兒童肺炎支原體四種血清學檢測方法的比較

1、兒童肺炎支原體四種血清學檢測方法的比較(1)    【摘要】 目的：通過對兒童肺炎支原體感染不同血清學方法檢測的結果比較，評價檢測方法對肺炎支原體感染的診斷價值。方法：選用我院兒科住院的肺炎患者395例，分別采用酶聯免疫法(ELISA)、金標滲濾法(DIM)檢測血清MPAbIgM，熒光定量PCR（FQPCR）檢測MPDNA和冷凝集試驗(CAT)。結果：395例小兒肺炎患者受檢樣品中,87例2歲以下患兒、124例3歲6歲患兒、184例7歲14歲患兒的陽性結果及總陽性率分別為冷凝集試驗：17例(19.5%)、36例(29.0%)、62例(33.7%)、29.

2、1%；金標滲濾法：31例(35.6%)、53例(42.7%)、85例(46.2%)、42.8%；酶聯免疫法：33例(37.9%)、54例(43.5%)、86例(46.7%)、43.8%；熒光PCR法：35例(40.2%)、57例(47.0%)、88例(47.8%)、45.6%。結論：MPAbIgM是機體受肺炎支原體感染時最早出現的特異性抗體，血清MPAbIgM檢測具有操作簡便、檢出率與PCR法相當、能早期診斷的優(yōu)點，特別是金標滲濾法，所需時間最短，又不需要特殊儀器，最適用于一般醫(yī)院開展應用。 【關鍵詞】 肺炎支原體；血清學；金標滲濾；冷凝集；酶聯免疫；熒光定量PCR肺炎支原體(mycoplas

3、ma pneumoniae,MP)無細胞壁，最外層為細胞膜，基本形態(tài)呈球形或絲形，長約2 m5 ，革蘭染色陰性，其基因組為環(huán)狀雙鏈DNA。是兒童肺炎和其他呼吸道感染的重要病因之一。近年來，已成為小兒肺炎常見的病原體1，由其引起的呼吸感染日趨增多2，MP感染可在任何年齡發(fā)生，尤其以5歲20歲更多見3。MP通過飛沫以氣溶膠微粒的形式傳播，感染后引起MP肺炎，每隔3 a5 a出現一次地區(qū)性流行，占各類肺炎總數的10%20%，它不但可引起原發(fā)性非典型性肺炎，而且可引起全身器官的病變。目前，實驗室診斷方法主要依靠血清學。本文對395例小兒肺炎患者進行了冷凝集、酶聯免疫法與金標滲濾法查MPAbIgM、熒光

4、定量PCR法檢測MPDNA的檢測比較，結果如下。1 材料    研究對象為2005年1月至2006年2月在我院兒科住院的肺炎患者395例，男性235例，女性160例，年齡30 d14歲。按年齡分組：2歲以下患兒87例、3歲6歲患兒124例、7歲14歲患兒184例。采集靜脈血于枸櫞酸鈉抗凝管1.0 ml，普通試管3.5 ml。普通試管分離的血清留0.5 ml于帶蓋的子彈頭試管，儲于-30冰箱集中用酶聯免疫法檢測MP抗體IgM。冷凝集試驗、滴金免疫法測定MP抗體IgM于采血當天檢測。熒光PCR法采樣咽拭子標本，采集時以清晨為宜。用清水漱口，由檢查者用壓舌板輔

5、助，將咽拭子越過舌根，達咽峽部的病變處，反復涂抹數次，取出時避免接觸舌及口腔黏膜等處，將取樣的咽拭子放入0.5 ml無菌的生理鹽水中充分漂洗，然后貼壁擠干丟棄，樣本-30保存后集中檢測。2 方法2.1 冷凝集試驗 血清0.5 ml用0.85%生理鹽水作倍比稀釋至第9管,第10管用0.5 ml生理鹽水作陰性對照管。各加1%紅細胞懸液0.5 ml，混勻后置4冰箱1 h。取出后立即觀察結果。管底紅細胞凝集，輕搖不易散開，再放入37水浴箱10 min30 min，凝集消失者為真陽性，并以該管的稀釋倍數為效價報告，按132以上或雙份效價4倍以上變化者為陽性，提示感染。2.2 金標滲濾法檢測 MPAbIg

6、M 試劑盒購自蘭波生物技術研究所。于效期內按試劑盒說明書進行操作和判斷結果。2.3 酶聯免疫法檢測 MPAbIgM 試劑盒購自華美生物技術有限公司，儀器：伯樂1575洗板機、美國寶特EL311S酶標儀。于效期內按試劑盒說明書進行操作和判斷結果。    2.4 熒光定量PCR法 MP核酸擴增熒光檢測試劑盒購自深圳市匹基生物工程股份有限公司，儀器：大和LineGene熒光定量PCR檢測儀。樣本處理：取樣本100 l加入100 l DNA提取液，振蕩混勻。13 000 rpm離心15 min,吸棄上清液（盡量不碰沉淀物）。加入50 l DNA提取液2，振蕩混勻

7、。100干浴10 min,13000 rpm離心10 min，保留上清液備用。PCR反應體系：MPPCR反應液35.6 l Taq酶0.4 l UNG 0.06 l 樣品裂解物4 l。循環(huán)條件：37 5 min,94 1 min,95 5 s,60 40 s,40個循環(huán)，反應體系設40 l。每次試驗均有陰性對照與陽性對照；按說明書操作；試劑有效期內使用。3 結果    395例小兒肺炎患者MP四種血清學檢測結果，見表1。表1 395例小兒肺炎患者MP四種血清學檢測結果（略）    從表1中可看出，熒光PCR法檢出率

8、最高，酶聯免疫法與金標滲濾法次之，冷凝集試驗檢出率最低。在冷凝集試驗檢出的115例陽性病例中，有2例其他三種方法都檢測為陰性，這可能與檢測方法是非特異性有關。金標滲濾法與酶聯免疫法檢出的陽性標本熒光定量PCR法也都檢出。熒光定量PCR法檢出的陽性中有1例其他三種方法都檢測為陰性，這可能由于生殖支原體感染與MP的感染有血清學的交叉反應從而引起假陽性，也可能是由于污染造成的假陽性。4 討論    大量臨床資料表明MP是急性呼吸道感染的常見病原體。它可引起呼吸道感染、咽炎、扁桃體炎、支氣管炎乃至肺膿腫、肺大泡及胸膜炎，并且可引起多系統損害4。MP已越來越受到人

9、們的關注。MPAbIgM是機體受MP感染時最早出現的特異性抗體，它于發(fā)病后1周左右檢出，10 d30 d達到高峰，12周16周轉陰，檢測MPAbIgM可以早期診斷、早期治療可明顯縮短MP感染病程。    目前，用于檢測MP感染的實驗診斷方法有MP培養(yǎng)分離、冷凝集試驗、酶聯免疫法、金標滲濾法及PCR等。相比較而言，培養(yǎng)分離MP雖然對診斷和鑒別有決定性意義，但其檢出率較低，在臨床上推廣應用有困難，冷凝集試驗由于是非特異性方法，容易漏檢，檢出率低，熒光定量PCR雖然檢出率高，但操作繁瑣，需昂貴設備，不易普及，酶聯免疫法檢出率雖與PCR法檢出率相當，但也需要洗板

10、機、酶標儀設備，而且所需時間較長，只有金標滲濾法無需儀器設備，簡便快捷，檢出率與酶聯免疫法、PCR法相當，最適宜一般醫(yī)院開展應用，若同時檢測MPAbIgM和MPAbIgG則可進一步提高診斷率?！緟⒖嘉墨I】1Davis SF.Concurrent outbreaks of pertussis and Mycoplasma pneumonia infectionJ.Clin Infect Dis，1995，20:621.2王學枋，王曉紅，趙國呂.小兒肺炎支原體96例臨床分析J.上海醫(yī)科大學學報，1997，24（6）:523. 本篇論文是由3COME文檔頻道的網友為您在網絡上收集整理餅投稿至本站的，論文版權屬原作者，請不要用于商業(yè)用途或者抄襲，僅供參考學習之用，否者后果自負，如果此文侵犯您的合法權益，請聯系我們。3包瑛.肺炎支原體肺炎的研究進展J.陜西醫(yī)學雜志，2002，(10)：3538.4C