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專題整合專題整合克隆技術(shù)1.克隆技術(shù)的含義和克隆的條件(1)克隆技術(shù)的含義:包括分子克隆、細(xì)胞克隆和個(gè)體克隆三個(gè)水平。當(dāng)用于分子、細(xì)胞水平描述時(shí),指從眾多的基因或細(xì)胞群體中通過(guò)無(wú)性繁殖和選擇獲得目的基因或特定類型細(xì)胞的技術(shù)操作,如PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA、細(xì)胞培養(yǎng)。當(dāng)用于個(gè)體水平描述時(shí),克隆就是一種通過(guò)單個(gè)細(xì)胞,特別是來(lái)自特定個(gè)體的單個(gè)體細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖,從而產(chǎn)生新個(gè)體的過(guò)程或技術(shù),如植物組織培養(yǎng)、克隆動(dòng)物。(2)克隆動(dòng)物的條件具有包含物種完整基因組的細(xì)胞核的活細(xì)胞。具有能有效調(diào)控細(xì)胞核發(fā)育的細(xì)胞質(zhì)物質(zhì)。具備完成胚胎發(fā)育的必要的環(huán)境條件。2.分子克隆PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA(1)原理:DNA復(fù)制。(2)條件:DNA模板、引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶和4種脫氧核苷酸等。(3)擴(kuò)增過(guò)程:模板DNA受熱解旋為單鏈(變性)、冷卻后,引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈上(復(fù)性)、在熱穩(wěn)定DNA聚合酶作用下,從引物開始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成(延伸)。3.細(xì)胞克隆(克隆培養(yǎng)法)動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)(1)概念:把單個(gè)細(xì)胞從群體中分離出來(lái)單獨(dú)培養(yǎng),使之繁衍成一個(gè)新的細(xì)胞群體的技術(shù)。(2)最基本要求:保證所建成的克隆來(lái)源于單個(gè)細(xì)胞。(3)過(guò)程(4)提高細(xì)胞克隆形成率的措施選擇適宜的培養(yǎng)基;添加血清;以滋養(yǎng)細(xì)胞支持生長(zhǎng);激素刺激;用CO2調(diào)節(jié)pH。4.個(gè)體克隆(1)植

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