食用菌菌種的制作與培養(yǎng)精編版

1、食用菌菌種的制作與培養(yǎng)-一、母種制作（一）母種培養(yǎng)基制作1. 母種培養(yǎng)基的種類母種是菌種生產(chǎn)的關(guān)鍵，要求純度高，不能混生雜菌，同時(shí)母種的菌絲體較為纖細(xì)，分解培養(yǎng)料的能力較弱。因此，母種菌絲體需要培養(yǎng)在營養(yǎng)豐富，易被吸收，表面光滑易于鑒別有無雜菌感染的瓊脂培養(yǎng)基上。適合母種菌絲生長的瓊脂培養(yǎng)基種類很多，常用的有下列幾種：（1）馬鈴薯 葡萄糖 瓊脂培養(yǎng)基馬鈴薯（去皮）200 克 瓊脂20 克 葡萄糖（或蔗糖）20 克水 1000 毫升（2）麥芽汁 葡萄糖 瓊脂培養(yǎng)基干麥芽250 克瓊脂 1520 克 葡萄糖（或蔗糖）10克水 1000 毫升（3）胡蘿卜 葡萄糖 瓊脂培養(yǎng)基胡蘿卜 100 克瓊脂 2

2、0 克 葡萄糖（或蔗糖） 20 克水1000 毫升（4）蘑菇汁 葡萄糖一瓊脂培養(yǎng)基（適用于蘑菇）鮮蘑菇250 克瓊脂 20克葡萄糖（或蔗糖）20克水 1000 毫升（5）蛋白胨 葡萄糖 瓊脂培養(yǎng)基蛋白胨2 克葡萄糖 20 克磷酸氫二鉀 2 克維生素 B1（硫胺素）0.5 毫克 磷酸二氫鉀0.5 克 瓊脂 18克硫酸鎂 0.5 克 水 l000 毫升2. 母種培養(yǎng)基的制法以最常用的馬鈴薯 葡萄糖 瓊脂培養(yǎng)基的制法為例介紹如下：先將馬鈴薯去皮，洗滌，切成小塊加水1000 毫升，煮沸 1520 分鐘，取雙層紗布過濾，取其濾液，加入瓊脂和葡萄糖（或蔗糖），用文火加熱使其溶化，最后補(bǔ)足水分，使其容量仍為

3、 1000 毫升。趁熱分裝于試管中，裝量約為試管長度的 1/5 左右，裝管時(shí)要注意不使培養(yǎng)基沾污試管壁和試管口。試管口塞上大小合適的棉花塞，塞入試管口內(nèi)的長度為棉塞總長的3/5 。塞好棉塞后，每101支作一捆，用牛皮紙包扎好后，置鐵絲網(wǎng)籠中，然后進(jìn)行高壓滅菌。如作為孢子分離用，則將培養(yǎng)基分裝于三角瓶或培養(yǎng)皿中，然后高壓滅菌。3. 母種培養(yǎng)基的消毒滅菌：母種培養(yǎng)基通常用高壓蒸汽滅菌鍋來消毒滅菌，常用的高壓蒸汽滅菌鍋有直式、臥式和手提式三種。將配制好后的母種培養(yǎng)基移入上述任何一種高壓蒸汽滅菌鍋中，在 15 公斤 / 平方厘米壓力下，滅菌 30 分鐘。高壓蒸汽滅菌主要是依靠提高蒸汽的溫度來滅菌的，因

4、此滅菌時(shí)，應(yīng)將鍋內(nèi)的冷空氣全部排除。否則，盡管壓力表上的壓力已達(dá)到要求，然而，滅菌鍋內(nèi)的溫度卻未達(dá)到所需的溫度。排除冷空氣的方法是加熱后當(dāng)壓力表上指針上升到 0.5 公斤 / 平方厘米時(shí)，打開排氣閥，放氣至指針仍回到 “零”的位置。滅菌的時(shí)間是以排除冷空氣后，壓力回升到 1.5 公斤 / 平方厘米時(shí)才開始計(jì)算。每次滅菌之后，要等壓力降到 “零”時(shí)，才打開鍋蓋，否則，滅菌的液體會(huì)因突然減壓而外溢，玻璃器皿也會(huì)因突然降溫而破裂。高壓滅菌后將試管取出排成斜面?zhèn)溆?。（二）母種分離材料的選擇1. 子實(shí)體的選擇無論是用作孢子分離或組織分離的子實(shí)體，都要從產(chǎn)量高，長勢好，適應(yīng)性強(qiáng)，無雜菌蟲害的群體中，選擇朵

5、大，生長健壯的單生子實(shí)體作為分離的材料。選作分離的子實(shí)體，成熟度要適當(dāng)，如蘑菇、草菇具有菌膜，最好選菌膜將破而未破的成熟度，這種子實(shí)體發(fā)育已成熟，子實(shí)層又未受污染，因此能很快散出大量的無菌孢子。對(duì)沒有菌膜或菌膜自幼已破的食用菌，如香菇、平菇等，則以選取八分熟，正在釋放孢子的個(gè)體為最好；因?yàn)閯倧膿?dān)子彈射出來的孢子基本上也是無菌的。2. 菇木和耳本的選擇木生食用菌如香菇、銀耳、黑木耳等，可以從它們生長的基質(zhì)，即菇木和耳木作為分離的材料。選擇時(shí)，應(yīng)從野生或人工栽培場所挑選子實(shí)體生長健壯，朵大，長勢好，菌絲在段木中發(fā)育旺盛，材質(zhì)較為結(jié)實(shí)，尚未腐爛，一般是接種后一年內(nèi)已出菇、出耳而無雜菌害蟲感染的幼齡菇

6、木或耳木為最好。采去子實(shí)體后，截取適當(dāng)部位，掛于通風(fēng)處風(fēng)干后，供分離時(shí)用。（三）母種的分離方法1. 孢子分離法是利用食用菌的有性孢子或無性孢子，萌發(fā)成菌絲，獲得細(xì)菌種的一種方法。按分離時(shí)挑取孢子的數(shù)目不同，又分為單孢子分離法和多孢子分離法兩種。蘑菇、草菇等由于孢子沒有2性的區(qū)別，采用單孢子分離獲得純菌種，有結(jié)實(shí)能力，而其它食用菌如香菇、銀耳、黑木耳等由于孢子有性別之分，單孢子分離得到的菌絲不能結(jié)實(shí)，所以，只在育種上采用，生產(chǎn)上很少采用多孢子分離法，是把許多孢子接種于同一培養(yǎng)基上，讓它們萌發(fā)，自然交配而獲得純種。2. 組織分離法是用食用菌幼嫩的組織塊直接分離培養(yǎng)成純菌種的方法。選用的子實(shí)體先經(jīng)

7、0.1 開汞水或 70酒精表面消毒后。用無菌水沖洗并用無菌紗布擦去表面水分。分離香菇時(shí)用無菌解剖刀自菌柄處切開少許，再用手將子實(shí)體掰開為二，在菌蓋與菌褶交界處，切取0.3 0.4 立方厘米的一小塊菌肉，移放在斜面培養(yǎng)基中央。如已開傘的種菇、則選菌蓋與菌柄交界處的菌肉。分離草菇時(shí)，用無菌解剖刀把菌蕾縱切少許；再用手把菌蓋輕輕剝開，在菌柄上方和菌蓋交界處，切取 15 毫米的細(xì)塊，接在斜面培養(yǎng)基中。如種菇已受雨淋，吸水較多，應(yīng)取菌褶作為接種材料。組織分離后將試管外面放在恒溫箱中培養(yǎng)。待組織塊周圍萌發(fā)出菌絲，并向培養(yǎng)基蔓延生長后，再挑取生長健壯的菌絲進(jìn)行轉(zhuǎn)管培養(yǎng)。組織分離法操作簡便，又不易帶入雜菌，容

8、易獲得純菌種。但對(duì)銀耳、黑木耳等膠質(zhì)菌；因其子實(shí)體中菌絲的含量極少，如用組織分離培養(yǎng)，則往往不易成功。3. 基內(nèi)菌絲分離法是利用食用菌生長的基質(zhì)一菇木和耳木作為分離材料，而培養(yǎng)成純菌種的方法。特別是銀耳、黑木耳采用這種方法，成功率高，性狀也較穩(wěn)定，為生產(chǎn)上經(jīng)常采用的方法。具體做法是從野生或人工栽培的場所，選擇子實(shí)體發(fā)生早，生長旺盛，朵大，無病蟲害的菇木或耳木，鋸取一小段，讓其充分風(fēng)干后備用。分離時(shí)如為香菇的菇木，先鋸取 1 厘米的薄片，切去四周用 0.1 升汞水表面消毒1 2 分鐘，用無菌刀將其劈成小木片，再切成 0.5 平方厘米的小木條，移入試管斜面培養(yǎng)基上，經(jīng) 2527培養(yǎng)，菌絲生長后，再

9、行轉(zhuǎn)管培養(yǎng)。分離時(shí)如為銀耳的耳木，先從長有子實(shí)體部位，鋸取12 厘米厚的木片，剔除樹皮及耳基，再用 0.1 升汞水或 75酒精涂擦表面消毒，通過耳基著生處，把耳木縱切為二，用無菌刀在耳基著生處，削取極小的木屑，移入試管斜面培養(yǎng)基上。接種后放在 2028的溫度下培養(yǎng)，數(shù)天后接種塊的周圍開始長出纖細(xì)的白色菌絲，延伸到培養(yǎng)基后，培養(yǎng)基的顏色逐漸變黃轉(zhuǎn)黑，表面出現(xiàn)淺灰色斑紋，這就是羽毛狀菌絲。一星期后，小木屑上出現(xiàn)白色短絨毛狀菌絲，同時(shí)分泌白色或淡黃色水珠，這就是銀耳的發(fā)育菌絲。挑3取銀耳發(fā)育菌絲和少許羽毛狀菌絲轉(zhuǎn)接于新的斜面培養(yǎng)基上進(jìn)行擴(kuò)接，一星期后，菌絲長滿試管，即成為母種。在實(shí)際分離中往往不可能

10、得到銀耳菌絲與羽毛狀菌絲兩者兼有的母種?；蚣?yōu)殂y耳菌絲；或純?yōu)橛鹈珷罹z；或酵母狀分生孢子，還有相當(dāng)數(shù)量是感染雜菌或不長任何菌絲的。純銀耳菌絲和純羽毛狀菌絲，經(jīng)適當(dāng)配合后，就可應(yīng)用于生產(chǎn)。黑木耳的耳木分離，其操作方法與銀耳大致相同，但不象銀耳有多種類型的菌絲。耳木接入試管后，一般放在2228培養(yǎng) 23 天，可見菌絲長出。選生長健壯、清楚、兩端展整齊的，進(jìn)行轉(zhuǎn)管純化 23 次培育成母種。在培養(yǎng)過程中，有時(shí)培養(yǎng)基背面會(huì)出現(xiàn)乳白色或淡褐色，這是正?，F(xiàn)象。（四）母種的擴(kuò)大培養(yǎng)從分離獲得或外地引入的優(yōu)良母種，由于數(shù)量有限不能滿足生產(chǎn)上的需要，應(yīng)進(jìn)行擴(kuò)大繁殖培養(yǎng)。其方法是以無菌操作把斜面培養(yǎng)基連同菌絲體切

11、成短米粒大的小塊，移接到新的斜面培養(yǎng)基上，在適溫條件下培養(yǎng)，待菌絲長滿斜面時(shí)即成。一般每支母種試管可擴(kuò)大繁殖 6080 支新管。擴(kuò)大母種第一次應(yīng)多些，以避免多次轉(zhuǎn)管，造成菌絲生活力降低，結(jié)菇（耳）少，影響產(chǎn)量和質(zhì)量。一般要求轉(zhuǎn)管不要超過五次。二、原種的制作（一）原種常用培養(yǎng)基1. 原種培養(yǎng)基的種類（1）木屑 - 米糠培養(yǎng)基（適用于各種食用菌）木屑 78%、米糠或麩皮 20%、白糖 1%、石膏 1%、水適量。（2）木屑培養(yǎng)基（適用于木耳、香菇）木屑 98%、葡萄糖 1%、尿素 0.3%、硫酸鎂 0.05%、磷酸二氫鉀0.2%、高錳酸鉀 0.05%、碳酸鈣 0.4%、水適量。（3）棉籽殼培養(yǎng)基（適

12、用于多種食用菌，如平菇、猴頭）棉籽殼 100%、水適量。（4）棉籽殼 - 木屑培養(yǎng)基（適用于木耳、香菇、銀耳、金針菇、靈芝、猴頭等）棉籽殼 70%、木屑 28%、糖 1%、石膏 1%，水適量。（5）棉籽殼 - 麩皮培養(yǎng)基（適用于多種食用菌）棉籽殼 80%、麩皮 18%、糖 1%、石膏 1%，水適量。（6）玉米芯 - 麩皮（米糠）培養(yǎng)基（適用于平菇、木耳、猴頭等）玉米芯 78%、麩皮（米糠） 20%、過磷酸鈣 1%、石膏 1%，水適量。4（7）稻草（麥麩） - 麩皮培養(yǎng)基（適用于平菇、草菇、鳳尾菇等）干稻草（麥草） 78%、麩皮 20%、過磷酸鈣 1%、石膏 1%、水適量。（8）草糞培養(yǎng)基（適用

13、于雙孢蘑菇、草菇等）稻草或麥麩 20，糞肥（干） 30水適量?，F(xiàn)將草、糞、石膏混合均勻，加適量水發(fā)酵好后，取稻草或麥秸切成的長度，調(diào)整水分，裝瓶滅菌。（9）麥粒種培養(yǎng)基（適用于平菇、猴頭、白靈菇、杏鮑菇、金針菇等）小麥 1000、白糖 10、石膏 10。先將小麥浸泡 4，加熱煮沸 2030，煮時(shí)加白糖，煮至麥粒熟而不開花，過濾后，攤開晾曬。不粘手時(shí)拌入石膏粉，即可裝瓶滅菌。（二）原種培養(yǎng)基的制作方法首先結(jié)合當(dāng)?shù)卦锨闆r，選適宜的培養(yǎng)料。根據(jù)上述配方，凡加糖的，應(yīng)先將糖溶于水中，其余原料混合均勻后，用糖水拌料。拌均勻后，培養(yǎng)料的含水量用手測，即手握培養(yǎng)料，指縫間有水滲出，但不滴為宜（料的含水量達(dá)

14、60 70）。含草糞的培養(yǎng)料，最好經(jīng)發(fā)酵出處理，料的調(diào)為6.5 8. 然后把培養(yǎng)料裝入已洗凈的菌種瓶、罐頭瓶或制菌種用的塑料袋內(nèi)，裝的松緊適度，上下一致。裝料高度以齊瓶肩為宜。裝好后，即可裝鍋滅菌。滅菌時(shí)由于培養(yǎng)基體積較大，數(shù)量較多，瓶壁又厚，故滅菌時(shí)間要適當(dāng)延長，在 0.15MPa的壓力下滅 1.5 2，可達(dá)到滅菌目的。也可用常壓滅菌鍋進(jìn)行滅菌 810，達(dá)到滅菌效果。三、栽培種的制作栽培種培養(yǎng)基配方的配制，制作方法與滅菌方法與原種培養(yǎng)基相同。但最好不用麥粒種，因栽培用量大。另外用常壓滅菌鍋進(jìn)行滅菌，也不易滅徹底。做栽培種培養(yǎng)基所用的容器可采用制種用的低壓聚乙烯或聚丙烯塑料袋（簡稱菌種袋），也

15、可以采用瓶裝。但在生產(chǎn)上多采用菌種袋，袋的大小一般為1518cm×3035cm。裝培養(yǎng)料時(shí)，盡量裝得松緊適度，四周緊中間松，裝入量占袋子 2/3 為宜。袋口可用塑料圈，也可用繩子直接扎住，但不要扎的過緊，以防滅菌時(shí)爆袋。四、食用菌接種與培養(yǎng)技術(shù)（一）、食用菌的接種技術(shù)接種是食用菌制種工作中的一項(xiàng)最基本的操作，無論是食用菌的傳代，分離、鑒定還是進(jìn)行食用菌的形態(tài)、生理等方面的研究都5離不開接種操作。接種的關(guān)鍵是嚴(yán)格無菌操作，根據(jù)不同的目的、不同的菌類及同一菌類的不同菌種容器，接種方法都有所區(qū)別，但在無菌條件進(jìn)行嚴(yán)格的無菌操作這一點(diǎn)是必須共同遵守的。. 無菌操作規(guī)程（）接種前對(duì)接種箱（室）

16、進(jìn)行清潔消毒，準(zhǔn)備好接種工具。將待接的母種培養(yǎng)基或原種培養(yǎng)基或栽培種培養(yǎng)基放入接種箱內(nèi)或室內(nèi)，用藥物熏蒸消毒，有條件也可用紫外線燈、凈化設(shè)備消毒滅菌；（）換好清潔的工作衣，取少許藥棉，蘸上 75%的酒精擦拭雙手，菌種容器表面，工作臺(tái)面及接種工具；（）點(diǎn)然酒精燈開始接種操作。酒精燈火焰周圍 8cm半徑范圍的空間為無菌區(qū)，接種操作必須在無菌區(qū)內(nèi)進(jìn)行。 . 接種方法（）母種接種按上述要求做好無菌操作準(zhǔn)備后，進(jìn)行接種。用 75%酒精棉球涂擦工作人員的手和菌種試管外壁進(jìn)行消毒，放入接種箱或接種室內(nèi)；用酒精棉涂擦接種針，再在酒精燈上燒紅；左手排握著菌種和斜面試管，右手握持接種針，用中指與無名指、無名指與小

17、指；分別把菌種和斜面培養(yǎng)基上的試管棉塞拔開；用接種鉤伸入菌種管割取菌種，不宜過大，米粒大小，迅速轉(zhuǎn)接入斜面培養(yǎng)基中央；將試管口在酒精燈火焰上灼燒一下；塞好試管棉塞；接上菌種的斜面試管貼上標(biāo)簽，注明菌名和接種日期等。整個(gè)轉(zhuǎn)管過程應(yīng)在酒精燈火焰 8-10c 范圍的無菌區(qū)進(jìn)行。轉(zhuǎn)接后的試管，放入適宜的溫度下培養(yǎng)至長滿斜面。（）原種接種要求做好無菌操作準(zhǔn)備后，進(jìn)行接種。a. 將滅過菌的菌種瓶、母種和接種鉤等一起放入接種箱消毒后開始接種。母種接原種，一般一支斜面試管可接原種 46 瓶。接種時(shí)嚴(yán)格按無菌操作規(guī)程。雙手要用 75%酒精棉球表面消毒，拔開母種棉塞，試管口用酒精燈火焰封口。接種鉤要經(jīng)過火焰滅菌。

18、然后將母種（菌絲）連同培養(yǎng)基用接種鉤分成 46 段，每一段母種迅速轉(zhuǎn)移到原種培養(yǎng)基上。b. 接完種后，將待培養(yǎng)的菌種瓶移入培養(yǎng)箱或光線暗淡的培養(yǎng)室，平臥或立在瓶架上發(fā)菌，根據(jù)各種菌類的生長要求，調(diào)整適6宜的溫度。培養(yǎng)初期逐日觀察菌絲定植生長和雜菌污染情況。如接種 5 天仍未見菌絲萌發(fā)則應(yīng)及時(shí)補(bǔ)接母種，如發(fā)現(xiàn)雜菌應(yīng)及時(shí)清除。同時(shí)要經(jīng)常調(diào)瓶的位置，以利于菌絲生長一致，當(dāng)菌長滿瓶后及時(shí)使用。若暫時(shí)不用刻放低溫、干燥、避光的環(huán)境下短期保存，一般棉子皮原種 25 天左右長滿瓶，麥粒原種 15 天左右。（）栽培種接種要求做好無菌操作準(zhǔn)備后，進(jìn)行接種。a. 裝箱將滅過菌的栽培袋（瓶），接種用的器具，原種等放

19、入接種箱中。將待接的栽培袋（瓶）置于接種箱一端，袋橫臥碼好，瓶立碼。然后進(jìn)行空間消毒。b. 接種原種瓶口應(yīng)用 75%酒精棉球擦拭，進(jìn)行瓶口消毒。然后用火焰滅過菌的接種鉤清理原種表皮的均被，再將長滿菌絲的培養(yǎng)料挖成粒（塊）狀。在酒精燈火焰旁，解開袋繩結(jié)，用接種鉤將原種顆粒（塊）移植到栽培種的培養(yǎng)料袋（瓶）內(nèi)。一般每瓶原種可接3550 袋（瓶）c. 培養(yǎng)接完種后，將待培養(yǎng)的菌種袋（瓶）置培養(yǎng)室發(fā)菌，在培養(yǎng)過程中定期向地面噴灑化學(xué)消毒藥品，防止空氣污染。接種后 310天經(jīng)常觀察菌絲生長情況，菌種 30 天左右即可長滿。菌絲長滿一周后，即可栽培。. 接種注意事項(xiàng)（）接種前要準(zhǔn)備一些無菌棉塞，一起放入無

20、菌室（箱內(nèi)），以便在所用棉塞受潮時(shí)更換；（）接種時(shí)切勿使試管口、瓶口向上，切勿離開酒精燈火焰的無菌區(qū)進(jìn)行；人在室內(nèi)盡量少走動(dòng)，減少空氣流動(dòng)揚(yáng)起的灰塵、減少污染；（）接種時(shí)留下的污物，如用過的酒精棉、菌種碎屑等要及時(shí)清除，以免污染；（）如一次接種不同菌種時(shí)，要注意做好標(biāo)記，以免搞混。（二）培養(yǎng)技術(shù)接種后的原種或栽培種根據(jù)不同食用菌菌絲發(fā)育的最適溫度進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng) 23 天后，菌絲開始生長時(shí)，要每天定期檢查，如發(fā)現(xiàn)黃、綠、橘紅、黑色雜菌時(shí)，要及時(shí)揀出清理。尤其是塑料袋菌種，檢查工作到菌絲長滿為止。培養(yǎng)室切忌陽光直射，但不要完全黑暗；注意通風(fēng)換氣，室內(nèi)保持清潔，空氣相對(duì)濕度不要超過65%；同時(shí)菌種瓶

21、，袋不要堆疊過高，瓶間要有空隙，以防溫度過7高造成菌絲衰老，活力降低。特別是對(duì)加溫的培養(yǎng)室要注意：一要保持室內(nèi)溫度穩(wěn)定，因在溫差較大的情況（特別是母種培養(yǎng)）會(huì)形成冷凝水，而使菌絲倒伏變黃。有條件的話，可以根據(jù)菇類的菌絲生長對(duì)溫度的要求，按品種分開放在不同的溫度培養(yǎng)室（箱）內(nèi)培養(yǎng)。同時(shí)要注意經(jīng)常調(diào)換原種、栽培種排放的位置以使同一批菌種菌絲生長一致。二要注意通風(fēng)換氣，以免室內(nèi)二氧化碳濃度過高影響菌絲生長。五、優(yōu)質(zhì)菌種應(yīng)具備的條件及目測標(biāo)準(zhǔn)（一）具備條件1. 菌絲潔白，有光澤，分支濃密，茸毛狀菌絲多，很少出現(xiàn)索狀菌絲2. 香氣很濃，烘干后也有香氣；3. 無可疑雜菌；4. 菌絲生活里強(qiáng)，具有抗逆性強(qiáng)，高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)等特點(diǎn)。（二）目測標(biāo)準(zhǔn)a. 不同母種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：1. 平菇、姬菇、金針菇、白靈菇、杏鮑菇、鮑魚菇、阿魏菇菌絲密集、潔白，爬壁力強(qiáng)，菌絲壯、旺，培養(yǎng)基無干縮、氣生菌絲不倒伏，反面觀察除接種塊點(diǎn)外無任何斑點(diǎn)、條紋或陰影；2.