蕓香苷和槲皮素

1、槐花米中蕓香甘提取及棚皮素的分離與檢識適用對象藥學(xué)專業(yè)實(shí)驗(yàn)學(xué)時18學(xué)時、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)黃酮類化合物的提取、分離和檢識，通過實(shí)驗(yàn)要求：1）通過蕓香菩提取與精制，掌握沸水提取黃酮類化合物的原理和操作。2）掌握由蕓香背水解制取柳皮素的方法。3）掌握黃酮甘和黃酮甘元的分離。4）掌握黃酮類化合物的主要性質(zhì)及黃酮甘、甘元和糖部分的檢識方法。二、實(shí)驗(yàn)原理由槐花中提取蕓香甘的方法很多，本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)蕓香甘在冷水和熱水中的溶解度差異的特性進(jìn)行提取和精制，或根據(jù)蕓香甘分子中具有酚羥基，顯弱酸性，能與堿成鹽而增大溶解度，以堿水為溶劑煮沸提取，其提取液加酸酸化后則蕓香甘游離析出。三、儀器設(shè)備單口園底燒瓶，冷凝管，鐵架臺，

2、燒杯，電爐，烘箱、水浴鍋、三角燒瓶，微量抽濾器，布氏漏斗，濾紙，試管，層析槽，石棉網(wǎng)，毛細(xì)管等。四、相關(guān)知識點(diǎn)槐花為豆科植物槐SophorajaponicaL.的干燥花及花蕾，主要含蕓香甘（蘆?。?，含量高達(dá)12-20%，水解生成棚皮素、葡萄糖及鼠李糖。蕓香甘（rutoside），分子式C27出。分子量610.51，淡黃色針狀結(jié)晶，mp.177178C。難溶于冷水（1：8000），略溶于熱水（1：200），溶于熱甲醇（1：7），冷甲醇（1：100），熱乙醇（1：30）,冷乙醇（1:650），難溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醛、石油酸等，易溶于毗口定及稀堿液中。棚皮素（quercetin）

3、,分子式務(wù)已。7,分子量302.23潢色針狀結(jié)晶，mp.314c（分解）。溶于熱乙聘（1:23）,冷乙醇（1：300）,可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰醋酸、毗口定等，不溶于石油醛、苯、氯仿、乙醛中,幾不溶于水。0H0蕓香苗R:葡萄糖-鼠李糖棚皮素R=H五、實(shí)驗(yàn)步驟（一）蕓香甘的提?。ㄋ崛》ǎ┓Q取槐花米50克，置1000ml燒杯中，加沸水800ml,加熱保持微沸1小時，趁熱用棉花過濾，濾渣再加600ml水煮沸1小時，趁熱過濾，合并2次濾液，放置夜，析出大量淡黃色沉淀，抽濾，沉淀用水洗34次，抽干置于空氣中干燥即得粗蕓香甘,稱重計(jì)算得率。（二）蕓香甘的水解稱取蕓香甘粗品2克，盡量研細(xì)，投入500

4、ml圓底燒瓶中，加2%H2s04溶液150ml,接上冷凝管，直火加熱煮沸1.5小時，濾取沉淀物（即首元棚皮素），濾液保留以鑒定糖部分，橢皮素沉淀經(jīng)水洗滌抽干，自然干燥，稱重并計(jì)算水解得率。三）蕓香甘、柳皮素重結(jié)晶稱取蕓香甘粗品2克，加甲醇50ml，加熱溶解，趁熱過濾，濾液濃縮一半，放置析晶，過濾。濾液適當(dāng)濃縮后放置，復(fù)析出結(jié)晶，濾取結(jié)晶。必要時結(jié)晶再用甲醇重結(jié)晶一次。取棚皮素全部，加適量95%乙翳，同上法重結(jié)晶一次。四）蕓香甘、挪皮素和糖的紙色譜鑒定1、點(diǎn)樣：取新華一號色譜濾紙，規(guī)格20cmx20cm,在濾紙下端約2cm處用鉛筆畫一直線，間隔2cm分別點(diǎn)上下列樣品或標(biāo)準(zhǔn)溶液：糖樣品溶液標(biāo)準(zhǔn)葡萄

5、糖溶液標(biāo)準(zhǔn)鼠李糖溶液蕓香甘樣品甲聘溶液蕓香甘標(biāo)準(zhǔn)品溶液棚皮素樣品甲醇溶液棚皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液2、展開劑：正丁醇醋酸水（4：15）上層上行展開。3、顯色：展開完畢，將濾紙取出，記錄溶劑前沿位置。待溶劑揮盡后，在（3）與（4）點(diǎn)之間剪開，分別顯色。（1）糖的顯色：噴苯胺鄰苯二甲酸試劑，在105c烘10分鐘，顯棕色斑點(diǎn)。計(jì)算并比較樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的Rf值。2）黃酮化合物的顯色：可見光下觀察色斑，紫外燈下觀察熒光斑點(diǎn)。經(jīng)氨氣薰后再觀察。 待氨氣揮盡后，噴1%AlCh甲醇溶液，再觀察。 計(jì)算并比較樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的Rf值。五）蕓香甘和棚皮素性質(zhì)試驗(yàn)1、酸性試驗(yàn)：取小試管8支，每4支一組，第一組每管中加入蕓香甘1mg

6、、第二組每管中加入梅皮素1mg,每組四管中分別加入稀氨水、5%碳酸氫鈉水溶液、5%碳酸鈉水溶液、1%氫氧化鈉水溶液各2ml，振搖后觀察各管溶解情況。溶解的溶液應(yīng)呈黃色。再加濃鹽酸數(shù)滴酸化，黃色褪去或變淺，并有沉淀析出或產(chǎn)生混濁。2、Molish反應(yīng)：取試樣1mg置小試管中，加乙醇0.5ml溶解，加a蔡酚試劑12滴，搖勻。傾斜試管，沿管壁徐徐注入濃硫酸約0.5ml靜置。觀察兩層溶液的界面變化，出現(xiàn)紫色環(huán)者為陽性，表示樣品分子中含有糖的結(jié)構(gòu)（糖和甘類均呈陽性反應(yīng)），比較蕓香甘和柳皮素的不同。3、Fehling試驗(yàn)：取試樣數(shù)mg,溶于0.5ml熱水中，加斐林氏試劑甲、乙等量混合液2ml，沸水浴上加熱

7、，如產(chǎn)生氧化亞銅的暗紅色或黃色沉淀表示有還原糖或其它還原性物質(zhì)。充分加熱作用后濾去沉淀，濾液滴加濃鹽酸酸化，在水浴上加熱水解，水解液以10%NaOH中和，再進(jìn)行斐林氏試驗(yàn)，此時顯陽性反應(yīng)者表示樣品為糖甘化合物。比較蕓香甘和棚皮素的不同。4、鹽酸鎂粉反應(yīng)：取蕓香甘1mg,加乙聘2ml，在水浴上加熱溶解，加鎂粉約50mg，滴加數(shù)滴濃鹽酸，溶液由黃色漸變紅色者表示有黃酮類化合物。以同法試驗(yàn)棚皮素。如用鋅粉代替鎂粉，則蕓香甘（3羥基與糖結(jié)合成甘）仍有作用，而棚皮素（黃酮醇類）不呈還原顯色反應(yīng)。因此可區(qū)別兩者。5、格檸檬酸反應(yīng)：取樣品1mg,加甲聘2ml，在水浴上加熱溶解，再加2%二氯氧錯甲醇溶液34滴

8、，凡有3羥基或5羥基的黃酮即呈鮮黃色。然后加2%檸檬酸甲酉享溶液34滴，有3羥基的黃酮黃色不褪。比較蕓香甘和棚皮素的不同。6、三氯化鋁反應(yīng)：取樣品1mg溶于甲醇中，加1%三氯化鋁甲翳溶液23滴，黃酮類呈鮮黃色，并有熒光。（六）實(shí)驗(yàn)流程槐花米50g沸水提取2次（第一次800ml，第二次600ml），每次1h，趁熱棉花過濾1水提取液（2次合并）藥渣（棄去）放置過夜，抽濾，沉淀水洗3次蕓香背粗品各取2gI2g蕓香昔粗品2g蕓香昔粗品I甲醇重結(jié)晶研細(xì)于500ml園底燒瓶中加2%硫酸150ml，直火加熱1.5h，放冷抽濾精制蕓香首（首元）95%乙醇重結(jié)晶鑒定反應(yīng)梆皮索精制品六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求應(yīng)包括原理描述、實(shí)驗(yàn)流程、數(shù)據(jù)記錄、解決問題的能力、實(shí)驗(yàn)結(jié)果、實(shí)驗(yàn)效果及建議等。七、思考題1、黃酮類化合物還有哪些提取方法？蕓香甘的提取還可用什么方法？2、酸水解常用什么酸？為什么用硫酸比用鹽酸水解后處理更方便？3、本實(shí)驗(yàn)中各種色譜的原理是什么？解釋化合物結(jié)構(gòu)與Rf值的關(guān)系。4、試討論首類成分的檢識程序。八、實(shí)驗(yàn)成績評定方法本門實(shí)驗(yàn)課程考