血液生理(家兔)

1、.實(shí)驗(yàn)三實(shí)驗(yàn)三 血液生理血液生理.血沉的測(cè)定血沉的測(cè)定紅細(xì)胞比容測(cè)定紅細(xì)胞比容測(cè)定血紅蛋白含量的測(cè)定血紅蛋白含量的測(cè)定血細(xì)胞計(jì)數(shù)血細(xì)胞計(jì)數(shù)基本內(nèi)容基本內(nèi)容.一一. .血沉的測(cè)定血沉的測(cè)定目的：目的：學(xué)習(xí)測(cè)定紅細(xì)胞沉降率的方法，了解測(cè)定其學(xué)習(xí)測(cè)定紅細(xì)胞沉降率的方法，了解測(cè)定其數(shù)值的意義。數(shù)值的意義。 .原原 理理 紅細(xì)胞沉降率（血沉）是指血沉管內(nèi)的抗凝紅細(xì)胞沉降率（血沉）是指血沉管內(nèi)的抗凝血被靜置一段時(shí)間（血被靜置一段時(shí)間（1h1h）后，紅細(xì)胞因重力）后，紅細(xì)胞因重力而下沉的毫米數(shù)。它是以血漿層的高度來(lái)計(jì)而下沉的毫米數(shù)。它是以血漿層的高度來(lái)計(jì)算的，血漿層越高，則血沉越快。家畜有的算的，血漿層越高

2、，則血沉越快。家畜有的疾病可以引起紅細(xì)胞血沉的顯著加速，故測(cè)疾病可以引起紅細(xì)胞血沉的顯著加速，故測(cè)定紅細(xì)胞血沉具有臨床診斷價(jià)值。定紅細(xì)胞血沉具有臨床診斷價(jià)值。.方法與步驟1.1.采血：采血：5%5%的檸檬酸鈉作為抗凝劑，抗凝劑與的檸檬酸鈉作為抗凝劑，抗凝劑與血液之間的容積比例為血液之間的容積比例為1 1：4 4。 2.2.吸血：吸血：吸血前要混勻抗凝血，加入血沉管吸血前要混勻抗凝血，加入血沉管（清潔）的血不能帶有氣泡，血沉管垂直放（清潔）的血不能帶有氣泡，血沉管垂直放置于血沉管架上。置于血沉管架上。3.3.檢查：檢查：分鐘、小時(shí)和小時(shí)檢查血沉分鐘、小時(shí)和小時(shí)檢查血沉管上部血漿的高度。管上部血漿

3、的高度。.討論：影響血沉的因素是什么？什么情況下血沉將升高？.二.紅細(xì)胞比容的測(cè)定實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩?shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)測(cè)定紅細(xì)胞比容的方法學(xué)習(xí)測(cè)定紅細(xì)胞比容的方法.u將抗凝血放在特制有刻度的玻璃管將抗凝血放在特制有刻度的玻璃管( (溫氏分血溫氏分血管管) )中，經(jīng)過(guò)離心沉淀，使血細(xì)胞與血漿分離。此中，經(jīng)過(guò)離心沉淀，使血細(xì)胞與血漿分離。此時(shí)管中的血液分為三層：上層為淡黃色的透明液時(shí)管中的血液分為三層：上層為淡黃色的透明液體即血漿；中層為很薄的一層呈灰白色的白細(xì)胞體即血漿；中層為很薄的一層呈灰白色的白細(xì)胞和血小板；下層為擠壓很緊的暗紅色的紅細(xì)胞。和血小板；下層為擠壓很緊的暗紅色的紅細(xì)胞。u紅細(xì)胞下沉，彼此壓緊

4、而又不改變每個(gè)血細(xì)胞紅細(xì)胞下沉，彼此壓緊而又不改變每個(gè)血細(xì)胞的正常形態(tài)。根據(jù)玻璃管刻度的讀數(shù)，測(cè)出紅細(xì)的正常形態(tài)。根據(jù)玻璃管刻度的讀數(shù)，測(cè)出紅細(xì)胞占全血的容積百分比即紅細(xì)胞比容。胞占全血的容積百分比即紅細(xì)胞比容。實(shí)驗(yàn)原理：實(shí)驗(yàn)原理：.方法與步驟方法與步驟1.1.抗凝劑處理溫氏分血管：抗凝劑處理溫氏分血管：草酸鹽抗凝劑的配制：草酸鉀草酸鹽抗凝劑的配制：草酸鉀0.80.8克，草克，草酸銨酸銨1.21.2克，再加蒸餾水至克，再加蒸餾水至100100毫升。每毫升。每1 1毫升血液可用毫升血液可用0.10.1毫升上述溶液。毫升上述溶液。吸取混合草酸鹽抗凝劑溶液，置于溫氏分吸取混合草酸鹽抗凝劑溶液，置于溫

5、氏分血管內(nèi)，并使該抗凝劑均勻分布于小試管血管內(nèi)，并使該抗凝劑均勻分布于小試管內(nèi)壁上，內(nèi)壁上，60608080烘箱內(nèi)烘干備用。烘箱內(nèi)烘干備用。 .2. 2. 采血：采血：將血液緩緩注射于有抗凝劑的試管中，用將血液緩緩注射于有抗凝劑的試管中，用拇指堵住管口，倒轉(zhuǎn)試管兩、三次，使拇指堵住管口，倒轉(zhuǎn)試管兩、三次，使血液與抗凝劑混合。血液與抗凝劑混合。.3.3.離心：離心：用長(zhǎng)頸滴管吸取試管內(nèi)的抗凝血，將用長(zhǎng)頸滴管吸取試管內(nèi)的抗凝血，將滴管插入溫氏分管的底部，沿管壁將抗凝血滴管插入溫氏分管的底部，沿管壁將抗凝血準(zhǔn)確加到分血管刻度準(zhǔn)確加到分血管刻度1010厘米處。注意不要有厘米處。注意不要有氣泡。將溫氏分

6、血管配平后放入離心機(jī)中，氣泡。將溫氏分血管配平后放入離心機(jī)中，30003000轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)/ /分鐘離心分鐘離心3030分鐘。分鐘。4.4.讀數(shù)：讀數(shù)：取出分血管，直接讀數(shù)。取出分血管，直接讀數(shù)。.討論：影響比容測(cè)定的因素是什么？在那些影響比容測(cè)定的因素是什么？在那些情況下紅細(xì)胞的比容明顯增加？情況下紅細(xì)胞的比容明顯增加？.三.血紅蛋白含量的測(cè)定目的：了解和掌握比色法測(cè)定家兔血目的：了解和掌握比色法測(cè)定家兔血 紅蛋白的含量紅蛋白的含量.原理：u在一定量的血液中加入少許鹽酸，酸不在一定量的血液中加入少許鹽酸，酸不僅破壞紅細(xì)胞膜，且將紅細(xì)胞內(nèi)的亞鐵血僅破壞紅細(xì)胞膜，且將紅細(xì)胞內(nèi)的亞鐵血紅素轉(zhuǎn)變成高鐵血紅素

7、，后者呈較穩(wěn)定的紅素轉(zhuǎn)變成高鐵血紅素，后者呈較穩(wěn)定的棕色。棕色。u將其用蒸餾水稀釋后與血紅蛋白計(jì)的標(biāo)將其用蒸餾水稀釋后與血紅蛋白計(jì)的標(biāo)準(zhǔn)比色板進(jìn)行目測(cè)比色，即得每準(zhǔn)比色板進(jìn)行目測(cè)比色，即得每100ml100ml血液血液所含的血紅蛋白的克數(shù)。所含的血紅蛋白的克數(shù)。.方法與步驟：方法與步驟：1.1.加鹽酸：加鹽酸：滴加滴加0.1mol/L0.1mol/L鹽酸溶液至測(cè)定管刻度鹽酸溶液至測(cè)定管刻度“2”2”或或“10%”10%”處。處。 2.2.采血與滴加血液：采血與滴加血液：用吸血管吸血至刻度用吸血管吸血至刻度2020立方毫立方毫米處；不能有氣泡，反復(fù)吹洗幾次。玻棒將血液米處；不能有氣泡，反復(fù)吹洗幾

8、次。玻棒將血液和鹽酸混勻，放置分鐘。和鹽酸混勻，放置分鐘。3.3.滴加蒸餾水：滴加蒸餾水：逐滴滴加，然后搖勻，觀(guān)察顏色，逐滴滴加，然后搖勻，觀(guān)察顏色，直至比色箱中液體顏色與標(biāo)準(zhǔn)比色板的顏色相同。直至比色箱中液體顏色與標(biāo)準(zhǔn)比色板的顏色相同。4.4.讀數(shù)：讀數(shù)：讀取測(cè)定管上液面的讀數(shù)即為讀取測(cè)定管上液面的讀數(shù)即為100ml100ml血液血液中血紅蛋白的克數(shù)。中血紅蛋白的克數(shù)。.注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：血液與鹽酸作用時(shí)間：血液與鹽酸作用時(shí)間：10min10min蒸餾水逐滴滴加蒸餾水逐滴滴加做三次，取平均值做三次，取平均值及時(shí)清洗吸血管：吸取蒸餾水沖洗幾次，及時(shí)清洗吸血管：吸取蒸餾水沖洗幾次，吸取酒精沖洗

9、幾次。吸取酒精沖洗幾次。.討論：討論：影響血紅蛋白含量的主要因素是什么？影響血紅蛋白含量的主要因素是什么？.四.血紅蛋白含量的測(cè)定目的：目的：了解紅細(xì)胞、白細(xì)胞計(jì)數(shù)的原理，學(xué)了解紅細(xì)胞、白細(xì)胞計(jì)數(shù)的原理，學(xué)習(xí)人工計(jì)數(shù)紅白細(xì)胞的方法。習(xí)人工計(jì)數(shù)紅白細(xì)胞的方法。.實(shí)驗(yàn)原理：實(shí)驗(yàn)原理：一定量的血液稀釋后，置于血細(xì)胞計(jì)數(shù)室內(nèi)，一定量的血液稀釋后，置于血細(xì)胞計(jì)數(shù)室內(nèi)，計(jì)算一定體積的血細(xì)胞數(shù)，然后在換算成計(jì)算一定體積的血細(xì)胞數(shù)，然后在換算成每立方毫米或血液中的血細(xì)胞數(shù)。每立方毫米或血液中的血細(xì)胞數(shù)。.血球記數(shù)板構(gòu)造：血球記數(shù)板構(gòu)造：兩個(gè)計(jì)數(shù)室，每室分為兩個(gè)計(jì)數(shù)室，每室分為9 9個(gè)大格。格與蓋玻片的個(gè)大格。

10、格與蓋玻片的距離為距離為0.1mm0.1mm，每大格邊長(zhǎng)為，每大格邊長(zhǎng)為1mm1mm，面積為，面積為1mm1mm2 2，體積為體積為0.1mm0.1mm3 3。四角的。四角的4 4個(gè)大方格分為個(gè)大方格分為1616個(gè)中方個(gè)中方格，用作白細(xì)胞計(jì)數(shù)。格，用作白細(xì)胞計(jì)數(shù)。中央大方格被分為中央大方格被分為2525個(gè)中方格，每個(gè)中方格邊長(zhǎng)個(gè)中方格，每個(gè)中方格邊長(zhǎng)為為0.2mm0.2mm，面積為，面積為0.04 mm0.04 mm2 2，體積為，體積為0.004mm0.004mm3 3。每。每個(gè)中方格又分為個(gè)中方格又分為1616個(gè)小方格，中央大方格四角的個(gè)小方格，中央大方格四角的中方格和中央的中方格用作紅細(xì)

11、胞計(jì)數(shù)。中方格和中央的中方格用作紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。.方法與步驟方法與步驟血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的準(zhǔn)備：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的準(zhǔn)備：計(jì)數(shù)室只能用自計(jì)數(shù)室只能用自來(lái)水和蒸餾水沖洗，然后以絲巾輕輕擦干，來(lái)水和蒸餾水沖洗，然后以絲巾輕輕擦干，切不可用酒精和乙醚洗滌。洗滌完畢后，切不可用酒精和乙醚洗滌。洗滌完畢后，放入低倍顯微鏡下觀(guān)察其構(gòu)造。放入低倍顯微鏡下觀(guān)察其構(gòu)造。.采血及稀釋?zhuān)翰裳跋♂專(zhuān)海? 1）配制稀釋液：用移液管吸?。┡渲葡♂屢海河靡埔汗芪?.99ml1.99ml紅細(xì)胞稀釋液（生紅細(xì)胞稀釋液（生理鹽水）放入理鹽水）放入1 1號(hào)試管，用移液管吸取號(hào)試管，用移液管吸取0.38ml0.38ml白細(xì)胞稀釋白細(xì)胞稀釋液（液

12、（2%2%醋酸加少量龍膽紫）放入醋酸加少量龍膽紫）放入2 2號(hào)試管。號(hào)試管。（2 2）采血：用吸血管吸取血液）采血：用吸血管吸取血液1010ll放入放入1 1試管，用吸血管試管，用吸血管吸取血液吸取血液2020l l放入放入2 2號(hào)試管，搖勻試管，使血液與稀釋號(hào)試管，搖勻試管，使血液與稀釋液充分混勻。液充分混勻。計(jì)數(shù)：蓋玻片放好后，滴半滴于計(jì)數(shù)室與蓋玻片交界處，計(jì)數(shù)：蓋玻片放好后，滴半滴于計(jì)數(shù)室與蓋玻片交界處，稀釋血液可自動(dòng)均勻滲入計(jì)數(shù)室。放置稀釋血液可自動(dòng)均勻滲入計(jì)數(shù)室。放置1-21-2分鐘，待細(xì)胞分鐘，待細(xì)胞下沉后進(jìn)行計(jì)數(shù)。下沉后進(jìn)行計(jì)數(shù)。.記數(shù)原則記數(shù)原則計(jì)數(shù)紅細(xì)胞：將計(jì)數(shù)室中央的大方格

13、置于視野計(jì)數(shù)紅細(xì)胞：將計(jì)數(shù)室中央的大方格置于視野內(nèi)，轉(zhuǎn)用內(nèi)，轉(zhuǎn)用1010倍物鏡下計(jì)數(shù)倍物鏡下計(jì)數(shù)5 5個(gè)中方格（四角和中個(gè)中方格（四角和中央）內(nèi)的紅細(xì)胞總數(shù)。央）內(nèi)的紅細(xì)胞總數(shù)。計(jì)數(shù)時(shí)必須遵循一定方向逐格進(jìn)行，如將上側(cè)計(jì)數(shù)時(shí)必須遵循一定方向逐格進(jìn)行，如將上側(cè)和左側(cè)線(xiàn)上的紅細(xì)胞數(shù)入，則勿將下側(cè)和右側(cè)和左側(cè)線(xiàn)上的紅細(xì)胞數(shù)入，則勿將下側(cè)和右側(cè)線(xiàn)上的數(shù)入。線(xiàn)上的數(shù)入。計(jì)數(shù)白細(xì)胞：計(jì)數(shù)白細(xì)胞：1010倍物鏡下計(jì)數(shù)四角四個(gè)大方格倍物鏡下計(jì)數(shù)四角四個(gè)大方格中所有的白細(xì)胞總數(shù)。中所有的白細(xì)胞總數(shù)。 .紅細(xì)胞數(shù)換算紅細(xì)胞數(shù)換算紅細(xì)胞數(shù)紅細(xì)胞數(shù)/ L/ L =N=N200200101010106 625255 5

14、-1-1=N=N10101010其中：其中：N N：5 5個(gè)中方格數(shù)的紅細(xì)胞總數(shù)個(gè)中方格數(shù)的紅細(xì)胞總數(shù)25255 5-1-1：5 5個(gè)中方格換算為個(gè)中方格換算為1 1個(gè)大方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)個(gè)大方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)1010：1 1個(gè)大方格換算為個(gè)大方格換算為1 1微升血液的紅細(xì)胞數(shù)微升血液的紅細(xì)胞數(shù)10106 6： 1 1微升換算為微升換算為1 1升升200200：血液稀釋倍數(shù)：血液稀釋倍數(shù).白細(xì)胞數(shù)換算白細(xì)胞數(shù)換算白細(xì)胞數(shù)白細(xì)胞數(shù)/ L/ L =N=N4 4-1-12020101010106 6=N=N5 510107 7其中：其中：N N：4 4個(gè)大方格數(shù)的白細(xì)胞總數(shù)個(gè)大方格數(shù)的白細(xì)胞總數(shù)N N4 4

15、-1-1：1 1個(gè)大方格數(shù)的白細(xì)胞總數(shù)個(gè)大方格數(shù)的白細(xì)胞總數(shù)1010：1 1個(gè)大方格換算為個(gè)大方格換算為1 1微升血液內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)微升血液內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)10106 6： 1 1微升換算為微升換算為1 1升升2020：血液稀釋倍數(shù)：血液稀釋倍數(shù).注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)1 1 計(jì)數(shù)室內(nèi)細(xì)胞分布要均勻。計(jì)數(shù)紅細(xì)胞時(shí)如果計(jì)數(shù)室內(nèi)細(xì)胞分布要均勻。計(jì)數(shù)紅細(xì)胞時(shí)如果發(fā)現(xiàn)各中方格的紅細(xì)胞數(shù)目相差發(fā)現(xiàn)各中方格的紅細(xì)胞數(shù)目相差2020個(gè)以上，或計(jì)個(gè)以上，或計(jì)數(shù)白細(xì)胞時(shí)發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞數(shù)目相差數(shù)白細(xì)胞時(shí)發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞數(shù)目相差1010個(gè)以上，表示個(gè)以上，表示血細(xì)胞分布不均勻，必須將稀釋液搖勻后重新計(jì)血細(xì)胞分布不均勻，必須將稀釋液搖勻后重新計(jì)數(shù)。數(shù)。2 2 混懸液滴入計(jì)數(shù)室時(shí)，液量要適當(dāng)。過(guò)多會(huì)溢混懸液滴入計(jì)數(shù)室時(shí)，液量要適當(dāng)。過(guò)多會(huì)溢出并流入兩側(cè)深槽內(nèi)，使蓋玻片浮起。