微波輻射—溶劑法提取農(nóng)吉利中總黃酮的工藝研究

1、微波輻射溶劑法提取農(nóng)吉利中總黃酮的工藝研究                               作者：黃曉文，樊輕亞，張煜帆，范華均【摘要】  目的 優(yōu)化農(nóng)吉利中總黃酮微波輻射溶劑提取的工藝條件。方法 在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以牡荊素作為總黃酮含量的指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法優(yōu)化微波輻射功

2、率、微波輻射時(shí)間、提取溫度、提取時(shí)間等因素。結(jié)果 微波輻射溶劑提取法的最佳提取工藝為：微波輻射功率560 W，微波輻射時(shí)間2 min，液固比201，提取溫度70 ，提取時(shí)間2.0 h。結(jié)論 與常規(guī)溶劑回流提取法相比，采用微波輻射處理藥材后再用溶劑進(jìn)行提取，總黃酮的提取率明顯提高;優(yōu)選得到的工藝穩(wěn)定可行。 【關(guān)鍵詞】  微波輻射;農(nóng)吉利;總黃酮;牡荊素;正交設(shè)計(jì)Abstract:Objective To optimize the experimental conditions of microwaveirradiated reflux extraction of total flavo

3、noids from Crotalaria sessiliflora L. Method Orthogonal test was designed including microwave power,irradiation time,extraction temperature,extraction time based on single factor experiments with vitexin as index constituent of the total flavonoids. Results Optimum conditions were resulted with 20 t

4、imes of methanol extracting for 2 h at 70 after irradiation of the medical materials for 2 min under microwave power 560 W. Conclusions Compared with the conventional solvent reflux extraction,the yield of total flavonoids from Crotalaria sessiliflora L. was improved greatly after the pretreatment o

5、f microwave irradiation of the medicinal materials,which was feasible,easy and reliable.Key words:microwaveirradiation; Crotalaria sessiliflora L; total flavonoids; vitexin; orthogonal design農(nóng)吉利系豆科植物野百合Crotalaria sessiliflora L.的全草，味甘、淡、平，功能滋陰益腎、清熱解毒、抗癌，主要用于痢疾、瘡癤、耳鳴耳聾、頭暈?zāi)垦＜岸喾N癌癥的。研究表明，農(nóng)吉利中含有生物堿、黃酮及氨基

6、酸等主要有效成分，其中黃酮類(lèi)化合物具有保護(hù)心腦血管、利膽保肝、抗癌等多種生理活性1-3。微波輻射法是一種用以提高藥材提取率的藥材輔助處理方法，具有快速高效、節(jié)能、節(jié)省溶劑等優(yōu)點(diǎn)4-5。本文在參照6的基礎(chǔ)上，通過(guò)微波輻射農(nóng)吉利藥材，使其細(xì)胞破壁，再用溶劑回流法提取其中的黃酮類(lèi)化合物，并采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)微波輻射及回流提取的條件進(jìn)行了優(yōu)化，旨在確定農(nóng)吉利中黃酮化合物提取的最佳工藝條件，為進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)農(nóng)吉利中總黃酮含量的分布提供基礎(chǔ)。1 儀器與材料UV1101紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海天美儀器有限公司)，PJ21CAN微波爐(美的公司)，HH6恒溫水浴鍋(江蘇金壇宏華儀器廠)，pHS25數(shù)顯pH計(jì)(

7、上海精密科學(xué)儀器有限公司);RE52CS1旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)。牡荊素對(duì)照品(藥品生物制品檢定所，批號(hào)111687200501);甲醇(色譜純，Merk公司);其他試劑為分析純，水為蒸餾水。農(nóng)吉利藥材購(gòu)自廣州清平中藥材市場(chǎng)、廣西玉林中藥材市場(chǎng)，經(jīng)廣東藥學(xué)院藥用植物與中藥鑒定學(xué)教研室鑒定為豆科植物野百合Crotalaria sessiliflora L.的全草。2 方法與結(jié)果2. 1 農(nóng)吉利總黃酮提取液的制備稱(chēng)取農(nóng)吉利細(xì)粉5.0 g置培養(yǎng)皿中，加入適量水浸潤(rùn)，攪拌均勻、鋪平，放入微波爐，按實(shí)驗(yàn)要求以不同的輻射功率和輻射時(shí)間輻射，再將樣品轉(zhuǎn)移到圓底燒瓶中，加入甲醇100 mL，在不同溫

8、度下以不同時(shí)間進(jìn)行提取。提取液濾過(guò)，旋干，甲醇溶解后轉(zhuǎn)入10 mL量瓶中，搖勻，定容，即得。2. 2 總黃酮的測(cè)定分別精密吸取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL的牡荊素對(duì)照品溶液(0.05 mg·mL-1)置10 mL具塞離心管中，加甲醇至刻度，密塞，搖勻。以甲醇作參比溶液，用1 cm比色皿，于328 nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明：牡荊素的質(zhì)量濃度在0.520.0 mg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為A=0.05240C-0.01120，r=0.999 2。取“2. 1”項(xiàng)下提取液作為供試品溶液，依法測(cè)定，并總黃酮含量。2. 3 單因素

9、試驗(yàn)以甲醇為溶劑，考察微波輻射功率、輻射時(shí)間，溶劑提取液固比、提取時(shí)間、提取溫度對(duì)總黃酮得率的影響，結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可知：輻射功率為560 W時(shí)，總黃酮得率達(dá)到最大值，當(dāng)功率繼續(xù)提高，總黃酮得率反而下降;微波輻射時(shí)間在2 min時(shí)總黃酮得率達(dá)到最大值;總黃酮得率隨著液固比的增大而升高，但變化不明顯，超過(guò)201后趨于穩(wěn)定，從節(jié)約成本角度考慮，最佳液固比為201;在70 時(shí)農(nóng)吉利總黃酮得率達(dá)到最高，再進(jìn)一步提高溫度，其得率有所下降;提取時(shí)間以1.52.0 h 為佳。1         2. 4 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選最佳工

10、藝在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，選取對(duì)總黃酮得率影響較大的4個(gè)因素：提取溫度、提取時(shí)間、微波輻射功率、輻射時(shí)間作為考察因素，選用L9(34)進(jìn)行正交試驗(yàn)，確定農(nóng)吉利總黃酮提取得最佳工藝。結(jié)果見(jiàn)表1、表2。根據(jù)極差分析和方差分析結(jié)果可知：4個(gè)因素對(duì)總黃酮提取率的影響程度由大到小依次為：提取溫度>微波輻射功率>提取時(shí)間>微波輻射時(shí)間，優(yōu)化工藝條件是A2B2C1D2，即：微波輻射功率為560 W，輻射時(shí)間為2 min，提取溫度70 ，提取時(shí)間2.0 h。表1 因素水平表表2 L9(34) 正交試驗(yàn)方差分析表2. 5 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)按照上述優(yōu)化工藝進(jìn)行了3次平行驗(yàn)證，總黃酮提取得率在6.476.73

11、 mg·g-1之間，RSD為2.0%，結(jié)果穩(wěn)定，表明該工藝合理可行。3 討 論3.1 采用常規(guī)的直接溶劑回流法在相同的條件下進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果表明：經(jīng)過(guò)微波輻射處理后的藥材總黃酮得率明顯提高(山東、廣西2個(gè)產(chǎn)地藥材的提取率分別高出了48%和23%)。3.2 采用微波輻射農(nóng)吉利藥材，可使細(xì)胞破壁，再以甲醇為溶劑回流提取農(nóng)吉利中的總黃酮，工藝方法合理，且設(shè)備簡(jiǎn)單、處理方式簡(jiǎn)便，可為農(nóng)吉利中總黃酮提取工藝的改進(jìn)提供依據(jù)?！尽?#160; 1 HUN Sung Yoo，JI Suk Lee，CHUI Young Kim，et al.Flavonoids of Crotalaria sessiliflora J.Arch Pharm Res，2004，27(5)：544-546.2 ABDUL MunIM，OSAMU Negishi，TETSUO Ozawa.Antioxidative compounds from Crotalaria sessifloraJ. Biosci Biotechnol Biochem,2003，67(2)：410-414.3 靖永謙，李宏善，陳瑞華.農(nóng)吉利中氨基酸成分的研究J.中藥通報(bào)，1987，12(7)：41-4