紫外分光光度計的應用

1、紫外分光光度計的應用分光光度法的特點v1.靈敏度高v2.準確度高v3.適用范圍廣v4.操作簡便快速、應用范圍廣吸收光譜的分類v遠紫外線 波長范圍：10200nm 分析方法：真空紫外光度法v近紫外線 波長范圍：200380nm 分析方法：紫外光度法v可見線 波長范圍：380780nm 分析方法：比色及可見光度法吸收光譜的分類v近紅外線 波長范圍：0.782.5um 分析方法：近紅外光譜法v中紅外線 波長范圍：2.55.0um 分析方法：中紅外光譜法v遠紅外線線 波長范圍：5.01000um 分析方法：遠紅外光譜法溶液顏色與光吸收的關系v互補色 兩種顏色的光按適當強度比例混合時，可以形成白光，這兩

2、種色光就稱為互補色。 黃 綠 青 | / 橙 白光 青藍 / | 紅 紫紅 藍溶液顏色與光吸收的關系v白光通過溶液時，溶液沒有吸收的，該溶液呈無色透明狀。v白光通過溶液時，溶液全部吸收的，該溶液呈黑色。v白光通過溶液時，溶液選擇性吸收的，該溶液呈現(xiàn)被吸收波長光的互補色。 如：KMnO4溶液，吸綠色而呈紫紅色光的吸收曲線v將不同波長的光通過一定濃度和厚度的有色溶液，分別測出它們對各種波長的吸光度，以波長為橫坐標，吸光度為縱坐標畫出曲線，稱為光的吸收曲線。v光吸收程度最大處的波長稱為最大吸收波長。光的吸收定律v朗伯-比耳定律 光的吸收與溶液的厚度與溶液的濃度成正比。 A=kbc A-吸光度 b-溶

3、液的厚度 c-溶液的濃度 k-比吸收系數(shù)光的吸收定律v透光率 透光率用T表示 透光率的到數(shù)的對數(shù)為吸光度 A=lg1/Tv比吸收系數(shù)含義 入射波長一定時，溶液濃度1%，液層厚度為1cm時的吸光度。 光的吸收定律的適用范圍v各種有色的均勻溶液，一定的濃度范圍。v超過一定的濃度范圍，曲線會發(fā)生正偏離或負偏離。v偏離的原因v1.入射光非單色光v2.溶液中的化學反應v3.比耳定律的局限性 溶液濃度小于0.01mol/L的稀溶液目視比色法v工作原理 朗伯-比耳定律 : A=kbc 其中A、k、b相同，c必定相同。v優(yōu)點v1.儀器簡單，操作簡便v2.液層較厚，靈敏度較高v3.在特定條件下，不符合朗伯-比耳

4、定律的溶液，仍可測定。v缺點 準確度較差紫外可見分光光度計v主要部件 光源、單色器、吸收池、檢測器、測量系統(tǒng)v部分性能v 721分光光度計 波長范圍360800nm 玻璃棱鏡 讀數(shù)方式：指針式 v 754分光光度計 波長范圍200800nm 光柵 讀數(shù)方式：指針式 紫外可見分光光度計vCary-50分光光度計 波長范圍1901100nm 光柵 讀數(shù)方式：微機 具有掃描功能分光光度計的檢驗與維護v分光光度計的檢定周期: 一年v環(huán)境要求 1.室溫應保持在1528。 2.相對濕度應在4565%,不應超過75%。 3.防塵、防震、防電磁干擾。 4.防腐蝕。分光光度計的檢驗與維護v保養(yǎng)和維護方法 1.不

5、用時不要開光源燈。 2.不要拆開單色器，單色器是儀器的核心部分。 3.吸收池用后，立即洗凈，防止擦傷。 4.光電器件應避免強光照射和受潮積塵。 5.儀器的工作電壓應保持在220v10%，必要時配備溫壓器。分光光度法v分光光度法兩種形式v利用物質本身對紫外或可見光的的吸收進行測定v生成有色化合物即“顯色”以后測定顯色反應v顯色反應分為兩類v絡合反應v氧化還原反應v其中絡合反應是主要的顯色反應顯色反應的要求v選擇性好v靈敏度高v有色化合物的離解常數(shù)要小v有色化合物組成要恒定v顯色劑有顏色時，要求有色化合物與顯色劑的顏色差別要大，以減小試劑空白v顯色反應的條件要易于控制顯色劑v無機顯色劑 硫氰酸鹽、

6、鉬酸銨、過氧化氫v有機顯色劑 鄰菲羅琳、雙硫腙、鉻天青S等反應條件的選擇v顯色劑的用量 顯色劑應是過量的，保證顯色反應的完全。但是顯色劑過量太多，容易引起副反應，造成結果偏差。反應條件的選擇v溶液的酸度 1.溶液的酸度不同，顯色化合物的組成和顏色可能不同。 2.溶液的酸度變化，顯色劑的顏色可能發(fā)生變化。 3.溶液的酸度過高，降低配合物的穩(wěn)定性。溶液的酸度過低，會引起金屬離子水解。反應條件的選擇v溫度的影響 室溫進行顯色的、加熱顯色 溫度對光的吸收和顏色的深淺都有影響v顯色時間 1.立即顯色，放置后顏色穩(wěn)定 2.放置一定時間后，進行比色 3.立即顯色，放置后顏色逐漸褪去反應條件的選擇v溶劑 有機

7、溶劑常會降低有色化合物的離解度，從而提高顯色反應的的靈敏度 常用溶劑的波長下限（10mm池） 水205nm 乙醇 95% 204nm 乙晴 190nm 苯280nm甲醇205nm 乙醚215nm 氯仿245nm 四氯化碳245nm丙酮330nm共存離子的干擾v與試劑生成有色化合物v干擾離子本身有顏色v與試劑反應，生成配合物無顏色，消耗大量顯色劑，使被測離子顯色反應不完全v與被測離子結合成離解度小的另一種化合物，使被測離子與顯色劑不反應干擾的消除方法v控制溶液酸度v加入掩蔽劑v利用氧化還原反應改變干擾離子的價態(tài)v選擇適當?shù)膮⒈热芤簐選擇適當?shù)牟ㄩLv采用適當?shù)姆蛛x方法除去干擾離子v利用導數(shù)光譜法、

8、雙波長法等新技術參比溶液的選擇v參比溶液的作用：用于分光光度計的吸光度調零v溶劑參比 水或有機溶劑v試劑參比 不加試樣的試劑v試液參比 不加顯色劑的試液v其他參比 試樣+掩蔽劑+顯色劑+其他試劑測定條件的選擇v入射光波長的選擇 入射光波長的選擇從靈敏度和選擇性兩個方面來選擇。 靈敏度最高應是最大吸收波長 選擇性最高應是干擾最小的吸收波長測定條件的選擇v吸光度范圍的控制 最適宜吸光度范圍0.20.8 透光率為（15%65%）v調節(jié)最適宜吸光度的方法 1.調節(jié)溶液濃度 2.使用厚度不同的吸收池 定量分析v工作曲線法 4個以上的濃度，以空白溶液為參比，在選定的波長下，分別測定吸光度，以標準溶液的濃度為橫坐標，吸光度為縱座標，繪制工作曲線。 工作曲線為 y=a+bx x為標準溶液濃度，y為吸光度，b為直線斜率，a為直線截距，a和b稱為回歸系數(shù)工作曲線法v工作曲線的好壞可以用相關系數(shù)r來表示v相關系數(shù)越接近1線形關系越好。v一般的光度分析方法r0.999v曲線強制過原點時曲線演變?yōu)?y=bxv當更換標準溶液、試劑重配時應重新繪制標準工作曲線標準對照法v即采用一個標準溶液，與原點構成工作曲線v計算公式為v c樣= A樣/A標 c標v注意標準樣品的吸光度應控制在0.40.8以內較好吸收系數(shù)