋巴細胞誘導(dǎo)融合后，要用淋巴細胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細胞是特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細胞是 （ ）淋巴細胞淋巴細胞 小鼠骨髓瘤細胞小鼠骨髓瘤細胞 B B淋巴細胞自身融合細胞淋巴細胞自身融合細胞小鼠骨髓瘤細胞自身融合細胞小鼠骨髓瘤細胞自身融合細胞 雜交瘤細胞雜交瘤細胞A.A. B. B.C.C. D.D. C C4.“4.“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”是指是指 （ ）A.A.單克隆抗體單克隆抗體 B.B.雜交瘤細胞雜交瘤細胞C.C.產(chǎn)生特定抗體的產(chǎn)生特定抗體的B B淋巴細胞淋巴細胞 D.D.在單克隆抗體上連接抗癌藥物在單克隆抗體上連接抗癌藥物 D有夢想，才會有創(chuàng)造！ 已成功的動物細胞融合實例有很多，如人已成功的動物細胞融合實例有很多，如人小鼠、人小鼠、人