牛血清蛋白的提取與鑒定(1)_第1頁
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文檔簡介

1、編輯課件編輯課件實驗?zāi)康模?、掌握血清蛋白的提取與鑒定方法。2、掌握電泳法，鹽析法、透析法以及正確的點樣方法。3、了解設(shè)計性試驗的基本構(gòu)架，方便今后創(chuàng)新性實驗的進行編輯課件實驗原理 ：（會用到的幾種試驗方法）1、利用蛋白質(zhì)的顯色反應(yīng)，對牛血清蛋白進行定性染色，從而對分離的物質(zhì)進行鑒定。2、鹽析：鹽析一般是指溶液中加入無機鹽類（本次試驗就采用“飽和的硫酸銨”）而使溶解的物質(zhì)（本次試驗提取的是“牛血清蛋白”）析出的過程 。編輯課件3、透析：穿過膜的選擇性擴散過程?？捎糜诜蛛x分子量大小不同的溶質(zhì)，低于膜所截留閾值分子量的物質(zhì)可擴散穿過膜，高于膜截留閾值分子量的物質(zhì)則被保留在半透膜的另一側(cè)。4、電泳：

2、帶電物質(zhì)或細(xì)胞在電場中的泳動。根據(jù)大分子或顆粒的電荷、大小和形狀不同，使其在通過電場中的凝膠或介質(zhì)時發(fā)生分離的方法。編輯課件實驗試劑與器材：牛血清、PBS緩沖液、飽和硫酸銨、離心機、試管、小燒杯、離心管、天平、電泳所需的物件等編輯課件操作流程：取小 牛血清0.5毫升、PBS液0.5毫升、飽和硫酸銨2.3毫升充分混勻，靜止20分鐘，2500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘。 取玻璃紙一張，折成袋形，將離心后的上清液倒入袋內(nèi)，用線扎緊上口（注意要留有空隙），放入裝有自來水的小燒杯中透析，要不斷振動，每隔2分鐘換一次水，共換水15次。 用兩支毛細(xì)管分別將標(biāo)準(zhǔn)液及測定液點在同一張醋酸纖維素薄膜的無光澤面上（劃好點樣線并作好標(biāo)記），標(biāo)準(zhǔn)液點一次，測定液點三次。 鹽析鹽析透析透析點樣點樣編輯課件將點樣后的膜條置于電泳槽架上，放置時無光澤面向下，點樣端置于陰極，平衡5分鐘，開電源160伏60分鐘，關(guān)閉電源后用鑷子將膜條取出。 將膜條直接浸于盛有氨基黑10B（萘酚藍黑）的染料中，染2分鐘取出，立即浸于漂洗液中，分別在漂洗液、中各漂洗5分鐘，直至背景漂洗干凈為止。 電泳電泳染色染色編輯課件附：PBS（磷酸鹽緩沖液）：是磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉組成，其中磷酸二氫鈉酸性較強。如果血液中的ph值過高的話，多余的堿就會與酸磷酸二氫鈉結(jié)合生成磷酸氫二鈉，反之，過酸時就會與磷酸氫二鈉反應(yīng)產(chǎn)生磷酸二氫鈉，這樣ph值就會穩(wěn)

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