醫(yī)學(xué)標(biāo)書范文3

1、河南省科技攻關(guān)計劃項(xiàng)目申 請 書姓 名： JiangDongbao 項(xiàng)目名稱： FGFR4表達(dá)對結(jié)直腸癌細(xì)胞株生物學(xué)行為的影響及作用機(jī)制的研究 單 位： 鄭州大學(xué) 聯(lián)系電話： 填 報 說 明 請根據(jù)自己的專業(yè)及研究方向，針對某具體臨床問題，結(jié)合所學(xué)習(xí)臨床科研方法的一種或幾種寫出一份科研設(shè)計。完成后，文件以個人姓名命名，發(fā)至：1736601711?？己顺煽円涝O(shè)計書優(yōu)略評定。截至日期2013年11月8日。一、項(xiàng)目的立項(xiàng)依據(jù)和意義（說明國內(nèi)外相關(guān)領(lǐng)域技術(shù)發(fā)展水平和趨勢等） 結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）是起源于結(jié)直腸黏膜上皮的惡性腫瘤，是臨床最常見的惡性腫瘤之一。我國每年結(jié)直

2、腸癌新發(fā)病例超過25萬，死亡病例約14萬，新發(fā)與死亡病例均占全世界同期結(jié)直腸癌病例的20%1。局部進(jìn)展期結(jié)直腸癌5年癌癥相關(guān)生存率為70%，而發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的晚期結(jié)直腸癌5年生存率僅為12%，且生活質(zhì)量低。目前結(jié)直腸癌新輔助化療、輔助化療、姑息化療方案很多，如ECF、DCF、奧沙利鉑+氟尿嘧啶、順鉑+氟尿嘧啶等，但其最核心的藥物是氟尿嘧啶，在此基礎(chǔ)上聯(lián)合其他化療藥物。近年來，靶向藥物在結(jié)直腸癌治療領(lǐng)域的研究和應(yīng)用成為一大熱點(diǎn)，作用于EGFR的愛必妥、作用于VEGF的貝伐單抗、針對Her-2的赫賽汀等已進(jìn)入胃癌治療的臨床實(shí)驗(yàn)中。 成纖維生長因子受體（FGFRs）是一個多基因家族,屬免疫球蛋白基因超

3、家族成員,是分布在多種細(xì)胞上的膜蛋白，F(xiàn)GFR家族成員有FGFR1、FGFR2、FGFR3以及FGFR4。它們的特點(diǎn)是在胞膜外含有3個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域，一個疏水的跨膜結(jié)構(gòu)，胞漿內(nèi)含有兩個呈串聯(lián)結(jié)構(gòu)的酪氨酸激酶功能區(qū)。FGFR13在體內(nèi)是廣泛分布的,而FGFR4主要在發(fā)育早期大量表達(dá),而且主要分布在視網(wǎng)膜和腎臟。編碼FGFR4蛋白的FGFR4基因位于5號染色體，5q35.1-qter，基因編號為2264。FGFR4蛋白是一類具有自身磷酸化活性的跨膜酪氨酸激酶受體中的一種,在胚胎發(fā)育、組織修復(fù)和血管形成等進(jìn)程中起著十分重要的作用2,3。但FGFR4在惡性腫瘤中的研究相對較少，Pubmed檢索該分

4、子在胃癌中的研究僅見幾篇報道，而且研究尚不深入。但有學(xué)者認(rèn)為，F(xiàn)GFR家族是在惡性腫瘤診治方面是一個新興的領(lǐng)域，有廣闊的應(yīng)用前景4。FGFR4在常見的惡性腫瘤如乳腺癌、胰腺癌、橫紋肌肉瘤及腎細(xì)胞癌中均呈高表達(dá)5-7。Meijer D等報道FGFR4表達(dá)是復(fù)發(fā)性乳腺癌患者的獨(dú)立的預(yù)后因素8；Milano等研究亦認(rèn)為FGFR4可以預(yù)測三苯氧胺治療乳腺癌的療效9。Gowardhan等10 研究報道，與良性增生相比，F(xiàn)GFR4在前列腺癌中的表達(dá)顯著上調(diào)；FGFR4的表達(dá)與Gleason評分相關(guān)；生存分析顯示，F(xiàn)GFR4過表達(dá)與較差的預(yù)后相關(guān)，無病生存期縮短。Ho HK等對57對肝細(xì)胞肝癌組織及對應(yīng)的正

5、常組織進(jìn)行real time PCR定量檢測FGFR4在mRNA水平的表達(dá)，統(tǒng)計結(jié)果顯示，F(xiàn)GFR4的表達(dá)與患者的主要臨床病理資料無相關(guān)性，可能是由于樣本量較小11。Streit等12通過免疫組化技術(shù)對137例惡性黑色素瘤組織標(biāo)本進(jìn)行FGFR4蛋白水平表達(dá)進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，F(xiàn)GFR4在惡性黑色素瘤組織標(biāo)本中的表達(dá)率為45%，F(xiàn)GFR4的表達(dá)與腫瘤臨床分期、微潰瘍形成、原發(fā)灶的數(shù)目、總生存期及無病生存期均有明顯相關(guān)性，作者認(rèn)為FGFR4蛋白的表達(dá)可作為惡性黑色素瘤進(jìn)展的潛在指標(biāo)。自2002年，Bange等13發(fā)現(xiàn)了FGFR4 Gly388Arg這一胚系多態(tài)性后，該SNP現(xiàn)已成為了一個研究的熱點(diǎn)

6、。該SNP是位于FGFR4第9外顯子388密碼子上，堿基G轉(zhuǎn)變?yōu)锳，導(dǎo)致了FGFR4的氨基酸序列發(fā)生了變化，即388位氨基酸由甘氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)榫彼?，該位點(diǎn)位于FGFR4的高度保守序列中。據(jù)報道，F(xiàn)GFR4 Arg388基因型并不影響腫瘤的發(fā)生過程，因?yàn)樵谌橄侔┗颊呒罢φ罩校揝NP在兩組中的分布比例大致相同，F(xiàn)GFR4 Arg388基因型均占50%左右。但在淋巴結(jié)陽性的乳腺癌患者中，F(xiàn)GFR4 Arg388基因型與更短的無病生存期和總生存期有關(guān)14。有報道顯示，攜帶有Arg388等位基因的肺癌患者腫瘤發(fā)病年齡更早，差的臨床分期的比例更高，生存期更短，所以FGFR4 Gly388Arg可能預(yù)測

7、肺癌的預(yù)后15。這些發(fā)現(xiàn)強(qiáng)調(diào)了該SNP位點(diǎn)具有臨床意義，這一推斷已在頭頸部癌、前列腺癌、肺癌等惡性腫瘤中得以證實(shí)3, 16-18。當(dāng)然也有一些文獻(xiàn)認(rèn)為該SNP無預(yù)后價值。近來，一項(xiàng)隨機(jī)的II期實(shí)驗(yàn)研究中，257例T2-4/N0-2/M0原發(fā)性乳腺癌患者接受了阿霉素和環(huán)磷酰胺（AC）或阿霉素和培美曲唑（AP），序貫多西他賽（Doc）作為新輔助化療，多因素分析顯示，F(xiàn)GFR4 Arg388是AC-Doc作為乳腺癌患者新輔助治療方案病理性完全緩解的獨(dú)立預(yù)后因素19。Sugiyama等發(fā)現(xiàn)了MT1-MMP/FGFR4這個復(fù)合物，其中FGFR4 R388等位基因可通過減少溶酶體對MT1-MMP的降解而增

8、加對膠原蛋白的侵襲；通過siRNA下調(diào)MT1-MMP或FGFR4-R388均可阻止細(xì)胞侵襲和生長20。近來一項(xiàng)meta分析顯示，F(xiàn)GFR4 Gly388Arg多態(tài)性與前列腺癌的進(jìn)展相關(guān)，可作為前列腺癌的進(jìn)展的一個分子標(biāo)記21。在目前發(fā)現(xiàn)的20余種成纖維生長因子（FGF）中，能與FGFR4結(jié)合的生長因子有FGF1, 2, 4, 6, 8, 9, 16, 17, 18 和 19。其中只有FGF19僅對FGFR4特異性結(jié)合22。且無論有無-Klotho存在，F(xiàn)GF19均可與FGFR4結(jié)合而引起后續(xù)的生物學(xué)效應(yīng)23。FGFR4的激活是FGF19促進(jìn)肝細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)肝癌形成的機(jī)制24FGFR4在在結(jié)直腸

9、癌中的研究甚少，故而本課題重點(diǎn)探討了FGFR4的表達(dá)對結(jié)直腸癌細(xì)胞株的生物學(xué)行為的影響及作用機(jī)制。本研究為了解FGFR4對結(jié)直腸癌細(xì)胞株生物學(xué)特性的影響，進(jìn)行了體外功能實(shí)驗(yàn)，通過慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)下調(diào)FGFR4的表達(dá)，然后進(jìn)行了一系列功能實(shí)驗(yàn)，包括增殖實(shí)驗(yàn)、克隆實(shí)驗(yàn)、侵襲實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的凋亡和細(xì)胞周期的變化，western blot檢測凋亡及細(xì)胞周期相關(guān)蛋白在干擾前后的變化，初步探討FGFR4影響結(jié)直腸癌細(xì)胞株生物學(xué)行為的機(jī)制。1.International Agency for Research On Cancer. World Health Organization. GL

10、OBOCAN 2012: Estimated Cancer Incidence,Mortality and Prevalence Worldwide in 2012EB/OL 2014-12-5.2. Eswarakumar VP, Lax I, Schlessinger J. Cellular signaling by fibroblast growth factor receptors. Cytokine Growth Factor Rev 2005; 16:13949.3. Wang J, Stockton DW, Ittmann M. The fibroblast growth fac

11、tor receptor-4 Arg388 allele is associated with prostate cancer initiation and progression. Clin Cancer Res 2004;10:616978.4. Katoh M. Genetic alterations of FGF receptors: an emerging field in clinical cancer diagnostics and therapeutics. Expert Rev Anticancer Ther 2010;10:1375-9.5. Jacquemier J, A

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13、i A, Sasaki H, Kim SJ, et al. Identification of receptor genes in renal cell carcinoma associated with angiogenesis by differential hybridization technique. Biochem Biophys Res Commun 1999;257:855-9. 8. Meijer D, Sieuwerts AM, Look MP, et al. Fibroblast growth factor receptor 4 predicts failure on t

14、amoxifen therapy in patients with recurrent breast cancer. Endocr Relat Cancer. 2008;15:101-11.9. Milano A, Dal Lago L, Sotiriou C, et al. What clinicians need to know about antioestrogen resistance in breast cancer therapy. European Journal of Cancer 2006 ;42:2692705.10. Gowardhan B, Douglas DA, Ma

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16、ing hepatocellular carcinoma progression and represents a potential target for therapeutic intervention. J Hepatol. 2009;50:118-27. 12. Streit S, Mestel DS, Schmidt M, FGFR4 Arg388 allele correlates with tumour thickness and FGFR4 protein expression with survival of melanoma patients.Br J Cancer. 20

17、06;94:1879-86.13. Bange J, Prechtl D, Cheburkin Y, et al. Cancer progression and tumor cell motility are associated with the FGFR4 Arg(388) allele. Cancer Res 2002; 62:840-47.14. Thussbas C, Nahrig J, Streit S,et al. FGFR4 Arg388 allele is associated with resistance to adjuvant therapy in primary br

18、east cancer.J Clin Oncol 2006;24:3747-55.15. Spinola M, Leoni V, Pignatiello C, et al. Functional FGFR4 Gly388Arg polymorphism predicts prognosis in lung adenocarcinoma patients. J Clin Oncol 2005; 23:7307-11.16. Ma Z, Tsuchiya N, Yuasa T, et al. Polymorphisms of fibroblast growth factor receptor 4

19、have association with the development of prostate cancer and benign prostatic hyperplasia and the progression of prostate cancer in a Japanese population.Int J Cancer 2008;123:2574-9.17. Falvella FS, Frullanti E, Galvan A, et al.FGFR4 Gly388Arg polymorphism may affect the clinical stage of patients

20、with lung cancer by modulating the transcriptional profile of normal lung.Int J Cancer 2009;124:2880-5.18. Tanuma J, Izumo T, Hirano M, et al. FGFR4 polymorphism, TP53 mutation, and their combinations are prognostic factors for oral squamous cell carcinoma. Oncol Rep 2010; 23:739-44.19. Marmé F

21、, Werft W, Benner A，et al. FGFR4 Arg388 genotype is associated with pathological complete response to neoadjuvant chemotherapy for primary breast cancer. Ann Oncol 2010 ;21:1636-42.20. Sugiyama N, Varjosalo M, Meller P,et al. Fibroblast growth factor receptor 4 regulates tumor invasion by coupling f

22、ibroblast growth factor signaling to extracellular matrix degradation. Cancer Res. 2010;70:7851-61.21. Xu B, Tong N, Chen SQ, et al. FGFR4 Gly388Arg polymorphism contributes to prostate cancer development and progression: A meta-analysis of 2618 cases and 2305 controls. BMC Cancer 2011; 1:84.22. Xie

23、 MH, Holcomb I, Deuel B, Dowd P, Huang A, Vagts A, Foster J, Liang J, Brush J, Gu Q, Hillan K, Goddard A, et al. FGF-19, a novel fibroblast growth factor with unique specificity for FGFR4. Cytokine 1999;11:72935.23.Wu X, Ge H, Lemon B, et al. Selective ac

24、tivation of FGFR4 by an FGF19 variant does not improve glucose metabolism in ob/ob mice. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of Amer

25、ica 2009; 106:1437984. 24. Xinle Wu，Hongfei Ge，Bryan Lemon, et al.FGF19-induced Hepatocyte Proliferation Is Mediated through FGFR4 Activation. Journal of biological chemistry2010; 285:5165-70.二、項(xiàng)目創(chuàng)新點(diǎn)、主要研究開發(fā)內(nèi)容及目標(biāo)（實(shí)施方案、技術(shù)關(guān)鍵、技術(shù)路線和技術(shù)經(jīng)濟(jì)指標(biāo)等）1.實(shí)施方案（1）設(shè)計4個FGFR4RNAi靶點(diǎn)構(gòu)建到慢病毒載體，進(jìn)而小量包裝秤病毒顆粒。然后感染S

26、W620和HCT116結(jié)直腸癌，通過定量PCR和Western blot法檢測FGFR4在mRNA和蛋白水平的表達(dá)，篩選出干擾效果最佳的siRNA，進(jìn)行大量包裝，形成FGFR4 siRNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株，F(xiàn)GFR4持續(xù)低表達(dá)；構(gòu)建FGFR4過表達(dá)慢病毒載體，進(jìn)而包裝成病毒顆粒, 然后感染結(jié)直腸癌細(xì)胞株，形成FGFR4 過表達(dá)細(xì)胞株，F(xiàn)GFR4持續(xù)高表達(dá)，以備后續(xù)功能實(shí)驗(yàn)。2. 對FGFR4 siRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株和FGFR4 過表達(dá)細(xì)胞株，分別以各自未行處理的細(xì)胞株作為對照，進(jìn)行一系列的體外功能實(shí)驗(yàn)，以評價FGFR4的上調(diào)和下調(diào)對結(jié)直腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，包括增殖實(shí)驗(yàn)、克隆實(shí)驗(yàn)、侵襲實(shí)驗(yàn)、

27、凋亡實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞周期的變化；同時在分子水平進(jìn)行Western blot檢測，以顯示不同處理后，細(xì)胞增殖、侵襲、凋亡及細(xì)胞周期相關(guān)蛋白表達(dá)的變化，如MMP-2、p27、CyclinD1及Bcl-xl等。3. 分別將FGFR4 siRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株、FGFR4 過表達(dá)細(xì)胞株和相應(yīng)的未處理的結(jié)直腸癌細(xì)胞株皮下注射至裸小鼠（nu/nu）背部, 構(gòu)建成裸小鼠結(jié)直腸癌模型。接種6-8周后，觀測不同處理組成瘤體積、大小等增殖指標(biāo)的變化；對裸小鼠結(jié)直腸癌組織行免疫組化檢測，以了解不同處理組腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性相關(guān)分子表達(dá)的變化。2研究方法和研究手段：1.標(biāo)本來源：結(jié)直腸癌細(xì)胞株HCT116、SW620、DLD1、

28、SW116、LS47等均購自上海中科院細(xì)胞所或ATCC，按說明書培養(yǎng)，利用DMEM培養(yǎng)基、Gibico美洲胎牛血清、100IU/ml青霉素及100ug/ml鏈霉素等培養(yǎng)細(xì)胞。BALB/c（nu-nu）裸小鼠擬購自中國科學(xué)院上海藥物研究所，合格證編號：滬動合證字122號；日齡：28-32天；體重16-20；飼養(yǎng)于SPF級環(huán)境中。用于FGFR4 RNAi和過表達(dá)實(shí)驗(yàn)的慢病毒載體擬購自上?；鶆P公司。2利用軟件設(shè)計3-4個FGFR4 RNAi靶點(diǎn)，構(gòu)建到慢病毒載體上，進(jìn)而包裝成病毒顆粒，然后感染FGFR4高表達(dá)的結(jié)直腸癌細(xì)胞株，經(jīng)RT-PCR和Western blot驗(yàn)證干擾效率，制備成FGFR4 R

29、NAi穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。同樣，運(yùn)用慢病毒載體構(gòu)建FGFR4過表達(dá)結(jié)直腸癌細(xì)胞株。3.利用流式細(xì)胞儀、CCK-8及侵襲小室等對FGFR4 RNAi穩(wěn)轉(zhuǎn)株和FGFR4過表達(dá)細(xì)胞株進(jìn)行體外功能實(shí)驗(yàn)，包括增殖實(shí)驗(yàn)、克隆實(shí)驗(yàn)、侵襲實(shí)驗(yàn)、凋亡實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞周期的變化；同時在分子水平進(jìn)行Western blot檢測結(jié)直腸癌生物特性相關(guān)分子表達(dá)的變化。4將FGFR4 RNAi穩(wěn)轉(zhuǎn)株、FGFR4過表達(dá)細(xì)胞株及相應(yīng)的未感染細(xì)胞株分別皮下注射入裸小鼠背部，構(gòu)建成裸鼠結(jié)直腸癌模型，進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。觀測成瘤體積等細(xì)胞增殖指標(biāo)，利用免疫組化技術(shù)檢測FGFR4不同表達(dá)的裸鼠結(jié)直腸癌模型相關(guān)分子表達(dá)的變化。3.技術(shù)路線見圖一有效靶點(diǎn)大量

30、包裝設(shè)計4個FGFR4基因RNAi靶點(diǎn)構(gòu)建到慢病毒載體載體小量包裝慢病毒顆粒感染HCT116、SW620結(jié)直腸癌細(xì)胞株FGFR4mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)干擾效率滿意FGFR4基因過表達(dá)慢病毒載體構(gòu)建過表達(dá)載體小量包裝慢病毒顆粒感染結(jié)直腸癌細(xì)胞株FGFR4mRNA和蛋白的表達(dá)qPCR和WesternBlotFGFR4過表達(dá)滿意基因功能研究成瘤的體積、大小等增值指標(biāo)的評價腫瘤組織MMP-2、p27、CyclinD1、BCL-xl表達(dá)的變化MMP-2、p27、CyclinD1、BCL-xl表達(dá)的變化增值、侵襲、凋亡、細(xì)胞周期變化等試驗(yàn)In vivoIn vitro裸鼠結(jié)直腸癌模型的構(gòu)建 圖一4.技術(shù)關(guān)

31、鍵本課題關(guān)鍵技術(shù)在于FGFR4 RNAi慢病毒載體的構(gòu)建及FGFR4 RNAi穩(wěn)轉(zhuǎn)結(jié)直腸癌細(xì)胞株的建立；FGFR4過表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建及FGFR4 過表達(dá)結(jié)直腸癌細(xì)胞株的建立；FGFR4不同表達(dá)的裸小鼠結(jié)直腸癌模型的構(gòu)建；一系列體外功能實(shí)驗(yàn)、體內(nèi)功能實(shí)驗(yàn)及相關(guān)分子檢測，探討FGFR4在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用三、實(shí)施本項(xiàng)目已具備的條件（說明已具備的試驗(yàn)手段、技術(shù)力量、前期科研基礎(chǔ)情況）（1）本課題申請人可獨(dú)立進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)操作主要包括：新鮮標(biāo)本DNA和RNA的抽提和測定；RT-PCR及real time PCR的操作和結(jié)果分析；免疫組化技術(shù)的操作和結(jié)果分析；細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)；蛋白抽提、濃度測定、we

32、stern blot檢測靶分子蛋白表達(dá)及結(jié)果分析；siRNA瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù)及轉(zhuǎn)染效率測定；CCK-8法檢測細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)。流式細(xì)胞術(shù)的檢測，細(xì)胞免疫熒光技術(shù)在實(shí)驗(yàn)室老師協(xié)助下完成。（2).慢病毒構(gòu)建RNAi載體及過表達(dá)載體，是一些非常成熟的技術(shù)，F(xiàn)GFR4 RNAi穩(wěn)轉(zhuǎn)株和FGFR4過表達(dá)細(xì)胞株的建立可請上海吉凱公司協(xié)助完成，而該公司為專業(yè)從事介導(dǎo)靶分子上調(diào)和下調(diào)病毒載體的制備和包裝，已和前期研究所在實(shí)驗(yàn)室有過多次成功合作先例；而構(gòu)建裸小鼠腫瘤模型亦是一項(xiàng)常用的研究技術(shù)，可請相關(guān)老師指導(dǎo)完成。（3）本課題在葉延偉老師的帶領(lǐng)下進(jìn)行，葉老師在復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院攻讀腫瘤學(xué)博士學(xué)位，期間在復(fù)旦大學(xué)實(shí)驗(yàn)研

33、究中心進(jìn)行了為期1年的博士課題實(shí)驗(yàn)部分的研究，獨(dú)立完成了一系列實(shí)驗(yàn)操作，實(shí)驗(yàn)結(jié)果已經(jīng)發(fā)表。碩博連讀期間以第一作者發(fā)表SCI論著5篇，最高IF為5.131分，累計IF達(dá)18分，分別發(fā)表于Cancer、Cancer letters、Annals of surgical oncology、Journal of surgical oncology、digestive surgery；此外，以共同作者發(fā)表國內(nèi)外論著10余篇。鄭州大學(xué)附屬第一醫(yī)院重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室韓超老師給予實(shí)驗(yàn)技術(shù)方面的幫助，韓老師是鄭州大學(xué)的在職博士，實(shí)驗(yàn)技術(shù)精湛，經(jīng)驗(yàn)豐富。（4）.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)設(shè)備齊全，各個實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域均有

34、專業(yè)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)員，為該研究順利實(shí)施提供了很好的平臺。四、項(xiàng)目的預(yù)期經(jīng)濟(jì)、社會和環(huán)境效益FGFR4在結(jié)直腸癌中的研究很少，而且不夠深入。本課題利用慢病毒載體構(gòu)建FGFR4 RNAi穩(wěn)轉(zhuǎn)結(jié)直腸癌細(xì)胞株和FGFR4過表達(dá)細(xì)胞株，分別下調(diào)和上調(diào)FGFR4分子的表達(dá)，進(jìn)行一系列的體內(nèi)和體外功能實(shí)驗(yàn)，從而更全面、多角度地闡述FGFR4在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用，為結(jié)直腸癌新的治療靶點(diǎn)的篩選提供一些依據(jù)，目前國內(nèi)外文獻(xiàn)尚未見相關(guān)報道。五、項(xiàng)目實(shí)施的計劃進(jìn)度1. 2016年1月-2016年6月：1） 結(jié)直腸癌細(xì)胞株的培養(yǎng),包括HCT116、SW620及其他常見結(jié)直腸癌細(xì)胞株；篩選出FGFR4高表達(dá)和低表達(dá)結(jié)直腸癌細(xì)胞株。2） FGFR4 RNAi慢病毒載體的構(gòu)建與包裝,結(jié)直腸癌細(xì)胞株SW620、HCT116的感染, qPCR和western blot反復(fù)檢測FGFR4 RNAi慢病毒感染的效率，制備FGFR4 RNAi穩(wěn)轉(zhuǎn)結(jié)直腸癌細(xì)胞株。3）FGFR4過表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建與包裝，慢病毒顆粒感染FGFR4低表達(dá)結(jié)直腸癌細(xì)胞株，制備FGFR4過表達(dá)結(jié)直腸癌細(xì)胞株。2. 2016年7月-2016年12月：1）以FGFR RNAi穩(wěn)轉(zhuǎn)結(jié)直腸癌細(xì)胞株、FGFR4過表達(dá)結(jié)直腸癌細(xì)胞株和各自的未感染細(xì)胞株為研究對象，進(jìn)行一系列的體