天參益智膠囊中四味藥材的薄層色譜鑒別及淫羊藿苷的含量測定

1、天參益智膠囊中四味藥材的薄層色譜鑒別及淫羊藿苷的含量測定 作者：朱潔，肖海濤，郝小燕 羅俊，官志忠【關(guān)鍵詞】 天參益智膠囊 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 薄層鑒別 淫羊藿苷 高效液相色譜法Abstract：ObjectiveTo establish the quality standard for Tianshenyizhi Capsule. MethodsHerba Epimedii, Radix Angelicae Sinensis, Rhizoma Acori Tatarinowii, Radix Polygoni Multiflori cum Succo Glycines Sotae in Tianshe

2、nyizhi Capsule were identified by TLC, and the content of icariin was determined by HPLC. ResultsThe identification method was highly exclusive. Icariin showed a good linear relationship in the range of 0.3221.61g, and r=0.999 98. The average recovery was 100.7%, RSD= 1.43% (n= 9). ConclusionThe met

3、hod is accurate and simple with good reproducibility, and it can control the quality of this preparation effectively.Key words：Tianshenyizhi Capsule; Quality Standard; TLC; Icariin; HPLC天參益智膠囊是在大量傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)驗(yàn)方的基礎(chǔ)上，研發(fā)的一種治療老年性癡呆疾病的中藥制劑。經(jīng)過初步藥效學(xué)研究表明1，2，該復(fù)方對癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶能力有明顯的改善作用，對膽堿能功能減退有較好的保護(hù)和治療作用，可顯著降低老年癡呆大鼠海馬和皮

4、質(zhì)中興奮性谷氨酸含量，拮抗谷氨酸介導(dǎo)的神經(jīng)毒性作用，延緩衰老和防治老年癡呆。為研究該產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，我們對制劑中的淫羊藿、當(dāng)歸、石菖蒲、何首烏4味藥材的薄層鑒別方法進(jìn)行了研究，并以其中的淫羊藿苷作為指標(biāo)性成分進(jìn)行了含量測定。1 儀器與試藥1 儀器 HP1100高效液相色譜儀（包括HP1100泵，HP1100紫外檢測器，HP1100柱溫箱，HP1100/WND-3D工作站），QY-20三用紫外分析儀（上海市聞天儀器設(shè)備有限公司），KQ-250B型超聲波提取器（昆山市超聲儀器有限公司）。2 試劑與藥品D-101型大孔吸附樹脂（天津農(nóng)藥股份有限公司樹脂分公司），硅膠（青島美晶化工有限公司），氧化鋁（

5、200300目，上海新誠精細(xì)化工有限公司），淫羊藿苷對照品、當(dāng)歸對照藥材、石菖蒲對照藥材、何首烏對照藥材（由中國藥品生物制品檢定所提供，批號分別為110737-200312，120927-200615，121098-200403，120934-200507）。乙腈為色譜純，水為超純水和蒸餾水，其余試劑均為分析純。天參益智膠囊（自制0.3 g/粒，批號：200609011，200609012，200609013）。2 方法與結(jié)果2.1 薄層鑒別取膠囊內(nèi)容物3 g，加95%乙醇30 ml，超聲30 min，濾過，濾液水浴揮干，殘?jiān)? ml乙醇溶解，作為供試品溶液。取缺淫羊藿陰性樣品3 g和淫羊藿

6、藥材1 g，同法制備缺淫羊藿陰性樣品溶液和淫羊藿藥材對照溶液。取淫羊藿苷對照品用甲醇制成1 mgml-1的對照品溶液。分別吸取供試品溶液和缺淫羊藿陰性樣品溶液各10 l，淫羊藿藥材對照溶液和淫羊藿苷對照品溶液各5 l，分別點(diǎn)于同一硅膠H板上，以氯仿-甲醇-甲酸（1510.2）為展開劑，展開2次，取出晾干。噴以5%三氯化鐵乙醇液，晾干。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性樣品無干擾。結(jié)果見圖1。取膠囊內(nèi)容物3 g，置于100 ml的燒杯中，加入水60 ml煎煮1 h，濾過，濾液水浴揮至適量，用石油醚萃取3次，20 ml/次，合并萃取液，水浴揮干，殘?jiān)尤氪姿?/p>

7、乙酯1 ml使溶解, 作為供試品溶液。另取當(dāng)歸藥材1 g，同法制成藥材對照溶液。取缺當(dāng)歸陰性樣品3 g同樣品法制備缺當(dāng)歸陰性樣品溶液。參照薄層色譜法3試驗(yàn)，吸取供試液和陰性樣品溶液各10 l，當(dāng)歸藥材對照溶液5 l，分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠板GF254上,用正己烷-醋酸乙酯 (101)為展開劑，展開，取出晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視，樣品與藥材色譜相應(yīng)的位置處顯相同熒光的斑點(diǎn)，陰性樣品無干擾。結(jié)果見圖2。取膠囊內(nèi)容物3 g，置于100 ml的燒杯中，加入水60 ml煎煮1 h，濾過，濾液水浴揮至適量，用石油醚萃取3次，20 ml/次，合并萃取液，水浴揮干，殘?jiān)尤氪?/p>

8、酸乙酯1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取石菖蒲對照藥材0.5 g，同法制成藥材對照溶液。取缺石菖蒲陰性樣品3 g，同樣品法制備缺石菖蒲陰性樣品溶液。參照薄層色譜法3試驗(yàn)，吸取供試液和陰性樣品溶液各10 l，石菖蒲藥材對照溶液5 l，分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G板上，用石油醚-醋酸乙酯 (81)為展開劑，展開，取出晾干， 噴以10% 的磷鉬酸乙醇溶液，于105烘烤至斑點(diǎn)清晰。樣品與藥材色譜相應(yīng)的位置處顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性樣品無干擾。結(jié)果見圖3。取膠囊內(nèi)容物3 g，置于100 ml燒杯中，加入蒸餾水50 ml煎煮30 min，濾過，濾液濃縮至適量，用氯仿萃取3次，30 ml/次

9、，合并萃取液，水浴揮干，殘?jiān)尤爰状? ml使溶解, 作為供試品溶液。另取何首烏對照藥材0.5 g，同法制成藥材對照溶液。取缺何首烏陰性樣品3 g同樣品法制備缺何首烏陰性樣品溶液。參照薄層色譜法3試驗(yàn)，吸取供試液和陰性樣品液各10 l，藥材對照溶液3 l， 分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的高效硅膠G板上，以氯仿-丙酮(7:1)為展開劑，飽和15 min，展開約3.5 cm左右，取出晾干，再以環(huán)己烷-醋酸乙酯(10:0.5) 為展開劑, 飽和15 min，展開，取出晾干,置氨蒸氣中熏至斑點(diǎn)清晰。樣品與藥材色譜相應(yīng)的位置處顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性樣品無干擾。結(jié)果見圖4。2.2 淫羊藿苷的含量測

10、定色譜柱為DiamonsilTM C18（5 m，250 mm 4.6 mm）；流動相為乙腈-水 (3070)；流速1 mlmin-1；進(jìn)樣量10 l；波長270 nm；柱溫40。 取天參益智膠囊內(nèi)容物0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加稀乙醇25 ml，精密稱定，超聲1 h，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。精密稱取淫羊藿苷對照品20.10 mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，為對照品貯備液，濃度為402 gml-1。取缺淫羊藿陰性樣品粉末約0.5 g，精密稱定，按上述供試品溶液的制備方法，制備陰性對照溶液。分別吸取供試品溶液、對照品溶液和陰性對照溶

11、液，按前述色譜條件測定。結(jié)果表明，在本實(shí)驗(yàn)條件下，淫羊藿苷與其他組分峰分離度大于1.5，陰性對照無干擾，理論塔板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算不低于1 500。結(jié)果見圖5。分別精密吸取對照品儲備液2，4，6，8，10 ml置于25 ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用；按上述色譜條件測定各濃度溶液的峰面積，以進(jìn)樣量（g）為橫坐標(biāo)（X），以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，淫羊藿苷在0.3221.61 g線性關(guān)系良好。回歸方程為Y=16.904 8X-7.120 7，r= 0.999 98。精密吸取同一對照品溶液10 l，按前述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測得淫羊藿苷峰面積積分值的RSD為0.14%，表明

12、測定儀器精密度良好。取同一批樣品，按“供試品溶液的制備”方法，平行制備供試品溶液6份，按前述色譜條件測定，測定淫羊藿苷含量，峰面積RSD為0.87%，表明測定方法重復(fù)性良好。取同一批樣品制成的供試品溶液10 l，分別在0，2，4，8，12，24 h各進(jìn)樣1次，測得淫羊藿苷在24 h內(nèi)峰面積的RSD為0.39%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。3 討論淫羊藿的薄層鑒別中中國藥典（2005年版部）采用以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10111）為展開劑，三氯化鋁作為顯色劑，實(shí)驗(yàn)中顯色效果欠佳，改用以氯仿-甲醇-甲酸（1510.2）為展開劑，以三氯化鐵顯色，分離效果好，斑點(diǎn)顯色清晰。中國藥典（20

13、05年版部）中采用揮發(fā)油對石菖蒲進(jìn)行定性鑒別，而該制劑的制備工藝中石菖蒲為直接水煎煮，因此我們對石菖蒲的定性鑒別方法進(jìn)行改進(jìn)，其結(jié)果所建立的方法顯色效果明顯，成點(diǎn)性好。在當(dāng)歸定性鑒別中，按中國藥典（2005年版部）用乙醚超聲處理，斑點(diǎn)多、干擾大，改用石油醚超聲后，以正己烷-醋酸乙酯（101）為展開劑，效果較好。何首烏的定性鑒別中，按中國藥典（2005年版部）中以苯-乙醇（21）為展開劑，斑點(diǎn)不明顯，且苯毒性大，故將展開劑改為氯仿-丙酮（71），飽和15 min, 展開約3.5 cm左右，取出晾干，再以環(huán)己烷-醋酸乙酯（100.5）為展開劑，飽和15 min，二次展開，取出晾干，置氨蒸氣中熏至斑點(diǎn)清晰，效果較好。淫羊藿為本品的君藥，所含的黃酮具有較好的腦神經(jīng)保護(hù)作用4，淫羊藿苷為淫羊藿中主要成分，故將淫羊藿苷作為指標(biāo)性成分進(jìn)行了含量測定，所建立的測定方法具有準(zhǔn)確、簡便、快速、重復(fù)性好等特點(diǎn)，有利于本品的質(zhì)量控制。【參考文獻(xiàn)】 1羅喜榮