選修1微生物的實驗室培養(yǎng)課件

1、專題專題2 :2 :微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用微生物包括哪五類：微生物包括哪五類：真菌真菌原生動物原生動物特點：特點：結(jié)構(gòu)都相當簡單結(jié)構(gòu)都相當簡單, ,個體多數(shù)十分微小個體多數(shù)十分微小. .通通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細胞結(jié)構(gòu)的甚至沒有細胞結(jié)構(gòu). .且體內(nèi)一般不含有葉綠且體內(nèi)一般不含有葉綠素素. .不能進行光合作用不能進行光合作用. . 原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界微生物基礎(chǔ)知識微生物基礎(chǔ)知識細菌的外形與大小細菌的外形與大小細菌：細菌：單細胞不分枝的原核微生物單細胞不分枝的原核微生

2、物。細菌細胞細菌細胞，通常用適當染料，通常用適當染料后顯微鏡觀察后顯微鏡觀察圖圖1-1 常見的三種細菌典型形態(tài)常見的三種細菌典型形態(tài)A.球菌球菌 B.桿菌桿菌 C.弧菌弧菌細菌細胞由外向里依次有、菌菌（、，。細菌的構(gòu)造細菌的構(gòu)造* *細胞壁細胞壁n細胞壁有哪些功能？細胞壁有哪些功能？n 傷傷寒寒桿桿菌菌細細胞胞壁壁中中含含毒毒素素 有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓形的休眠有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做體，叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。例如，有的細菌的芽孢，煮沸境有很

3、強的抵抗力。例如，有的細菌的芽孢，煮沸3 3小時以后才小時以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當環(huán)境適宜（如溫度、水死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細菌分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細菌. .菌落：菌落：n單個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖單個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞群體，叫做菌落形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞群體，叫做菌落。n菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落細菌的菌落特征細菌的菌落特征因種而異因種而異 1 1

4、、結(jié)構(gòu)：、結(jié)構(gòu)：單細胞原核單細胞原核分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、氯霉素、紅霉素、慶大霉素氯霉素、紅霉素、慶大霉素 微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中2/32/3是是由放線菌產(chǎn)生的由放線菌產(chǎn)生的 應(yīng)用應(yīng)用: :病毒的結(jié)構(gòu)病毒的結(jié)構(gòu)病毒病毒 SARS病毒、病毒、 禽流感病毒禽流感病毒朊病毒（蛋白質(zhì)病毒）朊病毒（蛋白質(zhì)病毒）2、病毒的增殖：、病毒的增殖：真菌真菌如圖是酵母菌電子顯微如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉生殖生殖直立菌絲直立菌絲

5、 營養(yǎng)菌絲營養(yǎng)菌絲腐生生活腐生生活孢子生殖孢子生殖細菌的營養(yǎng)類型細菌的營養(yǎng)類型 n根據(jù)細菌所利用的能源和碳源的不同根據(jù)細菌所利用的能源和碳源的不同，將細菌分為兩大營養(yǎng)類型。，將細菌分為兩大營養(yǎng)類型。n自養(yǎng)菌（自養(yǎng)菌（autotrophautotroph）n異養(yǎng)菌（異養(yǎng)菌（heterotrophheterotroph）n腐生菌腐生菌n寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌課題 1 微生物的實驗室培養(yǎng)培養(yǎng)基1概念營養(yǎng)物質(zhì)人們按照微生物對_的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。2營養(yǎng)構(gòu)成碳源特殊營養(yǎng)物質(zhì)(1)一般都含有水、_、氮源、無機鹽。(2)還要滿足微生物生長對 pH、_以及 O2的要求。3

6、分類(1)液體培養(yǎng)基：配制成的液體狀態(tài)的基質(zhì)。(2)固體培養(yǎng)基：配制成的固體狀態(tài)的基質(zhì)，在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑，如瓊脂，制成瓊脂固體培養(yǎng)基。無菌技術(shù)1消毒溫和巴氏(1)特點：使用較為_的物理或化學(xué)方法，僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。(2)常用方法：煮沸消毒法、_消毒法、化學(xué)藥劑消毒法。2滅菌強烈灼燒(1)特點：使用_的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物。(2)常用方法：_滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。微生物培養(yǎng)的基本技術(shù)1配制培養(yǎng)基稱量混合溶化調(diào) pH分裝包扎2滅菌加水加培養(yǎng)基密封排冷氣維持壓力取出倒平板(或擱置斜面)3接種稀釋涂布平板(1)接種過程：洗凈雙手點燃酒精燈

7、接種貼標簽。(2)接種工具：包括_、涂布器。接種環(huán)(3)接種方法：平板劃線法、_法。(4)注意事項：整個操作過程要在_旁完成。4培養(yǎng)酒精燈火焰接種后的培養(yǎng)皿放入恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。菌種保藏1臨時保藏固體斜面4 (1)操作：采用_培養(yǎng)基，菌落長成后，放入_冰箱中保藏，以后每 36 個月，轉(zhuǎn)移一次新的培養(yǎng)基。(2)缺點：保存時間不長，菌種易被污染或產(chǎn)生變異。2長期保存法甘油管藏采用_法，放入20 的冷凍箱中保存。營養(yǎng)物質(zhì)定義作用主要來源碳源凡能提供所需碳元素的物質(zhì)合成生物體的細胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物；有些是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)無機化合物：CO2、NaHCO3 等。有機化合物：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等氮

8、源凡能提供所需氮元素的物質(zhì)合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物無機化合物：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽。有機化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等微生物的營養(yǎng)要素1微生物的營養(yǎng)物質(zhì)及功能 了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識，進行無了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識，進行無菌技術(shù)的操作，進行微生物的培養(yǎng)。菌技術(shù)的操作，進行微生物的培養(yǎng)。 一、課題目標：一、課題目標： 掌握掌握培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌高壓蒸氣滅菌和和平板劃線法平板劃線法等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范地進行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。地進行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。無菌技術(shù)的操作。無菌技術(shù)的操作。二、課題重點和難點：二、課題重

9、點和難點：三、技能目標：三、技能目標：一、基礎(chǔ)知識：一、基礎(chǔ)知識：（一）培養(yǎng)基（一）培養(yǎng)基 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。（1 1）按物理狀態(tài)來分：培養(yǎng)基可分為）按物理狀態(tài)來分：培養(yǎng)基可分為固體培固體培養(yǎng)基養(yǎng)基和和液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基。其中固體培養(yǎng)基用于菌。其中固體培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定菌落等。種分離、鑒定菌落等。（2 2）按功能來分，可分為）按功能來分，可分為選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基和和鑒別鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基。（3 3）按成分來分，可分為）按成分來分，可分為天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)

10、基和和合成合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基。1.1.培養(yǎng)基的類型和用途培養(yǎng)基的類型和用途 2. 2.不同的微生物往往需要采用不同不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方的培養(yǎng)基配方 (參考教材附錄內(nèi)容參考教材附錄內(nèi)容) 3.3.不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水水、碳源碳源、和、和氮源氮源、 無機鹽無機鹽、等等營養(yǎng)物質(zhì)，營養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長對另外還需要滿足微生物生長對pHpH、特特殊營養(yǎng)物質(zhì)殊營養(yǎng)物質(zhì), ,例如例如: :生長因子生長因子(即細菌生長即細菌生長必需，而自身不能合成的化合物必需，而自身不能合成的化合物,如維生如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶素、某些氨基酸、嘌呤、嘧

11、啶) )以及以及氧氣氧氣、二氧化碳二氧化碳、滲透壓滲透壓等的要求。等的要求。 選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基加入加入青霉素青霉素的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基: : 分離酵母菌、霉菌等真菌分離酵母菌、霉菌等真菌加入加入高濃度食鹽高濃度食鹽的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基: : 分離金黃色葡萄球菌分離金黃色葡萄球菌不加不加氮源氮源的無氮培養(yǎng)基的無氮培養(yǎng)基: : 分離固氮菌分離固氮菌不加不加含碳含碳有機物的無碳培養(yǎng)基有機物的無碳培養(yǎng)基: : 分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物加入加入青霉素青霉素等抗生素的培養(yǎng)基等抗生素的培養(yǎng)基: : 分離導(dǎo)入了目的基因的受體細胞加入氨基喋呤、分離導(dǎo)入了目的基因的受體細胞加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶次黃

12、嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培養(yǎng)基核苷的培養(yǎng)基: : 分離雜交瘤細胞分離雜交瘤細胞 根據(jù)細胞生存所需物質(zhì)的種類和根據(jù)細胞生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。數(shù)量，用人工方法模擬合成的。 合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助物質(zhì)。一些輔助物質(zhì)。 優(yōu)點：優(yōu)點：標準化生產(chǎn)，組分和含量相標準化生產(chǎn)，組分和含量相對固定對固定; ;成本低成本低 缺點：缺點： 缺少某些成分，不能完全滿缺少某些成分，不能完全滿足體外細胞生長需要。足體外細胞生長需要。 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基: : 天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組天然培養(yǎng)

13、基有血清、血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸液）。織提取液（如雞胚和牛胚浸液）。優(yōu)點：優(yōu)點：營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好缺點：缺點：來源受限來源受限; ;成分復(fù)雜，影響對某成分復(fù)雜，影響對某些實驗產(chǎn)物的提取和實驗結(jié)果的分析些實驗產(chǎn)物的提取和實驗結(jié)果的分析; ;易發(fā)生支原體污染易發(fā)生支原體污染; ;天然培養(yǎng)基：天然培養(yǎng)基：血清中含有：血清中含有：多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）白、鐵蛋白等）多種金屬離子；多種金屬離子； 激素；激素；促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等。冷析球蛋白、膠原等。各種生長因子各種生長因子轉(zhuǎn)移

14、蛋白轉(zhuǎn)移蛋白不明成分不明成分 人工合成培養(yǎng)基只能維持細胞生存，要想使細人工合成培養(yǎng)基只能維持細胞生存，要想使細胞生長和繁殖，還需補充一定量的天然培養(yǎng)基（如胞生長和繁殖，還需補充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）。血清）。液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基：表面生長表面生長均勻混濁生長均勻混濁生長沉淀生長沉淀生長固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔半固體培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基：無動力無動力 有動力有動力( (彌散彌散) )( (是否運動是否運動) ) 4.4.培養(yǎng)基的用途培養(yǎng)基的用途液體培養(yǎng)基：增菌液體培養(yǎng)基：增菌固體培養(yǎng)基：純化，增菌固體培養(yǎng)基：純化，增菌半固體培養(yǎng)基：動力檢測，保種半固體培養(yǎng)基：動力檢測

15、，保種1.1.無菌技術(shù)的概念無菌技術(shù)的概念 無菌操作泛指無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。中，所有防止雜菌污染的方法。無論是無論是隨后將要學(xué)到的隨后將要學(xué)到的倒平板倒平板、平板劃線平板劃線操作，操作，還是還是平板稀釋涂布法平板稀釋涂布法，其操作中的每一，其操作中的每一步都需要做到步都需要做到“無菌無菌”，即防止雜菌污，即防止雜菌污染。只有熟練、規(guī)范地進行無菌操作，染。只有熟練、規(guī)范地進行無菌操作，才可能成功地培養(yǎng)微生物。才可能成功地培養(yǎng)微生物。 （）（）消毒定義：消毒定義：利用化學(xué)或物理方法，殺死大部份利用化學(xué)或物理方法，殺死大部份致病微生物的過程。區(qū)

16、分為致病微生物的過程。區(qū)分為高程度消毒高程度消毒（High-level DisinfectionHigh-level Disinfection）、）、中程度中程度消毒消毒（Intermediate-level Intermediate-level DisinfectionDisinfection）、）、低程度消毒低程度消毒（Low-Low-level Disinfectionlevel Disinfection）三種方式。）三種方式。2.2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別 （2 2）滅菌的定義：）滅菌的定義：以化學(xué)劑或物理方法消滅以化學(xué)劑或物理方法消滅所有所有微微生物

17、，包括所有細菌的繁殖體、芽孢、生物，包括所有細菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達到霉菌及病毒，而達到完全無菌完全無菌之過程。之過程。 滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。作中最普通也是最重要的技術(shù)。1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化學(xué)藥劑消毒法化學(xué)藥劑消毒法: :用用75%75%酒精、新潔酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒爾滅等進行皮膚消毒; ;氯氣消毒水源氯氣消毒水源4 4、

18、紫外線消毒紫外線消毒(1)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒與滅菌的方法常用的消毒與滅菌的方法1 1、灼燒滅菌、灼燒滅菌2 2、干熱滅菌：、干熱滅菌：160-170 160-170 下加下加熱熱1-2h1-2h。3 3、高壓蒸氣滅菌：、高壓蒸氣滅菌：100kPa100kPa、121 121 下維持下維持15-30min.15-30min.(2)滅菌的方法：滅菌的方法： 最常用的滅菌方法是最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌，它可以，它可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被眠體，同時可以基本

19、保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞。破壞。 有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌高溫干熱滅菌。為了。為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過，而空氣中的其他微生物不能通過可讓空氣通過，而空氣中的其他微生物不能通過。 而平皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器而平皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器具是專為防止空氣中微生物的污染而設(shè)計的。具是專為防止空氣中微生物的污染

20、而設(shè)計的。 分類分類定義定義方法方法滅菌法滅菌法殺滅一切微生物殺滅一切微生物物理法：熱力、輻射、微物理法：熱力、輻射、微波、等離子體波、等離子體化學(xué)法：醛類、烷化劑化學(xué)法：醛類、烷化劑高效消高效消毒法毒法殺滅一切致病微殺滅一切致病微生物生物紫外線、含氯劑、臭氧、紫外線、含氯劑、臭氧、復(fù)配劑等復(fù)配劑等中效消中效消毒法毒法殺滅除芽孢外的殺滅除芽孢外的致病微生物致病微生物超聲波、碘類、醇類、酚超聲波、碘類、醇類、酚類類低效消低效消毒法毒法殺滅細菌繁殖體殺滅細菌繁殖體、親脂病毒、親脂病毒單單鏈季胺鹽、雙胍類、中鏈季胺鹽、雙胍類、中草藥、金屬離子草藥、金屬離子1 1、器具的滅菌、器具的滅菌2 2、培養(yǎng)基

21、的配制、培養(yǎng)基的配制3 3、培養(yǎng)基的滅菌、培養(yǎng)基的滅菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接種、微生物接種6 6、恒溫箱中培養(yǎng)、恒溫箱中培養(yǎng)7 7、菌種的保存、菌種的保存1.1.無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？被其他外來微生物污染外，還有什么目的？2.2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1 1） 培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2 2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管玻棒、試管、燒瓶和吸管（3 3）

22、 實驗操作者的雙手實驗操作者的雙手 答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要滅菌；（）需要滅菌；（3）需要消毒）需要消毒。三、實驗操作三、實驗操作 1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細菌）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細菌）1 1計算、稱量計算、稱量2 2溶化溶化3 3調(diào)調(diào)pHpH：pH7pH76 64 4過濾：這一步可以省去。過濾：這一步可以省去。5 5分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒

23、瓶的量以不超過引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。三角燒瓶容積的一半為宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎操作步驟操作步驟 8 8滅菌滅菌: : 將將5050mlml培養(yǎng)基培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為鍋，在壓力為100100kPakPa、溫度為溫度為121121，滅菌，滅菌15153030minmin。將將培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿用舊報紙包裹，放入干用舊報紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在熱滅菌箱內(nèi)，在160160170 170 下滅菌下滅菌2 2h h。 9 9倒平板倒平

24、板: : 待培養(yǎng)基冷卻到待培養(yǎng)基冷卻到50 50 左右時，在酒精燈附左右時，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見課本）近倒平板。（倒平板操作見課本）2 2d d后觀察平后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種板，無雜菌污染才可用來接種. . 10 10無菌檢查：無菌檢查： 將滅菌的培養(yǎng)基放入將滅菌的培養(yǎng)基放入3737的溫室中培的溫室中培養(yǎng)養(yǎng)24482448小時，以檢查滅菌是否徹底。小時，以檢查滅菌是否徹底。 1. 1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 50 左右左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？基的溫度？ 答：答：可以

25、用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。時，就可以進行倒平板了。2.2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。生物污染培養(yǎng)基。3.3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？

26、培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。培養(yǎng)微生物。2 2、純化大腸桿菌、純化大腸桿菌接種方法有：接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布

27、平板法平板劃線法和稀釋涂布平板法 平板劃線法平板劃線法: :通過接種環(huán)在瓊脂固體通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作, ,將聚集的將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面. . 在數(shù)次畫線后在數(shù)次畫線后, ,可以分離到由一個細可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體, ,這就是菌落這就是菌落. . 1.1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？要灼燒接種環(huán)嗎

28、？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死

29、接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。感染操作者。 2.2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？冷卻后再進行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 3.3.在作第二次以及其后的劃線操作時，在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次

30、數(shù)的增加而始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。的菌落。 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌進行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第操作要求，想一想，第2 2步應(yīng)如何進行無步應(yīng)如何進行無菌操作？菌操作？ 應(yīng)從操作的各個細節(jié)保證應(yīng)從操作的各個細節(jié)保證“無菌無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。在酒精燈火焰周圍等

31、等。 1 1、臨時保藏：、臨時保藏：接種到固體斜面培接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后養(yǎng)基，菌落長成后置于置于44冰箱保存。冰箱保存。 2 2、長期保存：、長期保存：甘油冷凍管藏法甘油冷凍管藏法四、課題成果評價四、課題成果評價 （一）培養(yǎng)基的制作是否合格（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 12 d2 d后無后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。制備。 （二）接種操作是否符合無菌要求（二）接種操作是否符合無菌要求 如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基如果培養(yǎng)基上生長

32、的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達到要求，需要分析原因，接種過程中，無菌操作還未達到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。再次練習(xí)。 （三）是否進行了及時細致的觀察與記錄（三）是否進行了及時細致的觀察與記錄 培養(yǎng)培養(yǎng)12 h12 h與與24 h24 h后的大腸桿菌菌落的大小會有明后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同，及時觀察記錄的同學(xué)會發(fā)現(xiàn)這一點，并能觀察顯不同，及時觀察記錄的同學(xué)會發(fā)現(xiàn)這一點，并能觀察到其他一些細微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生到其他一些細微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。本課題知識小結(jié)本課題知識小結(jié): :【典例解析典例解析】 例例1 1關(guān)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是關(guān)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是A.A.是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源 B.B.凡碳源都提供能