生物制藥復(fù)習(xí)提綱和答案

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上基本概念：1. 生物藥物是利用生物體、生物組織或其成分，綜合應(yīng)用生物學(xué)、生物化學(xué)、微生物學(xué)、免疫學(xué)、物理化學(xué)和藥學(xué)的原理與方法進(jìn)行加工、制造而成的一大類預(yù)防、診斷、治療制品。2. 生物技術(shù)藥物是指采用DNA重組技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)或其他生物技術(shù)研制的蛋白質(zhì)、抗體或核酸類藥物。生物技術(shù)藥物可以是在藥理上有高度活性的，也可以是在免疫或其他生理系統(tǒng)上有活性的。生物技術(shù)藥物可以分為三大類，即重組蛋白質(zhì)、治療性抗體和核酸。3. 生物制品用微生物及微生物代謝產(chǎn)物或動(dòng)物血清制成的用于預(yù)防、診斷和治療的制品。 4. 生物制藥工藝學(xué)是從事各種生物藥物的研究、生產(chǎn)和制劑的綜合性應(yīng)用技術(shù)科

2、學(xué)。研究?jī)?nèi)容包括生化制藥工藝、生物制品制造與相關(guān)的生物醫(yī)藥產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝。主要討論各類生物藥物的來(lái)源、結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、制造原理、工藝過程、生產(chǎn)技術(shù)操作和質(zhì)量控制。5. 抗生素青霉素、鏈霉素、紅霉索等一類化學(xué)物質(zhì)的總稱。它是生物，包括微生物、植物和動(dòng)物，在其生產(chǎn)活動(dòng)過程中所產(chǎn)生，并能在低微濃度下有選擇性地抑制或殺滅其他微生物或腫瘤細(xì)胞的有機(jī)物質(zhì)。6. 熱原質(zhì)熱原質(zhì)是在生產(chǎn)過程中由于被污染后由雜菌所產(chǎn)生的一種內(nèi)毒素。7. 四環(huán)類抗生素是以四并苯為母核的一類有機(jī)化合物。金霉素、土霉素、四環(huán)素、地美環(huán)素。四環(huán)類抗生素可與微生物核糖核蛋白體30S亞基接合，通過抑制氨基酰-tRNA與起始復(fù)合物中核蛋白體的結(jié)合

3、，阻斷蛋白質(zhì)合成時(shí)肽鏈的延長(zhǎng)。8. 大環(huán)內(nèi)酯類抗生素由鏈霉菌產(chǎn)生的弱堿性抗菌素，因分子中含有一個(gè)內(nèi)酯結(jié)構(gòu)的14或16元環(huán)而得名，紅霉素是本類藥物最典型的代表。大環(huán)內(nèi)酯類作用于細(xì)菌細(xì)胞核糖蛋白體50s亞單位，阻礙細(xì)菌蛋白質(zhì)合成，屬于生長(zhǎng)期抑制劑 。9. -內(nèi)酰胺類抗生素10. 氨基糖苷類抗生素由氨基環(huán)醇(aminocyclitol)、氨基糖(aminosuger)和糖組成的抗生素的總稱。 11. 耐藥性12. 干擾素系指由誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)有關(guān)生物細(xì)胞所產(chǎn)生的一類高活性、多功能的誘生蛋白質(zhì)。這類誘生蛋白質(zhì)從細(xì)胞中產(chǎn)生和釋放之后，作用于相應(yīng)的其它同種生物細(xì)胞，并使其獲得抗病毒和抗腫瘤等多方面的免疫力。有型

4、、型和型及許多亞型。13. 硫酸軟骨素硫酸軟骨素一般含有5070個(gè)雙糖單位，鏈長(zhǎng)不均一，相對(duì)分子質(zhì)量在13萬(wàn)，硫酸軟骨素按其化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)差異，又分為A、B、C、D、E、F、H等多種。它們均由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖組成，只是硫酸基團(tuán)位置不同而己。14. 肝素屬高分于化合物，分于量6 00020 000以前肝素鈉一般都由動(dòng)物肝臟中提取，現(xiàn)在大多從豬、羊、牛等動(dòng)物的腸粘膜中提取，亦可從肺臟和心臟中提取。作為一種重要的生化藥物，是一簇酸性粘多糖化合物的統(tǒng)稱，它是由已糖醛酸(L-艾杜糖醛酸、葡萄糖醛酸）與硫酸氨基葡萄糖分子以一定的比例交替聯(lián)結(jié)形成的具有六糖或八糖單位的線型鏈狀大分子1

5、5. 維生素是維持機(jī)體正常代謝機(jī)能的一類化學(xué)結(jié)構(gòu)不同的小分子有機(jī)化合物，它們?cè)隗w內(nèi)不能合成，大多需從外界攝取。 16. 激素是生物體產(chǎn)生的，對(duì)機(jī)體代謝和生理機(jī)能發(fā)揮高效調(diào)節(jié)作用的化學(xué)信使分子。17. 亞基疫苗利用病原體的某一部分通過基因工程克隆而制得的疫苗稱為亞基疫苗。18. 活體重組疫苗 通過基因工程的方法，對(duì)非致病性微生物(細(xì)菌和病毒)進(jìn)行改造，使之?dāng)y帶并表達(dá)某種特定病原體的抗原決定簇基因，產(chǎn)生免疫原性；或通過基因工程的方法修飾或刪除致病性微生物的毒性基因，使之仍保持免疫原性所制成的疫苗。19. 核酸疫苗核酸疫苗就是把外源基因克隆到真核質(zhì)粒表達(dá)載體上，然后將重組的質(zhì)粒DNA直接注射到動(dòng)物體

6、內(nèi)，使外源基因在生物體內(nèi)表達(dá)，產(chǎn)生的抗原激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)，引發(fā)免疫反應(yīng)。20. 基因治療基因治療是將具有正常功能的基因轉(zhuǎn)移到病人體內(nèi)并發(fā)揮功能，糾正病人體內(nèi)所缺乏的蛋白質(zhì)或賦予機(jī)體新的抗病功能。更為廣義的基因治療還包括從基因水平對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控。 21. 人工免疫人為地給機(jī)體輸入抗原以調(diào)動(dòng)機(jī)體的免疫系統(tǒng)，或直接輸入免疫血清，使其獲得某種特殊抵抗力，用以預(yù)防或治療某些疾病者，稱為人工免疫22. 人工自動(dòng)免疫是給機(jī)體輸入抗原物質(zhì)，使免疫系統(tǒng)因抗原刺激而產(chǎn)生類似感染時(shí)所發(fā)生的免疫過程，從而產(chǎn)生特異性免疫力。這種免疫力出現(xiàn)較慢，常有14周誘導(dǎo)期，但維持較久，可從半年到數(shù)年。23. 人工被動(dòng)免疫輸入免

7、疫血清(含特異性抗體)，使機(jī)體獲得一定免疫力，以達(dá)到防治某些疾病目的，稱為人工被動(dòng)免疫。24. 乙肝基因工程疫苗將乙型肝炎病毒(HBV)基因組中乙肝表面抗原(HBsAg)的DNA序列構(gòu)建到表達(dá)載體上，并在宿主細(xì)胞中表達(dá)，所表達(dá)的抗原經(jīng)純化后制備成的重組亞單位乙肝疫苗。25. 抗體是由抗原刺激機(jī)體后，由淋巴B細(xì)胞經(jīng)分化增殖的漿細(xì)胞合成、分泌的，能與相應(yīng)抗原特異結(jié)合并具有多方面免疫功能的球蛋白。26. 單克隆抗體僅識(shí)別抗原分子上同一抗原位區(qū)的由同一克隆細(xì)胞產(chǎn)生的抗體。27. 人源化抗體人源化抗體主要指鼠源性單克隆抗體的基因克隆及 DNA 重組技術(shù)改造，重新表達(dá)的抗體。其大部分氨基酸序列為人源序列所

8、取代，既基本保留親代鼠單克隆抗體的親和力和特異性，又降低了鼠異源性。28.基因工程抗體是利用DNA重組技術(shù)，通過對(duì)抗體分子基因結(jié)構(gòu)與功能了解，有目的地在基因水平上對(duì)抗體分子進(jìn)行切割、拼接或修飾，或者直接合成基因序列，再將基因?qū)爰?xì)胞表達(dá)產(chǎn)生的一類抗體。29. 前體物質(zhì)在抗生素生物合成中，菌體利用它以構(gòu)成抗生素分子中的一部分而其本身又沒有顯著改變的物質(zhì)，稱為前體(precursor)。簡(jiǎn)述題1. 新藥篩選基本方法 （一）、隨機(jī)篩選 （二）、經(jīng)驗(yàn)式重復(fù)篩選（三）、藥物合理設(shè)計(jì)與篩選（四）、高通量篩選 2. 新藥研究和開發(fā)的主要過程1、確定研究計(jì)劃2、準(zhǔn)備化合物3、 藥理篩選4、 化學(xué)實(shí)驗(yàn)5、 臨床

9、前I期6、 臨床前II期7、 I期臨床8、 II期臨床9、 III期臨床10注冊(cè)申請(qǐng)上市（2-3年）11售后監(jiān)測(cè)3. 生物活性物質(zhì)的濃縮的主要方法？（一）鹽析濃縮：硫酸銨沉淀蛋白質(zhì)（二）有機(jī)溶劑沉淀濃縮（三）用葡聚糖凝膠（Sephadex）濃縮（四）用聚乙二醇透析濃縮（五）超濾濃縮（六）真空減壓濃縮與薄膜濃縮4. 試述活性物質(zhì)的保護(hù)措施1、采用緩沖鹽系統(tǒng)在生物藥物制備中，常用的緩沖鹽有磷酸緩沖鹽，檸檬酸緩沖鹽，Tris緩沖液，醋酸緩沖鹽，碳酸緩沖鹽，硼酸緩沖鹽和巴比妥緩沖鹽等。2、添加保護(hù)劑 防止某些生理活性物質(zhì)的活性基團(tuán)及酶的活性中心受到破壞，如巰基是許多活性蛋白質(zhì)和酶催化活性基團(tuán)，極易被氧

10、化，故提取時(shí)，常添加某些還原劑如半胱氨酸，a-巰基乙醇。對(duì)易受重金屬影響的，可添加EDTA。3、抑制水解酶的作用4、其它保護(hù)措施（冷、熱、酸、堿）5. 試述生物活性物質(zhì)的濃縮方法（一）鹽析濃縮：硫酸銨沉淀蛋白質(zhì)（二）有機(jī)溶劑沉淀濃縮在生物大分子的水溶液中，逐漸加入乙醇，丙酮等有機(jī)溶劑，可以使生化物質(zhì)的溶解度明顯降低，從溶液中沉淀出來(lái)。（三）用葡聚糖凝膠（Sephadex）濃縮（四）用聚乙二醇透析濃縮（五）超濾濃縮（六）真空減壓濃縮與薄膜濃縮 真空減壓濃縮在藥物生產(chǎn)中使用較為普遍，具有生產(chǎn)規(guī)模較大，蒸發(fā)溫度較低，蒸發(fā)速度較快等優(yōu)點(diǎn)。 薄膜濃縮器的加速蒸發(fā)的原理是增加汽化表面積。使液體形成薄膜而蒸

11、發(fā)，成膜的液體具有較大的表面積，熱傳播快而均勻，沒有液體靜壓的影響，能較好地防止物料的過熱現(xiàn)象。6. 試述生化物質(zhì)分離純化的基本步驟1、將目標(biāo)藥物成分從起始原材料中釋放出來(lái)；2、從提取物中去除固體雜質(zhì)成分；3、去除可溶性雜質(zhì)成分；4、除去水或其他類別的溶劑，富集或濃縮目標(biāo)藥物成分；5、去除殘留雜質(zhì)和污染物成分，使藥物成分能夠達(dá)到所需的純度；6、對(duì)目標(biāo)藥物成分進(jìn)行必要的后加工處理（如修飾、加入穩(wěn)定劑、佐劑等）以保護(hù)或提高藥物活性等。7. 生物活性物質(zhì)分離制備設(shè)計(jì)基本階段（1）確定制備物的研究目的及建立相應(yīng)的分析鑒定方法。（2）制備物理化性質(zhì)穩(wěn)定性的預(yù)備試驗(yàn)。（3）材料處理及抽提方法的選擇。（4）

12、分離純化方法的摸索。（5）產(chǎn)物均一性測(cè)定。8. 靶向給藥系統(tǒng)采用乳化技術(shù)、脂質(zhì)體制備技術(shù)、微型包囊和微型成球技術(shù)，使藥物濃集于靶器官、靶組織。靶細(xì)胞的靶向給藥系統(tǒng)屬于第4代劑型，可用于惡性腫瘤等疾病的治療。近年來(lái)受到普遍關(guān)注的口服結(jié)腸定位給藥系統(tǒng)是一類對(duì)pH敏感的結(jié)腸定位釋藥制劑?？诜Y(jié)腸靶向給藥系統(tǒng)中的藥物在胃、十二指腸、空腸和回腸不釋放，只有當(dāng)藥物達(dá)到人體回盲部后啟結(jié)腸較高的pH環(huán)境下溶解聚合物，才能使給藥系統(tǒng)把藥物釋放出未，并且在結(jié)腸部發(fā)揮局部治療作用。9. 緩、控釋制劑緩釋控釋制劑與藥物在體內(nèi)濃度有關(guān)，而與給藥時(shí)間無(wú)關(guān)的基本理論的基礎(chǔ)上發(fā)展起未的。是一類采用新型藥用輔料，通過膜控技術(shù)、

13、骨架阻滯技術(shù)和包衣技術(shù)等來(lái)控制片劑、膠囊劑的釋藥速度，從而實(shí)現(xiàn)定時(shí)、定速釋放，屬于第3代劑型就延長(zhǎng)有效血藥濃度的持續(xù)時(shí)間和提高用藥的安全度。緩釋制劑和控釋制劑的主要區(qū)別在于控釋制劑是按零級(jí)速率釋放藥物，其釋放量不受時(shí)間影響，釋放速度是恒速或接近恒速，血藥濃度平穩(wěn)，峰谷波動(dòng)很小。10. 根據(jù)抗生素的化學(xué)結(jié)構(gòu)抗生素可分為幾類？每類其結(jié)構(gòu)有何特點(diǎn)？每類舉1藥品。以青霉素為例寫出發(fā)酵生產(chǎn)青霉素的工藝路線。(1) -內(nèi)酰胺類抗生素：包括青霉素類、頭孢菌素類等。它們都包含一個(gè)四元內(nèi)酰胺環(huán)。這是在當(dāng)前最受重視的一類抗生素。(2)氨基糖苷類抗生素：包括鏈霉素、慶大霉素等。它們既含有氨基糖苷，也含有氨基環(huán)醇的結(jié)

14、構(gòu)。(3)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素：如紅霉素、麥迪霉素(medicamycin)。它們含有一個(gè)大環(huán)內(nèi)酯作配糖體，以苷健和13個(gè)分子的糖相連。(4)四環(huán)類抗生素：如四環(huán)素、土霉素等。它們以四并苯為母核。(5)多肽類抗生素：如多粘菌素、桿菌肽等。它們多由細(xì)菌、特別是由產(chǎn)孢子的桿菌產(chǎn)生，并含有多種氨基酸，經(jīng)肽鍵縮合成線狀、環(huán)狀或帶側(cè)鏈的環(huán)狀多肽。11. 微生物產(chǎn)生耐藥機(jī)理是什么？12. 影響青霉素結(jié)晶的因素？(1)水分的影響 (2)溫度的影響(3)污染數(shù)高低對(duì)結(jié)晶的影響(4)青霉素與醋酸鉀摩爾比關(guān)系13. 去除四環(huán)素差向異構(gòu)物的方法 ？（1）制成尿素復(fù)鹽轉(zhuǎn)四環(huán)素鹽酸鹽（2）制成氯化鈣復(fù)合物（3）制成甲酰復(fù)合

15、物14. 用現(xiàn)代生物技術(shù)提高抗生素產(chǎn)量的方法1將產(chǎn)生菌基因隨機(jī)克隆至原株直接篩選高產(chǎn)菌株2增加參與生物合成限速階段基因的拷貝數(shù)3強(qiáng)化正調(diào)節(jié)基因的作用4增加抗性基因15. 乙肝病毒(HBV)基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)途徑 將HBV的S、S2或S1基因重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化酵母，用重組酵母生產(chǎn)HB疫苗；將S、S2或S1基因重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化哺乳動(dòng)物細(xì)胞；將S、S2或S1基因插入痘苗病毒DNA非必需區(qū)，傳染中華地鼠卵巢細(xì)胞，大量培養(yǎng)該動(dòng)物細(xì)胞株生產(chǎn)HB疫苗；將S、S2或S1基因插入昆蟲核多角體病毒DNA非必需區(qū)，轉(zhuǎn)染家蠶和蝶蛹生產(chǎn)HB疫苗。16. 試述HBA的DNA結(jié)構(gòu)小蛋白(S蛋白)，為S基因編碼的由226個(gè)氨基酸殘

16、基組成的多肽，是HBsAg和HBV包膜的主要成分，也是HBV的主要蛋白；中蛋白(M蛋白)，由S蛋白和前S2基因編碼的55個(gè)氨基酸殘基多肽(前S2蛋白)組成，它具有一個(gè)多聚人血清白蛋白(pHSA)受體位點(diǎn)；大蛋白(L蛋白)，為M蛋白和前S1基因編碼的108109個(gè)氨基酸殘基多肽(前S1蛋白)組成。 17. 用于制備病毒類疫苗的毒株，一般需具備哪幾個(gè)條件？必須持有特定的抗原性，能使機(jī)體誘發(fā)特定的免疫力，阻止相關(guān)病原體的入侵或防止機(jī)體發(fā)生相應(yīng)的疾病。應(yīng)有典型的形態(tài)和感染特定組織的特性，并在傳代的過程中，能長(zhǎng)期保持其生物學(xué)特性。易在特定的組織中大量繁殖。在人工繁殖的過程中，不應(yīng)產(chǎn)生神經(jīng)毒素或能引起機(jī)體

17、損害的其他毒素。如是制備活疫苗，毒株在人工繁殖的過程中應(yīng)無(wú)恢復(fù)原致病力的現(xiàn)象，以免在使用時(shí)，誘發(fā)機(jī)體發(fā)生相應(yīng)的疾病。在分離時(shí)和形成毒種的全過程中應(yīng)不被其他病毒所污染，并需要保持歷史記錄。用于制備活疫苗的毒種，往往需要在特定的條件下將毒株經(jīng)過長(zhǎng)達(dá)數(shù)十次或上百次的傳代，降低其毒力，直至無(wú)臨床致病性，才能用于生產(chǎn)。18. 簡(jiǎn)述核酸疫苗的特點(diǎn)？()免疫保護(hù)力增強(qiáng)：接種后蛋白質(zhì)在宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，直接與組織相容性復(fù)合物MHCI 或II類分子結(jié)合，同時(shí)引起細(xì)胞和體液免疫，對(duì)慢性病毒感染性疾病等依賴細(xì)胞免疫清除病原的疾病的預(yù)防更加有效。()  制備簡(jiǎn)單，省時(shí)省力：核酸疫苗作為一種重組質(zhì)粒，

18、易在工程菌內(nèi)大量擴(kuò)增，提純方法簡(jiǎn)單，可制備多價(jià)核酸疫苗。 ()  同種異株交叉保護(hù)：這是基因疫苗的最大優(yōu)點(diǎn)之一。在制備基因疫苗時(shí)，可通過對(duì)基因表達(dá)載體所攜帶的靶基因進(jìn)行改造，從而選擇抗原決定簇。()  應(yīng)用較安全：接種核酸疫苗后，蛋白質(zhì)抗原在宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，無(wú)因毒力返祖或殘留毒力病毒顆粒而引發(fā)疫病的危險(xiǎn)，也不會(huì)引起對(duì)機(jī)體的不良反應(yīng)。()  產(chǎn)生持久免疫應(yīng)答：免疫具有持久性，一次接種可獲得長(zhǎng)期免疫力，無(wú)需反復(fù)多次加強(qiáng)免疫。()  貯存、運(yùn)輸方便：核酸疫苗的質(zhì)粒DNA穩(wěn)定性好，無(wú)須冷藏。()  可用

19、于防治腫瘤：核酸疫苗可以誘導(dǎo)CTL(細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞 )，CTL應(yīng)答也是機(jī)體殺死癌變細(xì)胞的有效清除途徑。19. 核酸疫苗的純化步驟(1)收集、裂解細(xì)胞的和質(zhì)粒的初步抽提 細(xì)胞的收集可利用離心的方法完成。裂解細(xì)胞(使細(xì)菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜破裂的過程)一般有煮沸法、SDS堿裂解法、非離子型去垢劑法等。 (2) 質(zhì)粒DNA的純化 聚乙二醇(PEG)沉淀法 氯化銫-溴乙錠梯度平衡離心法 柱層析法 20. DNA疫苗為治療惡性腫瘤提供哪些新的思路激發(fā)免疫系統(tǒng)殺死致癌病毒；激發(fā)免疫系統(tǒng)識(shí)別并消除表達(dá)共同癌細(xì)胞信號(hào)的癌細(xì)胞；轉(zhuǎn)染和表達(dá)基因工程蛋白，從而使癌細(xì)胞成為更好的免疫靶子。將編碼腫瘤相關(guān)抗原的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)

20、到腫瘤細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，可提高腫瘤免疫原性，從而增強(qiáng)宿主抗腫瘤的免疫應(yīng)答。 21. 影響核酸疫苗免疫效果的因素、 質(zhì)粒載體和啟動(dòng)子的選擇  注射途徑與方法 、 接種部位的預(yù)處理、 接種劑量與次數(shù)、 免疫佐劑22. 試述抗體分子的基本結(jié)構(gòu)？抗體分成3個(gè)部分，即兩個(gè)Fab片段和一個(gè)Fc片段。 抗體的結(jié)構(gòu)抗體是機(jī)體在抗原物質(zhì)刺激下由漿細(xì)胞產(chǎn)生的一類能與抗原發(fā)生特異結(jié)合反應(yīng)的免疫球蛋白。其基本結(jié)構(gòu)是由（兩重H鏈兩輕L鏈）四條膚鏈組成，四鏈互以-S- S鍵結(jié)合，形成一個(gè)“Y”形的四鏈分子。每一鏈又分為二段，一段為恒定部分，該部分的氨基酸序列是相同的；

21、另一段為可變部分，這一部分的氨基酸序列各不相同，因而其上具有抗原結(jié)合位點(diǎn)。主要位于“Y”的兩臂末端1 /2L鏈和1 /4H鏈相結(jié)合部位。抗體的特異性就是由結(jié)合部位的構(gòu)象決定的。只有分子構(gòu)象與抗體結(jié)合部位的分子構(gòu)象互補(bǔ)的抗原才能與該種抗體結(jié)合。這樣一個(gè)抗體就可和兩個(gè)抗原結(jié)合。此外抗體的柄部Fc段上有補(bǔ)體結(jié)合區(qū)。 23. 試述B淋巴細(xì)胞雜交瘤選擇培養(yǎng)基的原理？細(xì)胞的DNA合成有內(nèi)源性和外源性兩種途徑。內(nèi)源性途徑就是利用Gln(谷氨酰胺)或單磷酸尿苷酸在二氫葉酸還原酶的催化下合成DNA；外源性途徑則利用次黃漂呤或胸腺嘧啶在HGPRT(次黃漂呤鳥漂呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶)或TK(胸腺嘧啶激酶)的催化作用下補(bǔ)

22、救合成DNA。HAT培養(yǎng)基中的氨基喋呤是二氫葉酸還原酶的抑制劑，因此能有效的阻斷DNA合成的內(nèi)源性途徑。B淋巴細(xì)胞具有HGPRT和TK這兩種酶，因此在內(nèi)源性途徑被阻斷后仍能利用HAT培養(yǎng)基中的次黃漂呤和胸腺嘧啶完成合成。但由于B淋巴細(xì)胞是正常細(xì)胞故不能長(zhǎng)期存活。而雜交瘤細(xì)胞由于繼承了B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的雙重特性，能夠合成HGPRT和TK，故在HAT培養(yǎng)基中可長(zhǎng)期存活。在歷經(jīng)2周左右的時(shí)間后即可得到該雜交瘤細(xì)胞，從而成為制造單克隆抗體的細(xì)胞源。24. 單抗純化策略及注意事項(xiàng)？腹水或細(xì)胞上清液，均含有脂蛋白、脂質(zhì)、細(xì) 胞碎片等雜質(zhì)，用濾紙去掉脂質(zhì)和大顆粒，離心去除 細(xì)胞碎片和蛋白聚合物，目前純

23、化方法有十幾種，一 般采用鹽析、凝膠過濾、離子交換層析和辛酸提取等， 現(xiàn)在最有效的方法是親和純化法，常用 SPA 或抗小 鼠免疫球蛋白抗體與載體交聯(lián)。稱為 Sepharose 柱， 抗體結(jié)合上去，然后洗脫。25. 簡(jiǎn)述單克隆抗體制備過程？1. 動(dòng)物體內(nèi)生長(zhǎng) 2. 體外培養(yǎng) 3、單克隆抗體的純化4、單克隆抗體的性質(zhì)鑒定26. 干擾素和干擾素基本功能是什么？ 干擾素系指由誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)有關(guān)生物細(xì)胞所產(chǎn)生的一類高活性、多功能的誘生蛋白質(zhì)。這類誘生蛋白質(zhì)從細(xì)胞中產(chǎn)生和釋放之后，作用于相應(yīng)的其它同種生物細(xì)胞，并使其獲得抗病毒和抗腫瘤等多方面的免疫力。有型、型和型及許多亞型。 IFN具有抗病毒繁殖、抗細(xì)胞分裂

24、增殖及調(diào)節(jié)機(jī)體免疫三大基本功能。 （1） 抗病毒繁殖：IFN具有發(fā)好的廣譜抗病毒作用。IFN不是直接中和或殺傷病毒體，而是病毒體做為IFN的誘生劑，啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)抗病毒蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因，誘導(dǎo)細(xì)胞合成抗病毒蛋白質(zhì)的，從而阻止感染性病毒顆粒的形成，達(dá)到抗病毒的目的。（2） 直接抗腫瘤：這主要表現(xiàn)在IFN具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖，直接溶癌，降低腫瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為及暴露腫瘤特異性表面抗原等功能方面。IFN有抑制細(xì)胞癌基因表達(dá)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化，促進(jìn)“逆轉(zhuǎn)”等作用。 （3） 間接抗腫瘤：IFN不僅對(duì)腫瘤細(xì)胞有直接作用，而且還通免疫系統(tǒng)發(fā)揮間接作用。IFN是自然殺傷細(xì)胞（Natual kill cell,N

25、K）天然的強(qiáng)有力的誘導(dǎo)劑，在體內(nèi)外IFN皆可促使NK細(xì)胞的成熟與活化，增強(qiáng)NK細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的能力。 IFN在體內(nèi)外均能激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)其吞噬和細(xì)胞毒功能。  IFN還具有雙向免疫調(diào)節(jié)作用，可調(diào)節(jié)自身免疫性疾病的過度反應(yīng)到接近正常水平。 27. 微生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)甾類激素的特點(diǎn)是什么？可減少化學(xué)合成步驟，簡(jiǎn)化生產(chǎn)設(shè)備，縮短生產(chǎn)周期。如由黃體生產(chǎn)炔諾酮，利用微生物法后，可減少6步工序?？商岣弋a(chǎn)物得率和質(zhì)量，降低成本。如用黑根霉羥化孕酮得率達(dá)90以上?？蛇M(jìn)行化學(xué)法難以進(jìn)行的反應(yīng)，如甾類化合物C-11上的加氧(即羥化)等反應(yīng)，化學(xué)法很難進(jìn)行，而采用微生物法則比較容易。其他生物雖能產(chǎn)生這類羥

26、化酶，但微生物產(chǎn)生的酶系種類最多。據(jù)統(tǒng)計(jì)，微生物要比哺乳動(dòng)物多1、3、5、12、15、16等12種羥化酶。可改善工人的勞動(dòng)條件，避免或減少使用強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或有毒物質(zhì)。 28. 試述胰島素的結(jié)構(gòu)及作用？胰島素（insulin）為含51個(gè)氨基酸殘基的小分子蛋白質(zhì)，分子量5808，由含有21個(gè)氨基酸的A鏈和含有30個(gè)氨基酸的B鏈借助2個(gè)二硫鍵聯(lián)結(jié)而成。胰島素是促進(jìn)合成代謝、維持血糖正常水平的主要激素。1）對(duì)糖代謝的影響 胰島素加速全身組織，特別是肝臟、肌肉和脂肪組織攝取和利用葡萄糖，促進(jìn)肝糖原和肌糖原的合成，抑制糖異生，從而使血糖降低。 2）對(duì)脂肪代謝的影響 胰島素可促進(jìn)脂肪的合成與儲(chǔ)存，促進(jìn)葡萄糖進(jìn)

27、入脂肪細(xì)胞，合成甘油三酯和脂肪酸。胰島素還抑制脂肪酶的活性，減少脂肪的分解。3）對(duì)蛋白質(zhì)代謝的影響 胰島素可促進(jìn)氨基酸進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)；促進(jìn)脫氧核糖核酸、核糖核酸和蛋白質(zhì)的合成；抑制蛋白質(zhì)的分解。由于能促進(jìn)蛋白質(zhì)合成，所以胰島素對(duì)機(jī)體的生長(zhǎng)有調(diào)節(jié)作用，但需與生長(zhǎng)素共同作用，促生長(zhǎng)效果才顯著。 29. 核酸類藥物有哪些？核酸類藥物包括：核酸、核苷酸、核苷、堿基及其衍生物。第一類為具有天然結(jié)構(gòu)的核酸類物質(zhì)，有助于改善機(jī)體的物質(zhì)代謝和能量平衡，加速受損組織的修復(fù)，促進(jìn)缺氧組織恢復(fù)正常生理機(jī)能。臨床上用于放射病，血小板減少癥，急慢性肝炎，心血管疾病，肌肉萎縮等代謝障礙。如肌苷，ATP，輔酶A，脫氧核苷酸，肌

28、苷酸等 第二類為自然結(jié)構(gòu)堿基、核苷、核苷酸結(jié)構(gòu)的類似物或聚合物，這一類核酸類藥物是當(dāng)今治療病毒，腫瘤，艾滋病得重要手段，也是產(chǎn)生干擾素、免疫抑制的臨床藥物。30. 酶類藥物的結(jié)晶方法有哪些？1）鹽析法2）有機(jī)溶劑法3）復(fù)合結(jié)晶法4）透析平衡5）等電點(diǎn)法31. 什么是尿激酶，尿激酶有什么作用？ 尿激酶（ urokinase， UK），具有激活纖溶酶原（Pfasmingen）轉(zhuǎn)變?yōu)槔w溶酶（Plasmin）進(jìn)而產(chǎn)生纖維蛋白溶解作用的一種蛋白水解酶。32. 簡(jiǎn)述肝素結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及制造過程？ 肝素作為一種重要的生化藥物，是一簇酸性粘多糖化合物的統(tǒng)稱，它是由已糖醛酸(L-艾杜糖醛酸、葡萄糖醛酸）與硫酸氨基葡

29、萄糖分子以一定的比例交替聯(lián)結(jié)形成的具有六糖或八糖單位的線型鏈狀大分子，提?。喝⌒迈r腸黏膜投入反應(yīng)鍋內(nèi)，按3加入NaCl，用30NaOH調(diào)pH90，于5355保溫提取2h。繼續(xù)升溫至95，維持10min，冷卻至50以下，過濾，收集濾液。吸附：加入714強(qiáng)堿性C1-型樹脂，樹脂用量為提取液的2。攪拌吸附8h，靜置過夜。洗滌：收集樹脂，用水沖洗至洗液澄清，濾干，用2倍量1.4molL NaCl攪拌2h，濾干。洗脫：用2倍量3molLNaCl攪拌洗脫8h，濾干，再用1倍量3mo1LNaCl攪拌洗脫2h，濾干。 沉淀：合并濾液，加入等量95乙醇沉淀過夜。收集沉淀，丙酮脫水，真空干燥得粗品。精制：粗品肝素

30、溶于15倍量1NaCl，用6molL鹽酸調(diào)pH1.5左右，過濾至清，隨即用5molLNaOH調(diào)pH11.0，按3用量加入H2O2(濃度30)，25放置。維持pH11.0，第2天再按1量加入H2O2，調(diào)整pH11.0，繼續(xù)放置，共48h，用6molL鹽酸調(diào)pH6.5，加人等量的95乙醇，沉淀過夜。收集沉淀，經(jīng)丙酮脫水真空干燥，即得肝素鈉精晶。33. 簡(jiǎn)述甾類激素藥物的分類及其生理作用？ 根據(jù)其生理活性可分為腎上腺皮質(zhì)激素、性激素和蛋白同化激素三大類。腎上腺皮質(zhì)激素按其生理功能，又可分為糖皮質(zhì)激素和鹽皮質(zhì)激素兩大類。以可的松(conisonc)和氫化可的松(hydrocoritsonc)為代表的糖

31、皮質(zhì)激素是由腎上腺束狀帶細(xì)胞所合成和分泌，主要影響人體的糖、蛋白質(zhì)和脂肪的代謝，而對(duì)水、鹽的代謝作用影響較小。臨床上主要用于抗炎、抗過敏等。以醛甾酮和去氧皮甾酮為代表的鹽皮質(zhì)激素是由腎上腺的球狀帶細(xì)胞所分泌，主要作用是促進(jìn)鈉離子由腎小管的重吸收，從而使鈉的排泄量減少，促進(jìn)鉀的排泄。臨床上主要用于治療慢性腎上腺皮質(zhì)機(jī)能減退癥(阿狄森病)及低血鈉癥。性激素按生理功能分為雄性激素和雌性激素兩大類。性激素的重要生理功能是刺激副性器官的發(fā)育和成熟，激發(fā)副性特性的出現(xiàn)，增進(jìn)兩性生殖細(xì)胞結(jié)合和孕育能力，還有調(diào)節(jié)代謝作用。蛋白同化激素其主要作用有：促進(jìn)蛋白質(zhì)合成和抑制蛋白質(zhì)異化；加速骨組織鈣化和生長(zhǎng)；刺激骨髓

32、造血功能，增加紅血球量；促進(jìn)組織新生和肉芽形成；降低血膽甾醇。臨床上用于與上述作用相應(yīng)的病癥。34. 試比較人工自動(dòng)免疫與人工被動(dòng)免疫的主要特點(diǎn)？35. 基因工程乙肝疫苗表達(dá)細(xì)胞有哪些？1、重組酵母乙肝疫苗(YDV)，指在酵母表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的HBV包膜蛋白疫苗。2、重組中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞乙肝疫苗，指在CHO細(xì)胞中表達(dá)的HBV包膜蛋白疫苗。該疫苗免疫原性強(qiáng)，抗原純化簡(jiǎn)單，適于大規(guī)模生產(chǎn)。3、c127乙肝疫苗(Hepagene)是由英國(guó)Medeva公司采用鼠c127純系細(xì)胞株表達(dá)的一種含Pre-S1,Pre-S2及S抗原成分的新型乙肝疫苗。 36. 核酸疫苗有哪些特點(diǎn)？()免疫保護(hù)力增強(qiáng)：接種后蛋白質(zhì)在宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，直接與組織相容性復(fù)合物MHCI 或II類分子結(jié)合，同時(shí)引起細(xì)胞和體液免疫，對(duì)慢性病毒感染性疾病等依賴細(xì)胞免疫清除病原的疾病的預(yù)防更加有效。()  制備簡(jiǎn)單，省時(shí)省力：核酸疫苗作為一種重組質(zhì)粒，易在工程菌內(nèi)大量擴(kuò)增，提純方法簡(jiǎn)單，可制備多價(jià)核酸疫苗。 ()  同種異株交叉保護(hù)：這是基因疫苗的最大優(yōu)點(diǎn)之一。在制備基因疫苗時(shí)，可通過對(duì)基因表達(dá)載體所攜帶的靶基因進(jìn)行改造，從而選擇抗原決定簇。()  應(yīng)用較安全：接種核酸疫苗后，蛋白質(zhì)抗原在宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，