免疫檢驗(yàn)技術(shù)

1、免疫是機(jī)體識(shí)別和排斥抗原性異物，借以維持自身平衡和穩(wěn)定的一種生理功能。Ag是能刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)引起免疫應(yīng)答并能與免疫應(yīng)答產(chǎn)生的抗體或致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性反應(yīng)的物質(zhì)。免疫原性是抗原誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生免疫應(yīng)答的能力。免疫反應(yīng)性是抗原與抗體或致敏淋巴細(xì)胞特異性結(jié)合的能力，也叫反應(yīng)原性。同時(shí)具有免疫原性和免疫反應(yīng)性的物質(zhì)稱完全抗原，只有免疫反應(yīng)性而無免疫原性的物質(zhì)稱半抗原或不完全抗原。載體可以與半抗原結(jié)合，使半抗原具有免疫原性的物質(zhì)。構(gòu)成免疫原性應(yīng)具備的條件：1、異物性異種物質(zhì)，同種異體物質(zhì)，自身物質(zhì)（發(fā)生改變的自身物質(zhì)，胚胎時(shí)期未與活化免疫細(xì)胞充分接觸過的物質(zhì)）2、理化性狀分子大小，化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)3、其

2、他因素宿主的反應(yīng)性，免疫方式免疫的特異性是由抗原的特異性決定的，是由抗原分子表面的抗原決定簇決定的?？乖瓫Q定簇是抗原分子表面決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)，又稱表位。具有相同或相似的抗原決定簇的不同抗原互稱為共同抗原?？贵w（Ab）與共同抗原發(fā)生的反應(yīng)稱交叉反應(yīng)?？乖姆诸悾?、根據(jù)誘導(dǎo)免疫應(yīng)答性能分類：胸腺依賴性抗原（TD-Ag）胸腺非依賴性抗原（TI-Ag）超抗原（主要有內(nèi)源性和外源兩種）TD-AgTI-AgT細(xì)胞輔助需要不需要抗體類型IgGIgM細(xì)胞免疫常引起不引起免疫記憶有無表位性質(zhì)T/B細(xì)胞表位B細(xì)胞表位外源性抗原指由非APC產(chǎn)生，需由APC攝取、加工并與HLA-分子結(jié)合成復(fù)合物提呈給T

3、細(xì)胞的抗原。內(nèi)源性抗原指由免疫效應(yīng)細(xì)胞的靶細(xì)胞自身產(chǎn)生、可以與細(xì)胞表面HLA-分子結(jié)合并提呈給細(xì)胞毒性T細(xì)胞的抗原。醫(yī)學(xué)上重要的抗原物質(zhì)：一、異種抗原1、病原生物體2、細(xì)菌外毒素和類毒素3、動(dòng)物的免疫血清（免疫二重性）二、異嗜性抗原（存在不同種系生物間的共同抗原），其醫(yī)學(xué)意義有：1、通過交叉反應(yīng)導(dǎo)致免疫損傷和疾病2、借助異嗜性抗原的檢測(cè)進(jìn)行某些臨床疾病的診斷三、同種異型抗原1、血型抗原（ABO血型，RH血型）2、主要組織相容性抗原 組織相容性指不同個(gè)體間進(jìn)行器官移植時(shí)供者與受者之間相互接受的程度。能引起強(qiáng)而迅速排斥反應(yīng)的稱主要組織相容性抗原（MHA），作為一個(gè)抗原系統(tǒng)又稱主要組織相容性系統(tǒng)（M

4、HS），其編碼基因稱主要組織相容性復(fù)合體(MHC),人類的MHA首先在人的外周血白細(xì)胞表面發(fā)現(xiàn)，又稱人類白細(xì)胞抗原（HLA），其編碼基因?yàn)镠LA基因或HLA復(fù)合體。HLA復(fù)合體位于第6號(hào)染色體短臂上（6P）。HLA的醫(yī)學(xué)意義：1、 控制機(jī)體組織相容性，參與移植排斥反2、 參與免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)和調(diào)控3、 HLA與某些疾病的發(fā)生相關(guān)（強(qiáng)直性脊柱炎患者攜帶HLA-B27抗原）四、自身抗原：1、隱蔽的自身抗原，如腦組織、眼晶體蛋白、甲狀腺球蛋白及精子等。2、修飾性自身抗原，正常的自身物質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化而成為自身抗原。 五、腫瘤抗原（是細(xì)胞在癌變過程中出現(xiàn)的新抗原及過度表達(dá)的抗原物質(zhì)的總稱）1、腫瘤特異性抗

5、原（TSA），腫瘤細(xì)胞特有的，例如黑色素瘤。2、腫瘤相性關(guān)抗原（TAA）是指腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞都具有，但前者多過后者。主要包括胚胎抗原【如肝細(xì)胞癌變時(shí)產(chǎn)生的甲胎蛋白(AFP)，結(jié)腸癌細(xì)胞產(chǎn)生的癌胚抗原（CEA）】分化抗原【各種類型的白細(xì)胞分化抗原可作為白血病的診斷標(biāo)志】過度表達(dá)的癌基因產(chǎn)物中樞免疫器官是免疫細(xì)胞發(fā)生、分化和成熟的場(chǎng)所。包括骨髓和胸腺，禽類的還有法氏囊。骨髓是造血器官，也是各種免疫細(xì)胞的發(fā)源地。骨髓功能障礙時(shí)，則導(dǎo)致整體免疫功能障礙，骨髓移植可引起移植抗宿主反應(yīng)。胸腺是T細(xì)胞分化成熟的場(chǎng)所。新生動(dòng)物摘除胸腺，可引起嚴(yán)重的細(xì)胞免疫缺陷和整體免疫功能降低。外周免疫器官是免疫細(xì)胞定居、

6、增殖及產(chǎn)生免疫應(yīng)答的場(chǎng)所，包括淋巴結(jié)、脾、黏膜及皮膚相關(guān)淋巴組織等。淋巴結(jié)淺皮質(zhì)區(qū)是B細(xì)胞定居部位，稱非胸腺依賴區(qū)。深皮質(zhì)區(qū)是T細(xì)胞定居部位，又稱胸腺依賴區(qū)。淋巴結(jié)在免疫過程中除作為免疫應(yīng)答的場(chǎng)所外，還具有過濾、凈化淋巴液和儲(chǔ)備淋巴細(xì)胞的作用。脾是人體最大的外周免疫器官。脾實(shí)質(zhì)由紅髓和白髓組成，白髓是B/T淋巴細(xì)胞的寄居部位。脾的免疫功能主要是過濾、凈化血液和儲(chǔ)備淋巴細(xì)胞，是淋巴細(xì)胞增殖、產(chǎn)生抗體、發(fā)生免疫應(yīng)答的重要場(chǎng)所。黏膜及皮膚相關(guān)的淋巴組織（主要存在呼吸道、消化道及泌尿生殖及黏膜下散在的無被膜的淋巴組織，如扁桃體、闌尾和小腸集合淋巴結(jié)等）淋巴細(xì)胞再循環(huán)生物學(xué)意義：1.參與淋巴細(xì)胞庫更新2

7、.使淋巴細(xì)胞在淋巴組織和器官分布更為合理3.有利于淋巴細(xì)胞與抗原和APC接觸免疫細(xì)胞指參與免疫應(yīng)答或與免疫應(yīng)答有關(guān)的細(xì)胞。淋巴細(xì)胞是免疫系統(tǒng)主要細(xì)胞，可分為T/B/NK細(xì)胞，其中T/B又稱免疫活性細(xì)胞。T細(xì)胞的表面分子及其作用：1、 T細(xì)胞抗原受體：又稱T細(xì)胞受體（TCR），表達(dá)于所有成熟T細(xì)胞膜的表面，是T細(xì)胞特有的表面標(biāo)志。2、 分化群抗原(CD) ：T細(xì)胞膜表面許多分子屬于白細(xì)胞分化抗原。白細(xì)胞分化抗原指血細(xì)胞在分化成熟為不同譜系、不同階段及細(xì)胞活化過程中出現(xiàn)或消失的細(xì)胞表面分子。目前將來源于不同實(shí)驗(yàn)室的單克隆抗體所識(shí)別的同一抗原稱為分化抗原，也稱CD分子。T細(xì)胞表面主要的CD抗原有：1

8、. CD2 為綿陽紅細(xì)胞受體（E受體），表達(dá)于所以T和NK細(xì)胞表面。E花環(huán)實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)數(shù)量。2. CD3 為抗原活化信息轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，表達(dá)于全部T細(xì)胞表面，是T細(xì)胞的特征性標(biāo)志。3. CD4和CD8 為T細(xì)胞的輔助識(shí)別受體，能穩(wěn)定TCR與抗原肽-MHC分子的結(jié)合，輔助T細(xì)胞的活化。4. CD28 與T細(xì)胞功能相關(guān)，如缺乏協(xié)同刺激信號(hào)將導(dǎo)致T細(xì)胞無能。5. CD40L 為協(xié)調(diào)刺激分子CD40的配體，能促使B細(xì)胞充分活化，形成漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體。T細(xì)胞亞群及其主要功能：分為輔助性T細(xì)胞（Th）、細(xì)胞毒性T細(xì)胞（Tc）和抑制性T細(xì)胞（Ts）Th細(xì)胞為CD4+T細(xì)胞，通常識(shí)別APC表面與MHC類分子結(jié)合的抗原，

9、活化后分泌細(xì)胞因子。可分為Th1細(xì)胞（主要分泌白介素，腫瘤壞死因子，主要抗胞內(nèi)寄生微生物）Th2細(xì)胞（主要抗胞外寄生微生物）Th3細(xì)胞（抑制Th誘導(dǎo)免疫應(yīng)答）Tc細(xì)胞為CD8+T細(xì)胞。Tc細(xì)胞識(shí)別靶細(xì)胞表面與MHC類分子結(jié)合的抗原，釋放穿孔素和顆粒酶，能特異性溶解靶細(xì)胞。Ts細(xì)胞也屬于CD8+T細(xì)胞，能分泌細(xì)胞因子，抑制免疫應(yīng)答。B細(xì)胞主要膜表面分子及作用：1. B細(xì)胞抗原受體（BCR）又稱膜免疫球蛋白（mIg）.2. CD403. 補(bǔ)體受體（CR）4. Fc受體，B細(xì)胞表面主要有IgG-Fc受體5. MHC分子：B細(xì)胞表達(dá)MHC類和MHC類分子，參與B細(xì)胞的抗原提呈過程。6. 絲裂原受體B細(xì)

10、胞的亞群及功能：根據(jù)是否表達(dá)CD5可分為B1（CD5+細(xì)胞）和B2。B1細(xì)胞不需要T細(xì)胞輔助，產(chǎn)生IgM類抗體。B2細(xì)胞需要T細(xì)胞輔助，IgG類抗體，B2細(xì)胞還具有提呈抗原和參與免疫調(diào)節(jié)的作用。自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）抗原提呈細(xì)胞（APC）：具有攝取、加工、處理抗原，并將有效的抗原肽提呈給特異性淋巴細(xì)胞的功能。專職APC細(xì)胞主要有樹突狀細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞和B細(xì)胞；非專職有成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等。免疫分子：凡參與免疫應(yīng)答的體液因子，主要包括免疫球蛋白、補(bǔ)體和細(xì)胞因子等。細(xì)胞因子（CK）是由機(jī)體多種細(xì)胞分泌的具有多種生物活性的小分子蛋白質(zhì)的總稱。細(xì)胞因子的共同特性：1. 低分子量2. 自分泌

11、和旁分泌3. 高效性4. 多源性5. 多效性與重疊性6. 協(xié)調(diào)性細(xì)胞因子根據(jù)其功能不同分為白細(xì)胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子、集落刺激因子等。1. 白細(xì)胞介素（IL）2. 干擾素（IFN） 具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用。3. 腫瘤壞死因子（TNF）細(xì)胞因子的生物學(xué)活性：1. 抗菌作用2. 抗病毒作用3. 介導(dǎo)炎癥反應(yīng)4. 調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答5. 促進(jìn)造血6. 參與全身的神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)調(diào)控抗體（Ab）指機(jī)體在抗原刺激下產(chǎn)生可結(jié)合相應(yīng)抗原的球蛋白。具有抗體活性及化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白統(tǒng)稱為免疫球蛋白（Ig）?？贵w側(cè)重生物學(xué)及功能含義，免疫球蛋白側(cè)重于化學(xué)及結(jié)構(gòu)含義。免疫球蛋白的基本結(jié)構(gòu)，兩

12、條重鏈（H）和兩條輕鏈（L）以二硫鍵連在一起。結(jié)構(gòu)分區(qū)，可變區(qū)（V區(qū)）在肽鏈N端，在L鏈1/2和H鏈1/4處。重鏈的V區(qū)和輕鏈的V區(qū)各有3個(gè)區(qū)域的氨基酸組成和排列順序特別容易變化，這些區(qū)域成為超變區(qū)或高變區(qū)。V區(qū)中其他氨基酸殘基稱骨架區(qū)或構(gòu)架區(qū)。重鏈的分類：-IgM、-IgG、-IgA、-IgD、-IgE輕鏈分型：分為兩型，鏈與鏈。同一免疫球蛋白分子的兩條鏈總是同型的。正常人血清中的：=2:1鉸鏈區(qū)不是一個(gè)獨(dú)立的功能區(qū)，位于CH1和CH2之間，含有豐富的脯氨基，富有彈性，柔軟，易發(fā)生伸展及一定程度轉(zhuǎn)動(dòng)。其功能發(fā)生扭曲，從T到Y(jié)的構(gòu)型改變。免疫球蛋白的水解片段:用木瓜蛋白酶可使免疫球蛋白與鉸鏈區(qū)

13、重鏈間二硫鍵近N端處斷開，形成3個(gè)水解片段，兩個(gè)相同的單價(jià)抗原片段，稱Fab段；一個(gè)可形成結(jié)晶的片段，稱Fc段。用胃蛋白酶可使免疫球蛋白于鉸鏈區(qū)間二硫鍵近C端處斷開。形成一個(gè)具有與抗原雙價(jià)結(jié)合的片段F(ab)2段和無生物活性的小分子多肽碎片（pFc）免疫球蛋白的血清型：1. 同種型2. 同種異型3. 獨(dú)特型 存在于可變區(qū)的抗原特異性稱獨(dú)特型。獨(dú)特型可刺激自身產(chǎn)生抗獨(dú)特型抗體，與免疫調(diào)節(jié)有關(guān)?？贵w的生物學(xué)活性：1. 特異性結(jié)合抗原2. 激活補(bǔ)體3. 促吞噬作用4. 協(xié)助NK細(xì)胞發(fā)揮細(xì)胞的作用5. 結(jié)合葡萄球菌A蛋白（SPA）6. 結(jié)合肥大細(xì)胞誘發(fā)1型超敏反應(yīng)7. 穿過胎盤和腔道黏膜免疫球蛋白G血

14、清中IgG含量最高，有免疫主力軍之稱。具有促進(jìn)吞噬，中和毒素和中和病毒，介導(dǎo)NK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞、激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑，唯一一個(gè)能通過胎盤的免疫球蛋白，分子量是五類Ig中最小的，合成速度快，分解慢，半衰期長（約3周）免疫球蛋白AIgA有血清型和分泌型。血清型是單體，免疫作用弱。分泌型（SIgA）是雙體，其結(jié)合價(jià)是4價(jià)，通常由兩個(gè)IgA單體、一個(gè)連接鏈（J鏈）和一個(gè)分泌片（SP）組成，存在于初乳、唾液等。發(fā)揮局部免疫作用。 免疫球蛋白MIgM為五聚體，結(jié)合價(jià)為5價(jià)。分子量最大，是抗原刺激后最早出現(xiàn)的，消失快，半衰期約5天，檢測(cè)IgM，有助于早期和近期感染診斷。單體為膜結(jié)合型，是構(gòu)成B細(xì)胞抗原受體的主要

15、成分。 免疫球蛋白DIgD為單體。膜結(jié)合型，是B細(xì)胞膜抗原受體先出現(xiàn)mIgM，后出現(xiàn)mIgD，后者是B淋巴細(xì)胞分化成熟的標(biāo)志。血清中IgD含量低。免疫球蛋白EIgE含量最低，其Fc段可結(jié)合肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞，誘發(fā)1型超敏反應(yīng)，又稱親細(xì)胞抗體。補(bǔ)體（C）是存在于正常人和脊椎動(dòng)物新鮮血清中的一組經(jīng)活化后具有酶活性的球蛋白。補(bǔ)體系統(tǒng)各固有成分分別由肝細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、小腸上皮細(xì)胞及脾細(xì)胞等產(chǎn)生，各成分中C3含量最高，其次C4，D因子含量最低。經(jīng)典激活途徑，只有抗體結(jié)合抗原的復(fù)合物才能激活C1q從而啟動(dòng)激活過程。補(bǔ)體三天激活途徑的比較經(jīng)典激活途徑MBL激活途徑替代激活途徑激活物質(zhì)抗原抗體復(fù)合物（Ig

16、G、IgM）MBL、C反應(yīng)蛋白細(xì)菌脂多糖、酵母多糖、聚合的IgG4、IgA起始分子C1q絲氨酸蛋白酶MASPC3參與補(bǔ)體成分C1-C9C2-C9C3-C9、B、D因子所需離子鎂、鈣鈣鎂C3轉(zhuǎn)化酶C4b2aC4b2aC3bBbC5轉(zhuǎn)化酶C4b2a3bC4b2a3bC3bBb3b生物學(xué)作用參與特異性免疫，在感染后期發(fā)揮作用參與非特異性免疫，在感染早期發(fā)揮作用參與非特異性免疫，在感染早期發(fā)揮作用補(bǔ)體成分及其裂解產(chǎn)物的生物學(xué)活性生物學(xué)作用參與成分作用機(jī)制溶菌、殺菌、溶細(xì)胞C1-C9形成膜攻擊復(fù)合物，使靶細(xì)胞通透性改變。胞內(nèi)物質(zhì)逸出，細(xì)胞溶解中和病毒C1、C4阻止病毒對(duì)宿主細(xì)胞的吸附，破壞病毒包膜調(diào)理作

17、用C3b、C4b與免疫復(fù)合物結(jié)合的C3b、C4b與吞噬細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合，促進(jìn)吞噬作用免疫黏附C3b、C4b免疫復(fù)合物通過C3b、C4b黏附到有相應(yīng)受體的紅細(xì)胞、血小板等表面，促進(jìn)免疫復(fù)合物的清除過敏毒素作用C3a、C5a刺激肥大細(xì)胞等釋放活性介質(zhì)，增加毛細(xì)血管的通透性，引起血管擴(kuò)張，平滑肌收縮趨化作用C3a、C5a、C5b67能引起吞噬細(xì)胞向炎癥部位移動(dòng)激肽樣作用C2a、C4a增強(qiáng)血管通透性，引起炎癥性充血患惡性腫瘤時(shí)C3和C4含量可顯著增高補(bǔ)體含量降低的原因有：1.補(bǔ)體消耗過多2.補(bǔ)體大量丟失（多見于大面積燒傷、外傷）3.補(bǔ)體合成不足（肝病患者）免疫應(yīng)答指機(jī)體免疫系統(tǒng)接受抗原刺激后所產(chǎn)

18、生的以排除抗原、維持內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定為目的的反應(yīng)過程。非特異性的第一道防線：皮膚、黏膜、纖毛第二道防線：溶菌酶、吞噬細(xì)胞第三道防線：免疫應(yīng)答非特異性免疫亦稱天然免疫，是機(jī)體長期的種系發(fā)育和進(jìn)化過程中逐步建立和完善起來的抵抗病原微生物感染的防御能力。非特異性免疫的構(gòu)成因素有：一、 組織屏障作用1. 皮膚和黏膜屏障2. 血-腦脊液屏障3. 胎盤屏障二、 吞噬和細(xì)胞毒作用1. 吞噬作用2. 細(xì)胞毒作用三、 正常體液中非特異免疫分子的作用1. 補(bǔ)體系統(tǒng)2. 溶菌酶（作用于革蘭陽性菌細(xì)胞壁）3. 乙型溶素（作用于革蘭陽性菌細(xì)胞膜）特異性免疫應(yīng)答的基本過程：一、 感應(yīng)階段（抗原識(shí)別階段）二、 反應(yīng)階段（淋巴細(xì)胞活化階段）三、 效應(yīng)階段（抗原清除階段）細(xì)胞免疫應(yīng)答是T細(xì)胞接受抗原刺激后，增殖分化為效應(yīng)T細(xì)胞，當(dāng)再次接觸相同抗原時(shí)，通過釋放多種細(xì)胞因子或直接殺傷靶細(xì)胞來完成的特異性免疫應(yīng)答，又稱T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。感應(yīng)階段的雙識(shí)別：TCR與APC識(shí)別 CD4與MHC識(shí)別反應(yīng)階段的雙信號(hào)：抗原識(shí)別信號(hào) CD28分子和APC表面配體B7分子細(xì)胞免疫應(yīng)答的特點(diǎn)與生物學(xué)意義：特點(diǎn)：1.反應(yīng)遲緩2.反應(yīng)局限3.常伴有遲發(fā)型超敏反應(yīng)意義：1.抗胞內(nèi)感染作用2.抗腫瘤免疫3.參與移植排斥反應(yīng)4.免疫損傷作用體液免疫應(yīng)答指B細(xì)胞接受抗原刺激后，增殖分化為漿細(xì)胞，合成并分泌抗體