實(shí)驗(yàn)八、土壤微生物的分離和 純化

1、 1.掌握倒平板的方法。 2.掌握常用的分離純化微生物的基本操作技術(shù). 從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過(guò)程稱為微生物的分離與純化。 要研究某種微生物的特性，首先須使該微生物處于純培養(yǎng)狀態(tài)，即培養(yǎng)物中所有細(xì)胞只是微生物的某一個(gè)種或株，它們有著共同的來(lái)源，是同一細(xì)胞的后代。自然界中各種微生物混雜生活在一起，即使取少量的樣品也是許多微生物共存的群體。 土壤是微生物生活的大本營(yíng)，它所含微生物無(wú)論是數(shù)量還是種類都是極其豐富的，因此土壤是發(fā)掘微生物資源的重要基地。 1.培養(yǎng)基 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 馬丁氏培養(yǎng)基 高氏1號(hào)培養(yǎng)基 2.溶液或試劑 盛4.5ml無(wú)菌水的試管 盛99ml無(wú)菌水

2、并帶有玻璃珠的三角燒瓶 3.儀器和用具 無(wú)菌玻璃涂棒 無(wú)菌吸管 無(wú)菌培養(yǎng)皿 土樣 1.制備土壤稀釋液 -2、10-3、10-4、10-5不同稀釋度的土壤溶液。 2.倒平板 將三種培養(yǎng)基加熱溶化，待冷至5560時(shí)，馬丁氏培養(yǎng)基中加入鏈霉素溶液（終濃度為30g/ml），混均勻后分別倒平板，每種培養(yǎng)基倒4皿。 （一）平板劃線法 3.劃線 左手拿皿底，右手拿接種環(huán)，挑取上述10-2的土壤懸液一環(huán)在平板上劃線。 兩種劃線方法： （1）不連續(xù)劃線:先在平板培養(yǎng)基的一邊作第一次平行劃線34次，再轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，并將接種環(huán)上剩余物燒掉，待冷卻后通過(guò)第一次劃線部分作第二次平行劃線，再用同樣的方法通過(guò)第二次劃線部分作第三次劃線和通過(guò)第三次部分作第四次平行劃線。 （2）將挑取有樣品的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)劃線。 （二）稀釋涂布平板法 3.涂布 將每種培養(yǎng)基的一個(gè)平板底面分別用記號(hào)筆寫(xiě)上10-3、10-4、和10-5 ，然后用無(wú)菌吸管分別由10-3、10-4、和10-5 三管土壤稀釋液中各吸取0.1ml對(duì)號(hào)放入平板中央，用無(wú)菌玻璃涂棒在培養(yǎng)基表面輕輕地涂布均勻。（三）培養(yǎng) 做好標(biāo)記后，高氏I號(hào)和馬丁氏培養(yǎng)基平板倒置于28溫室中培養(yǎng)35d，牛肉膏蛋白胨平板置37 溫室中培養(yǎng)23d。 （四） 挑菌落 菌苔長(zhǎng)出后，檢查特征是否一致，用顯微鏡檢查是