食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)

1、食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)二v菌落總數(shù)測定之一：檢樣稀釋及培養(yǎng)。v大腸菌群測定之一：檢樣稀釋和乳糖發(fā)酵試驗(yàn)。v實(shí)驗(yàn)流程：檢樣制成十倍、百倍和千倍稀釋液。各取1ml稀釋液分別加入2個(gè)滅菌平皿內(nèi)和3支10ml乳糖膽鹽發(fā)酵管中。平皿注入46營養(yǎng)瓊脂約15ml立即轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，充分混合均勻 靜置待瓊脂凝固 翻轉(zhuǎn)平板培養(yǎng)。菌落總數(shù)的檢驗(yàn)程序檢樣做成幾個(gè)適當(dāng)倍數(shù)的稀釋液選擇2個(gè)3個(gè)適宜稀釋度各取1ml分別加入滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)每皿內(nèi)加入適量營養(yǎng)瓊 36148h2h菌落計(jì)數(shù)報(bào)告大腸菌群檢驗(yàn)程序大腸菌群檢驗(yàn)程序 檢樣 稀釋 乳糖膽鹽發(fā)酵管, 361， 24h2h 不產(chǎn)氣 產(chǎn)氣 大腸菌群陰性 伊紅美藍(lán)瓊脂平板,361，24h

2、2h 報(bào)告 革蘭染色 乳糖發(fā)酵管,361，24h2h 革蘭陽性 革蘭陰性無芽胞桿菌 產(chǎn)氣 不產(chǎn)氣 大腸菌群陰性 大腸菌群陽性 大腸菌群陰性 報(bào)告 報(bào)告 報(bào)告菌落總數(shù)v依據(jù)檢驗(yàn)規(guī)范中檢驗(yàn)菌落總數(shù)的條件,不能檢測出檢樣中實(shí)際的活菌數(shù)。因?yàn)閰捬蹙⑽⑿柩蹙?、嗜冷或嗜熱菌以及有特殊營養(yǎng)要求的細(xì)菌,在此條件下不能生長或不能很好地生長。v用目前檢驗(yàn)規(guī)范方法所獲得的結(jié)果,只包括一群能在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上生長發(fā)育的嗜中溫的需氧或兼性厭氧的細(xì)菌菌落總數(shù),它必然低于實(shí)際存在的活菌數(shù)。v菌落總數(shù)是用來判定檢樣被細(xì)菌污染程度的指示菌。不能表明污染菌的種類和來源。檢測菌落總數(shù)注意事項(xiàng)v做菌落總數(shù)檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)接種一空白平皿作對

3、照,以檢驗(yàn)培養(yǎng)基、器皿和稀釋液的滅菌效果。v吸管進(jìn)出瓶子或試管時(shí)，吸管口不得觸及瓶口、管口的外圍部分。v作樣品稀釋時(shí),應(yīng)小心沿管壁加入,不要觸及管內(nèi)稀釋液,以防吸管尖端外側(cè)部分粘附的檢液混入其中。v為防止產(chǎn)生片狀菌落,在檢樣加入平皿后,應(yīng)于20 min內(nèi)向皿內(nèi)傾入營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,并立即混合均勻。v皿內(nèi)瓊脂完全凝固后,不要長久放置才翻轉(zhuǎn)培養(yǎng),而應(yīng)于瓊脂完全凝固后,在數(shù)分鐘內(nèi)將平皿翻轉(zhuǎn)進(jìn)行培養(yǎng),這樣可避免菌落蔓延生長。 大腸菌群v檢驗(yàn)大腸菌群通常用定量方法,只有在標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定不得檢出時(shí)用定性方法,常用的定性檢驗(yàn)方法為多管發(fā)酵法。v多管發(fā)酵法是檢驗(yàn)檢樣中大腸菌群公認(rèn)的傳統(tǒng)方法,其結(jié)果以最大可能數(shù)量(M

4、ost Probable Number MPN)來表示。它是根據(jù)概率公式得來,用來估計(jì)樣本中大腸菌群的密度。根據(jù)接種量和管數(shù)的不同,以100ml樣品中所含的大腸菌群細(xì)菌的最可能數(shù)作出報(bào)告。v單號(hào)組分別檢測1號(hào)標(biāo)本“屠宰場井水”。v雙號(hào)組分別檢測2號(hào)標(biāo)本“奶茶或豆?jié){”。v分別按P10“菌落總數(shù)測定”的檢樣稀釋及培養(yǎng)和P16“大腸菌群測定”的檢樣稀釋和乳糖發(fā)酵試驗(yàn)的方法進(jìn)行操作。v注意稀釋一份檢樣，分別做兩個(gè)實(shí)驗(yàn)。標(biāo)本混合均勻。使用無菌器材。嚴(yán)格無菌操作。 在操作之前，先作標(biāo)記。在平皿底部，225ml 生理鹽水瓶、中試管和10ml乳糖膽鹽發(fā)酵管的上2/3作標(biāo)記。例如1-1-1 表示第1組，1號(hào)標(biāo)本

5、，10倍稀釋。 10-2-3表示第10組，2號(hào)標(biāo)本，1000倍稀釋。v1.先用10ml刻度吸管分別（從100ml鹽水瓶中）吸取鹽水9ml加入中試管內(nèi)，每組2支，用來做百倍和千倍稀釋。v2.用10ml刻度吸管，吸取檢樣25ml，加入225ml生理鹽水中，充分振搖，制成1:10的均勻稀釋液。v3.用1ml刻度吸管分別吸取1:10稀釋液1ml,注入2個(gè)直徑9厘米無菌的空平皿內(nèi)，3支10ml乳糖膽鹽發(fā)酵管和一支標(biāo)有百倍稀釋的生理鹽水管中(注意：沿管壁徐徐注入, 吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液，下同） ，將百倍稀釋的生理鹽水管漩渦震蕩混合均勻。v4.換另一支1ml刻度吸管，按上述方法，分別吸取混合均勻的百倍

6、稀釋液1ml,注入2個(gè)平皿、3支乳糖膽鹽發(fā)酵管和1支標(biāo)有千倍稀釋的生理鹽水管中。v5.如此，依次作十倍、百倍、千倍的稀釋和加樣。 v6.在含有1ml標(biāo)本的9cm平皿中（待七個(gè)平皿均加樣后再操作），注入約15ml培養(yǎng)基，立即搖動(dòng)平皿，右三圈，左三圈，右三圈，讓培養(yǎng)基旋轉(zhuǎn)流動(dòng)、充分混合均勻。靜止放置2030分鐘，待瓊脂完全凝固。倒置平板，培養(yǎng)3648小時(shí)，觀察結(jié)果。 130ml營養(yǎng)培養(yǎng)基加熱溶解，待溫度降到5060，放47恒溫水浴箱中平衡溫度。225ml生理鹽水用于10倍稀釋，9ml生理鹽水用于百倍和千倍稀釋。25ml1ml1ml225ml生理鹽水稀釋倍數(shù)：101 102 103菌落數(shù)：多不可計(jì)

7、164 20 1641021.64104 CFU/ml待測樣品15ml培養(yǎng)基9ml生理鹽水1ml2個(gè) 1ml2個(gè) 1ml2個(gè)待測樣品225ml生理鹽水10ml乳糖膽鹽發(fā)酵管25ml1ml1ml稀釋倍數(shù)：10-1 102 1031ml3支1ml3支1ml3支9ml生理鹽水刻度吸管的無菌操作方法刻度吸管的無菌操作方法v吸球的選擇：無菌操作時(shí)，一般不使用洗耳球洗耳球。5毫升和10毫升刻度吸管用洗牙球洗牙球，1毫升刻度吸管套用合適的小吸球。v無菌操作方法：左手手指捏住吸管頭包裝紙?zhí)准s5厘米處，右手向前旋松紙?zhí)?、撕斷包裝紙頭，如果吸管頭部外測有棉花絮，應(yīng)該燒掉，然后套上吸球，以免連接部位漏氣。此時(shí)，包裝

8、紙?zhí)壮隹谔幰呀?jīng)污染。應(yīng)把包裝紙反向拉開，折出一個(gè)無菌傾斜出口無菌傾斜出口，退出吸管，管尖呈3040度角離開無菌包裝紙?zhí)?。v吸球的按壓程度，以按壓松開以后，能吸取110的液體為宜。這個(gè)按壓程度，很容易控制吸管中液體，移液過程中，也不會(huì)因?yàn)槭Э兀瑢ξ蜻^度加壓或減壓，液體就不會(huì)外流，空氣也不容易進(jìn)入吸管內(nèi)，這樣可以把污染降到最低程度。思考題v食品中微生物為何繁殖迅速、種類繁多？v食品被微生物污染后有哪些危害？v檢樣稀釋時(shí)，每個(gè)稀釋度都要更換刻度吸管，為什么？常用器材擺放順序：電源插座常用器材擺放順序：電源插座試管架試管架酒精燈酒精燈污物盤。污物盤。試管架上器材：靠近插座一側(cè)第試管架上器材：靠近插座一側(cè)第1