冷浸法提取丹參脂溶性部位工藝研究

1、冷浸法提取丹參脂溶性部位工藝研究    【摘要】  【目的】探討冷浸法提取丹參脂溶性部位的最佳工藝條件?！痉椒ā坎捎酶咝б合嗌V(HPLC)法為測定方法，以丹參酮A提取量為指標，考察不同濃度乙醇和粉碎對丹參酮A提取率的影響，并用正交試驗法進一步優(yōu)選提取條件?！窘Y果】最佳提取工藝條件為采用8倍量體積分數95%乙醇冷浸提取2次(每次3 h)，在這種條件下，可獲得較高的丹參酮A提取率?！窘Y論】此工藝條件簡單、穩(wěn)定，提取率高。 【關鍵詞】  丹參/生產與制備;丹參/化學;丹參酮A/分析;色譜法，高壓液相;正交試驗丹參為唇形科植物丹參Salvi

2、a miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖，具有祛瘀止痛、活血通經、清心除煩的功效1?，F代醫(yī)學認為，丹參具有擴張冠狀動脈，增加冠狀動脈血流量，防止心肌缺血和心肌梗死，加快微循環(huán)血流，促進毛細血管網開放，抑制心肌收縮，減少能量消耗，擴張血管，降低膽固醇、血脂，抑制凝血，激活纖溶，穩(wěn)定紅細胞膜，提高缺氧耐受力，增加肝臟血流量，保護肝損傷細胞，抗肝纖維化，抑制中樞神經系統以及消炎抗菌等作用2。其脂溶性成分具有抗菌、抗炎、抗氧化等藥理作用3。目前提取丹參脂溶性成分的方法主要有乙醇回流法和超臨界CO2萃取法4。丹參酮A是丹參脂溶性主要成分之一，丹參酮A對熱敏感，在提取制備過程中容易被破壞5，超

3、臨界CO2萃取法成本較高。冷浸提取法工藝簡單，可室溫下操作且成本低。本文對冷浸法提取丹參中的脂溶性部位工藝進行系統研究，旨在優(yōu)選最佳提取工藝條件，現報道如下。1儀器和試藥LC10AT高效液相色譜儀(日本島津);SPD10A紫外檢測器(日本島津);N2000工作站;丹參酮A對照品購自中國藥品生物制品檢定所(批號：0766200011);丹參購自山東藥材市場，鑒定人為廣州中醫(yī)藥大學中藥學院關世俠副教授;甲醇為色譜純，購自SIGMA公司;純水以雙蒸法自制。2方法與結果21對照品溶液的制備取丹參酮A對照品約10 mg，精密稱定，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻;精密量取1 mL，置25 mL

4、量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。22色譜條件色譜柱：Kromasil C18柱(250 mm×46 mm);流動相：甲醇水(體積比為7525);流速：1 mL/mim;檢測波長：270 nm。在此條件下測定丹參酮A對照品及丹參提取物。23標準曲線分別吸取對照溶液25、50、75、100、150、200 L，注入液相色譜儀。以丹參酮A進樣量(X)對峰面積(Y)進行線性擬合，丹參酮A回歸方程為Y=4×106X，r=0999 4。結果表明：丹參酮A在0039 20313 6 g范圍內線性關系良好。24溶劑乙醇濃度選擇取8份丹參粉末(過3號篩)，每份約03 g，精密稱定后將每2份

5、分成1組，分別精密加入10 mL體積分數為65%、75%、85%、95%的乙醇，冷浸5 h，濾過，收集續(xù)濾液，精密量取1 mL置10 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別精密吸取5 L注入液相色譜儀進行測定。計算藥材提取物中丹參酮A含量：p丹參酮A=m丹參酮A(g)/m藥材(g)×100%。表1結果顯示，體積分數85%乙醇提取丹參酮A含量比體積分數95%乙醇提取丹參酮A含量低125%,故本實驗選擇體積分數95%乙醇作為提取溶劑。25粉碎提取試驗取同一批丹參藥材，一份粉碎(過3號篩)，一份切碎，再分別稱取3份，每份50 g，加8倍量體積分數95%乙醇冷浸過夜，濾過，精密吸取1 mL

6、置10 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別精密吸取5 L注入液相色譜儀測定。結果見表2。兩組間比較無顯著性差異(P>005)。所以從節(jié)省能源上考慮，丹參藥材不必粉碎成粉末，只需切碎后進行投料。26正交試驗選用體積分數95%乙醇作溶劑，取丹參50 g，共9份，按正交條件進行試驗，結果見表3、表4表1溶劑乙醇濃度選擇試驗結果表2粉碎提取試驗結果表3因素水平表27方差分析將正交試驗結果進行方差分析。表5結果顯示，A(乙醇用量)、B(冷浸次數)、C(冷浸時間)影響冷浸提取效果的因素順序為：B>C>A，B因素對提取有顯著性影響，A因素和C因素對提取無顯著性影響，考慮到節(jié)省能源和時

7、間以有利于工業(yè)生產，因此確定提取工藝為A2B2C2，即用8倍量體積分數95%乙醇冷浸提取2次，每次3 h。28工藝驗證試驗為考察上述優(yōu)選提取工藝的穩(wěn)定性，取丹參3份，每份50 g，按該工藝條件即藥材用8倍量體積分數95%乙醇冷浸提取2次，每次3 h，分別測定丹參酮A提取量。結果見表6。按正交實驗優(yōu)先的最佳工藝進行驗證試驗，3次結果都處于較高水平，這說明該提取工藝是穩(wěn)定可行的。表4正交水平表表5正交方差分析表6工藝驗證試驗結果3討論丹參脂溶性部位傳統提取方法是乙醇加熱回流，有效成分容易受破壞，而且提取得膏率高，影響藥物治療作用及制劑載藥量6;超臨界CO2萃取能在低溫下提取，且得膏率低，但生產成本

8、較高，加重生產廠家負擔7。冷浸法提取丹參脂溶性部位可以避免有效成分在加熱過程中被破壞，提取效率高，得膏率低，操作簡單且成本低;脂溶性的丹參酮A分布于丹參藥材的皮層中，木質部中沒有分布或分布甚微8，容易被體積分數95%乙醇浸出，因此冷浸過程中丹參粉碎或切碎提取差異不顯著。本實驗采用單因素法和正交設計法對丹參脂溶性部位的提取工藝進行篩選，并考慮了節(jié)省能源和時間等因素，得出最佳工藝，即將丹參藥材切碎，用8倍量體積分數95%乙醇冷浸2次，每3 h?！緟⒖嘉墨I】  1國家藥典委員會.中華人民共和國藥典S.北京：化學工業(yè)出版社，2005:25.2鄭虎占，董澤宏，佘靖.中藥現代研究與應用M.石家莊:河北醫(yī)科大學出版社,1999:1108.3程文君,張艷萍.丹參脂溶性成分抗菌消炎作用及其臨床應用J.中國現代實用醫(yī)學雜志,2007,3(6):61.4趙小亮,雷浩東,張繼.丹參有效成分提取的研究概述J.安徽農業(yè)科學,2007,35(6):1795.5蘇子仁,劉中秋.丹參醇提液在濃縮、干燥工藝過程中的化學成分變化研究(I)丹參酮A濕熱降解機理探討J.中成藥,1997,19(1):5.6周昊,彭國平.丹參的傳統提取工藝與超臨界CO2萃取大孔樹脂聯用工藝的比較研究J.中華中醫(yī)藥學刊,200