鉻超標明膠空心膠囊事件應(yīng)急檢驗方法答疑匯總

1、鉻超標明膠空心膠囊事件應(yīng)急檢驗方法鉻超標明膠空心膠囊事件應(yīng)急檢驗方法答疑匯總答疑匯總趙霞趙霞中國食品藥品檢定研究院中國食品藥品檢定研究院包裝材料與藥用輔料檢定所包裝材料與藥用輔料檢定所20122012年年4 4月月3030日日樣品前處理樣品測定數(shù)據(jù)分析試劑、標準品溶液配制一、樣品前處理一、樣品前處理1供試品溶液的制備中供試品取樣量供試品溶液的制備中供試品取樣量0.5g是是否過大否過大(可能導(dǎo)致消解罐壓力過大可能導(dǎo)致消解罐壓力過大,防爆膜破裂防爆膜破裂,使消解失敗使消解失敗)。答：答：取樣量不能再減少，否則樣品的代表性會降低。出現(xiàn)爆罐主要是預(yù)消解時間不夠，可采用預(yù)消解的方法解決爆罐問題。2樣品前

2、處理必須過夜嗎？樣品前處理必須過夜嗎？答：答：不一定，按照藥典方法操作需要過夜，如果不過夜的，需要作方法學驗證。 兩步消解的方法僅供參考兩步消解的方法僅供參考, 同時應(yīng)根據(jù)自身儀器設(shè)備情況適當改同時應(yīng)根據(jù)自身儀器設(shè)備情況適當改變條件：變條件：取樣品0.5g，置聚四氟乙烯消解罐中，加硝酸5ml，10030分鐘使溶解，補加硝酸2ml，加水1mL，待冷卻至室溫，加0.5ml氫氟酸，進行第一次微波消解（參考程序為10min升溫至120，保持5min，10min升溫至140，保持15min）。冷卻放氣（無需完全打開消解罐蓋，只需扭松即可）。隨后進行第二次消解（參考程序為10min升溫至150，保持5mi

3、n，10min升溫至185，保持15min）。冷卻后，加熱趕酸至1-2ml，純水定容至50ml，作為供試品溶液。一、樣品前處理一、樣品前處理一、樣品前處理一、樣品前處理3樣品是否需要粉碎，樣品的均勻性如何保證？樣品是否需要粉碎，樣品的均勻性如何保證？答：答：空心膠囊不需要粉碎，但應(yīng)成對稱取囊帽和囊 體后進行消解，由于囊帽和囊體鉻含量不同，進行粉碎后，樣品的均勻性無法保證。一、樣品前處理一、樣品前處理4消解過程中加氫氟酸會對檢測結(jié)果有影響嗎？消解過程中加氫氟酸會對檢測結(jié)果有影響嗎？答：答：某些明膠空心膠囊配方中加入了二氧化鈦遮光劑，僅加硝酸無法消解二氧化鈦，會產(chǎn)生消解液渾濁現(xiàn)象，故加入氫氟酸消解

4、，使供試品溶液澄清透明，但要進行方法學驗證。一、樣品前處理一、樣品前處理5消解過程中發(fā)現(xiàn)只加入消解過程中發(fā)現(xiàn)只加入10mL硝酸消解時，受消解過硝酸消解時，受消解過程中產(chǎn)生的氮氧化物影響消解罐容易變黃，影響下程中產(chǎn)生的氮氧化物影響消解罐容易變黃，影響下次使用。可加入硝酸后再加入適量的雙氧水（次使用?？杉尤胂跛岷笤偌尤脒m量的雙氧水（2-3mL）消化，能有效減少該現(xiàn)象的發(fā)生。消化，能有效減少該現(xiàn)象的發(fā)生。 經(jīng)驗證，加入雙經(jīng)驗證，加入雙氧水與不加相比，結(jié)果并無差異。氧水與不加相比，結(jié)果并無差異。答：答：在消解過程中是否加入雙氧水，以及加入體積需要進行必要的方法學驗證。同時，消解罐每次使用后，需經(jīng)酸浸泡

5、或加入硝酸空白消解清洗后方可使用。一、樣品前處理一、樣品前處理6藥典規(guī)定：消解完全后，置電熱板上緩緩加熱至紅藥典規(guī)定：消解完全后，置電熱板上緩緩加熱至紅棕色蒸氣揮盡并近干。在實際操作中如揮盡并近棕色蒸氣揮盡并近干。在實際操作中如揮盡并近干，易至炭化，不太好操作。建議明確加熱板的干，易至炭化，不太好操作。建議明確加熱板的溫度和時間，以加熱至紅棕色氣揮盡，或加熱至溫度和時間，以加熱至紅棕色氣揮盡，或加熱至殘留溶液的體積數(shù)。殘留溶液的體積數(shù)。答：答：中檢院目前采用的趕酸溫度在140150 左右，趕酸結(jié)束不應(yīng)以多長時間作為界限，而應(yīng)以消解罐中剩余液體大約12ml時作為停止時間。一、樣品前處理一、樣品前

6、處理7由于膠囊殼在消解時反應(yīng)劇烈，建議根據(jù)不由于膠囊殼在消解時反應(yīng)劇烈，建議根據(jù)不同品牌消解爐消解罐大小和承受壓力確定樣同品牌消解爐消解罐大小和承受壓力確定樣品取樣量、加熱的功率和時間。品取樣量、加熱的功率和時間。答：答：消解過程在藥典方法中未明確規(guī)定。各單位可根據(jù)現(xiàn)有儀器，對消解過程的完全性和安全性進行必要的驗證。并不需要完全相 同，指導(dǎo)原則中的消解條件僅供參考。二、樣品測定二、樣品測定8膠囊中鉻含量測定如何統(tǒng)一、規(guī)范的排除藥膠囊中鉻含量測定如何統(tǒng)一、規(guī)范的排除藥的干擾，保證各個實驗室的結(jié)果的一致。的干擾，保證各個實驗室的結(jié)果的一致。答：答：排除藥物的干擾，即必須將膠囊劑樣品中的內(nèi)容物清除干

7、凈。可參照中國藥典2010年版（二部）附錄IE膠囊劑的裝量差異項下操作。二、樣品測定二、樣品測定9由于鉻的原子化溫度較高，對石墨爐原子吸收分由于鉻的原子化溫度較高，對石墨爐原子吸收分光光度計使用的石墨管損壞較大，建議根據(jù)檢測情光光度計使用的石墨管損壞較大，建議根據(jù)檢測情況及時采取相應(yīng)的措施（如測定況及時采取相應(yīng)的措施（如測定5個樣品左右后插入個樣品左右后插入標準溶液進行校正，標準溶液進行校正，10個樣品左右重新測定標準曲個樣品左右重新測定標準曲線，根據(jù)檢測情況及時更換石墨管）。線，根據(jù)檢測情況及時更換石墨管）。答：答：同意上述觀點，建議每測定510份樣品后，測定質(zhì)控樣品，如果質(zhì)控樣品變化較大，

8、則需要重新測定標準曲線。二、樣品測定二、樣品測定10原子化階段，在原子化階段，在2400，峰出現(xiàn)拖尾，如，峰出現(xiàn)拖尾，如何解決？何解決？答：答：原子吸收測定的是峰高，出現(xiàn)拖尾并不影響峰高的測量，但要注意測量后基線是否能夠恢復(fù)到以前的水平，如果基線不能恢復(fù)，則應(yīng)進行石墨管的空燒，以防止石墨管污染。二、樣品測定二、樣品測定11石墨爐測試條件的灰化溫度過低石墨爐測試條件的灰化溫度過低(有資料顯示不加有資料顯示不加基體改進劑時灰化溫度應(yīng)達到基體改進劑時灰化溫度應(yīng)達到1200)，且原子，且原子化溫度也過低化溫度也過低(有資料顯示原子化溫度應(yīng)達到有資料顯示原子化溫度應(yīng)達到2500)原子化不完全，造成記憶效

9、應(yīng)不易消除，原子化不完全，造成記憶效應(yīng)不易消除，使結(jié)果重現(xiàn)性較差。使結(jié)果重現(xiàn)性較差。答：答：原子化溫度過低，確實會影響測定結(jié)果；原子化溫度過高，又會影響到石墨管的壽命。因此需要根據(jù)不同的儀器，優(yōu)化后，確定實驗的參數(shù)。二、樣品測定二、樣品測定12怎樣解決樣品測定中出現(xiàn)重現(xiàn)性、精密性怎樣解決樣品測定中出現(xiàn)重現(xiàn)性、精密性差的問題？差的問題？答：答：測量過程中重復(fù)性大多跟實驗人員的操作有關(guān)，建議加強對實驗操作人員的培訓(xùn)，測量精密度差的問題多與儀器狀態(tài)有關(guān)，建議更換石墨管，重新檢測。二、樣品測定二、樣品測定13如何消除儀器的記憶效應(yīng)？如何消除儀器的記憶效應(yīng)？答：答：為了防止高濃度樣品溶液造成的記憶效應(yīng)，

10、做完高濃度樣品后，應(yīng)在進行下一個樣品測定前干燒石墨爐體，以保證下一個樣品的準確性。二、樣品測定二、樣品測定14回收率：參照食品檢驗，做方法學研究時，回收率：參照食品檢驗，做方法學研究時，設(shè)高、中、低三個濃度：定量限為低點、設(shè)高、中、低三個濃度：定量限為低點、定量限的定量限的10倍為高點、限度附近為中點；倍為高點、限度附近為中點；做隨行回收率時只做限度附近一個點，是做隨行回收率時只做限度附近一個點，是否可行？建議明確隨行回收率的具體做法。否可行？建議明確隨行回收率的具體做法。答：答：方法回收率為高中低三個濃度，以2ppm濃度為中間濃度，隨行回收率僅取限度濃度即可。二、樣品測定二、樣品測定15檢測

11、時，需隨行回收試驗嗎？檢測時，需隨行回收試驗嗎？答：答：在ppm水平進行檢測時，試劑及實驗操作都可能對檢測造成干擾，因此建議每次進行消解時，進行隨行回收試驗，控制隨機誤差，保證數(shù)據(jù)的可靠性。二、樣品測定二、樣品測定16對定量限的定義不明確，會造成不同的判對定量限的定義不明確，會造成不同的判別結(jié)果。別結(jié)果。答：答：指導(dǎo)原則中提到的定量限為最低要求，即為標準曲線的第一個濃度點。二、樣品測定二、樣品測定17由于鉻含量測定屬微量元素檢查，實驗室環(huán)境和由于鉻含量測定屬微量元素檢查，實驗室環(huán)境和人員操作均可能對樣品帶來污染。建議添加紫人員操作均可能對樣品帶來污染。建議添加紫菜等標準品作為參考物質(zhì)，減少僅有

12、鉻作為加菜等標準品作為參考物質(zhì)，減少僅有鉻作為加樣回收可能帶來的試驗評價誤差。樣回收可能帶來的試驗評價誤差。答：答：回收實驗一般能夠較好的反應(yīng)測定誤差，如果能夠有質(zhì)控樣品隨行測定，對結(jié)果更有保證。但必須考慮到紫菜等標準物質(zhì)與膠囊樣品的基質(zhì)差異很大，在經(jīng)過必要對比試驗，證明不存在基質(zhì)干擾情況下，可以采用質(zhì)控樣品代替隨行回收實驗。三、數(shù)據(jù)分析三、數(shù)據(jù)分析18藥典中標準曲線鉻的最高濃度為藥典中標準曲線鉻的最高濃度為80ng/ml，已經(jīng)超出了原子吸收光度計的量程，是否已經(jīng)超出了原子吸收光度計的量程，是否可以進行調(diào)整？可以進行調(diào)整？答：答：可以進行調(diào)整，標準曲線的范圍在0-80ng/ml范圍內(nèi)即可，最高

13、濃度視儀器情況而定。三、數(shù)據(jù)分析三、數(shù)據(jù)分析19標準曲線的相關(guān)系數(shù)是否有最低要求？標準曲線的相關(guān)系數(shù)是否有最低要求？答：答：標準曲線的相關(guān)系數(shù)藥典無要求，但建 議相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.99。四、試劑、溶液四、試劑、溶液20玻璃量瓶對鉻測定有影響，應(yīng)采用什么材玻璃量瓶對鉻測定有影響，應(yīng)采用什么材質(zhì)的塑料量瓶？質(zhì)的塑料量瓶？答：答：使用的塑料量瓶材質(zhì)應(yīng)以不影響鉻的測量為準，推薦使用的塑料量瓶材質(zhì)為聚丙烯材質(zhì)。四、試劑、溶液四、試劑、溶液21標準品溶液配制后有保質(zhì)期嗎？標準品溶液配制后有保質(zhì)期嗎？答：答：國家標準物質(zhì)鉻標準溶液打開后，須放入耐腐蝕的塑料容器中，密閉，置于冰箱中存放，時間不得超過1個月，

14、鉻系列標準溶液應(yīng)臨用新配。四、試劑、溶液四、試劑、溶液22如何確證消解罐清洗干凈了？如何確證消解罐清洗干凈了？答：答：每次消解罐均需加入硝酸空白消解后方可使用。每次消解均應(yīng)制備試劑空白溶液，同時保證試劑空白溶液的吸光度值應(yīng)小于標準曲線第一濃度點的50%。四、試劑、溶液四、試劑、溶液23本實驗必須采用優(yōu)級純硝酸等試劑，并及時本實驗必須采用優(yōu)級純硝酸等試劑，并及時對試劑空白溶液進行考察。建議方法對硝酸等對試劑空白溶液進行考察。建議方法對硝酸等試劑要求進行規(guī)定。試劑要求進行規(guī)定。答：答：參考我院中檢包材201281號關(guān)于發(fā)布明膠藥用空心膠囊鉻檢測方法指導(dǎo)原則的通知中明膠藥用空心膠明膠藥用空心膠囊鉻檢測方法指導(dǎo)原則囊鉻檢測方法指導(dǎo)原則，在指導(dǎo)原則中已經(jīng)注明，試劑如硝酸，需使用優(yōu)級純試劑或選取背景較低的試劑進行實驗，如選用達到要求的國產(chǎn)優(yōu)級純硝酸試劑（如國藥集團化學試劑有限公司生產(chǎn)的批號為80089291的硝酸），或者選用進口試劑，如MERCK公司的優(yōu)級純硝酸。24測定膠囊劑中膠囊殼鉻含量，使用測定膠囊劑中膠囊殼鉻含量，使用中國藥典中國藥典2010年版（二部）