X-STR及側(cè)翼序列SNPs的遺傳多態(tài)性并在特殊親緣關(guān)系及混合斑鑒定中的意義.doc

1、X-STR及側(cè)翼序列SNPs的遺傳多態(tài)性并在特殊親緣關(guān)系及混合斑鑒定中的意義目的 : 在法醫(yī)物證鑒定工作中 , 二人混合斑的個(gè)人識別與某些復(fù)雜親緣關(guān)系鑒定 ( 如母 / 子或女、父/ 女、祖母 / 孫女、同父姐 / 妹等 ) 是亟待解決的難題。 目前 ,二人混合樣品的個(gè)人識別主要采用似然率法對混合樣品的DNA分型圖譜的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析并考慮等位基因峰高或峰面積, 又可以分為無限制組合的似然率法和限制組合的似然率法。這種方法受樣品濃度和樣品混合比例的影響比較大, 另外還需要考慮結(jié)巴帶、等位基因丟失和低拷貝數(shù)模板等對混合斑分型結(jié)果造成的影響,無法實(shí)現(xiàn)對混合樣品中不同個(gè)體的同一認(rèn)定的目的。建立針對不同個(gè)體

2、分別進(jìn)行DNA分型檢驗(yàn)的方法將是根本解決混合樣品個(gè)人識別問題的關(guān)鍵。在上述復(fù)雜親緣關(guān)系鑒定中, 當(dāng)兩份樣品 X-STR分型結(jié)果有超過 50%以上等位基因相同時(shí) , 不能排除同時(shí)也不能肯定親緣關(guān)系。如能判斷兩份樣品相同的等位基因是隨機(jī)所致或是遺傳獲得, 則會(huì)極大的提高排除或肯定親緣關(guān)系的機(jī)率。X 染色體在女性為雙倍體 , 男性為單倍體。 X-STR在個(gè)人識別特別是涉及X染色體遺傳的某些復(fù)雜親緣關(guān)系鑒定中具有重要意義。本研究擬選擇包含DXS7423基因座上、下游約2000bp 的 DNA片段 , 對其進(jìn)行核苷酸序列分析, 檢測SNPs位點(diǎn)及群體分布。探討根據(jù)個(gè)體 SNPs的差異 , 應(yīng)用 PCR-

3、SSP技術(shù) , 建立針對不同個(gè)體分別進(jìn)行DNA分型的方法 , 以解決混合樣品中不同個(gè)體的同一認(rèn)定問題; 在親權(quán)關(guān)系鑒定中 , 根據(jù) X-STR基因座上、下游的SNPs位點(diǎn)的異同 , 能否在判斷兩份樣品相同的XSTR等位基因是隨機(jī)所致或是遺傳獲得方面成為依據(jù), 為某些復(fù)雜親緣關(guān)系鑒定提供新的指標(biāo) ; 調(diào)查遼寧地區(qū)滿族人群十二個(gè)X-STR基因座的遺傳多態(tài)性 , 為法醫(yī)學(xué)的個(gè)人識別和親子鑒定及群體遺傳學(xué)研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。材料與方法: 遼寧地區(qū)滿族 772 例 ( 男性 514 例 , 女性 258 例 ) 健康無關(guān)個(gè)體血液樣品 , 一個(gè)三代四口家系 ( 祖母、父親、母親、孫女) 和一個(gè)三代五口家系

4、( 祖母、父親、母親、兩個(gè)異卵雙生孫女 ),DNA 標(biāo)準(zhǔn)品 (9947A) 和滅菌去離子水分別作為陽性對照和陰性對照。采用酚氯仿方法提取基因組DNA。擴(kuò)增含有 DXS7423基因座及上、下游約 2000bp 的 DNA片段 , 通過測序獲得其SNPs位點(diǎn)的分型結(jié)果并進(jìn)行男女組間比較。 分別計(jì)算 SNPs位點(diǎn)的等位基因頻率、單倍型頻率、法醫(yī)學(xué)參數(shù)等 ; 兩兩比較 SNPs位點(diǎn)差異及 DXS7423基因座相同型別可能為隨機(jī)所致或是遺傳獲得的機(jī)率; 根據(jù) SNPs分型結(jié)果不同 , 應(yīng)用 PCR-SSP技術(shù)分別擴(kuò)增混合樣品中不同個(gè)體的DXS7423基因座。使用 Investigator ArgusX-

5、12 試劑盒調(diào)查了遼寧地區(qū)滿族人群十二個(gè)X-STR基因座的遺傳多態(tài)性 , 分別計(jì)算等位基因、單倍型頻率和法醫(yī)學(xué)參數(shù)。結(jié)果 : 在 DXS7423基因座的上、下游約2000bp 的 DNA片段內(nèi)檢出四個(gè)SNPs位點(diǎn) rs762822 、 rs546652 、rs17279108 和 rs529211, 分布符合 Hardy-Weinberg平衡 , 男性和女性中的分布無顯著性差異, 位基因頻率分別為G0.3067/A0.6933 、0.2333/G0.7667 、A0.7867/T0.2133 和 C0.7400/G0.2600 。四個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性較好 , 可以應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)個(gè)人識別和親子鑒定中。

6、利用 PCR-SSP方法可以將二男性混合樣品根據(jù) SNP分型不同而進(jìn)行區(qū)分 , 分離組分該位點(diǎn)試劑盒檢測結(jié)果一致 ,表明該方法可能用于區(qū)分混合樣品中的不同組分。根據(jù) SNPs的個(gè)體差別 , 經(jīng)兩兩比較 , 有 53.52%的可能性區(qū)分不同個(gè)體。 推測根據(jù)此原理 , 可篩選到足夠的 X-STR,經(jīng)復(fù)合擴(kuò)增可能實(shí)現(xiàn)對混合樣品不同個(gè)體的同一認(rèn)定。家系檢驗(yàn)結(jié)果比較顯示, 母/ 子或女、父 / 女、祖母 / 孫女、同父姐 /妹對在相同 STR等位基因側(cè)翼序列均有相同的SNPs,支持此等位基因是由遺傳獲得的。將可能提供子代相同STR等位基因的無關(guān)女性和無關(guān)男性作為嫌疑母( 或祖母 ) 或嫌疑父 , 兩兩比較 STR側(cè)翼序列 SNPs,有 46.67%的可能性排除父女之間親緣關(guān)系 , 有 11.36%的可能性排除母 ( 或祖母、姐妹 ) 女之間親緣關(guān)系。 772 例個(gè)體十二個(gè) X-STR基因座的多態(tài)性分布符合 Hardy-Weinberg 平衡 , 具有很高的個(gè)人識別能力及父權(quán)排除能力。 結(jié)論 : 根據(jù) X-STR基因座側(cè)翼序列的 SNP位點(diǎn)的差別 , 應(yīng)用PCR-SSP方法可以對已知嫌疑人的混合樣品進(jìn)行區(qū)分, 獲得個(gè)體的 X-ST