分析方法驗證培訓(xùn)

1、無憂PPT整理發(fā)布關(guān)于分析方法驗證培訓(xùn)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一頁，共142頁2 . 1概念 1 ：分析方法ICHQ2定義： 分析方法是指進行分析的方式，應(yīng)詳細描述每一個分析試驗所必需的步驟 它包括，但不局限于：樣品，參照對照品，試劑的配制，儀器的使用，標準曲線的繪制，計算公式的運用等現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二頁，共142頁2 . 1概念2 分析方法驗證 化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)指導(dǎo)原則定義： 為使測試結(jié)果準確，可靠，必須對所采用的分析方法的科學(xué)性，準確性和可行性進行驗證，以充分表明分析方法符合測試項目的目的和要求，這就是通常所說的對方法進行驗證現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三頁，共142頁2 . 2分析方法形成過程現(xiàn)在

2、學(xué)習(xí)的是第四頁，共142頁2 . 3什么情況分析方法需要驗證？ 剛開發(fā)的分析方法 修正或建立分析方法用于新的問題 分析方法變更 分析方法在不同實驗室，分析人員使用 不同儀器 證明兩個分析方法的等效性現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五頁，共142頁2.4驗證需要考慮的因素 確認并校驗的儀器 文件化的方法 可靠地參數(shù)標準品 合格的分析人員 樣品完整性現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第六頁，共142頁2.5驗證基本假設(shè) 前提） 專屬性得到證明 方法己經(jīng)是最佳條件 用統(tǒng)計學(xué)方法處理數(shù)據(jù)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第七頁，共142頁2.6 現(xiàn)有驗證指南缺陷 僅僅提出了要求驗證的項目 沒有給出具體的驗證方法 沒有給出判斷標準 一些驗證中的實際問題沒有指導(dǎo)原則

3、現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第八頁，共142頁2.7 分析方法驗證方案內(nèi)容 闡明目的和范圍 責任 書面的分析方法 使用的物料與儀器目錄 每一參數(shù)的實驗程序 統(tǒng)計方法 每一參數(shù)的驗證標準現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第九頁，共142頁2 . 8 儀器的確認 構(gòu)造，型號和制造商手冊 改造 安裝確認和運行確認 校準程序 維護保養(yǎng)養(yǎng)計劃現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十頁，共142頁3 . 0 不同驗證具體要求 驗證的范圍 新方法驗證步驟 方法轉(zhuǎn)移驗證 方法重新驗證現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十一頁，共142頁3 . 1 驗證的范圍 新方法要求進行完整的驗證 藥典的方法要求部分進行驗證（確證） 重大要的變化需要進行部分再驗證現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十二頁，共142頁3 . 2

4、 新方法驗證步驟 開發(fā)新方法或從相關(guān)實驗室獲得新方法 制定驗證方案，驗證規(guī)程或驗證主計劃 確定方法（驗證）適用的目標，范圍 確定實驗參數(shù)及可接受的標準 確定驗證實驗過程 確認驗證使用的儀器相關(guān)性能現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十三頁，共142頁3.2-新方法驗證步驟（續(xù)1） 確認驗證所需的人員，試劑及標準 運行預(yù)驗證試驗 如果需要調(diào)整方法或接受標準 運行完整的驗證試驗 建立該方法的SOP用于日常分析工作 確定需要重新驗證方法的標準現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十四頁，共142頁3.2-新方法驗證步驟（續(xù)2） 確定日常工作中系統(tǒng)適應(yīng)性測試及/或分析質(zhì)量控制檢查的類型及頻率 將驗證過程，結(jié)果及結(jié)論總結(jié)形成完整的驗證報告現(xiàn)在學(xué)習(xí)的

5、是第十五頁，共142頁3.2.1概念3：替代分析方法FDA定義： 目的在于替代法規(guī)分析方法的分析方法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十六頁，共142頁3 . 2 . 2基本內(nèi)容 專屬性 檢測限 定量限 精密度 線性與范圍 準確度 耐用性現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十七頁，共142頁3 . 2 . 3分析方法按特性分類 第一類主成分定量 第二類雜質(zhì)或降解產(chǎn)物測定 第三類性能特點測定 第四類鑒別試驗現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十八頁，共142頁USPICHWHO選擇性選擇性選擇性線性度及范圍線性度線性度及范圍范圍準確度準確度準確度精密度精密度重復(fù)性精密度 中間精密度重現(xiàn)性檢測限檢測限檢測限定量限定量限定量限耐用性耐用性耐受性現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十九

6、頁，共142頁3 . 2 . 4ICH,USP及WHO驗證要求3.2.4.1FDA要求驗證項目鑒別雜質(zhì)限度雜志定量含量及溶出度 特性準確度-+ +重復(fù)性-+中間精密度-+專屬性+檢測限-+- - -定量限-+- -線性-+ -范圍-+ -耐用性-+現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十頁，共142頁3.2.4.2ICH要求驗證項目鑒別雜質(zhì)限度雜志定量含量及溶出度準確度-+ +重復(fù)性-+中間精密度-+專屬性+檢測限-+- -定量限-+-線性-+范圍-+耐用性現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十一頁，共142頁3.2.4.3WHO要求驗證項目鑒別雜質(zhì)定量雜質(zhì)限度含量特性準確度-+ -+ + 精密度-+ -+ + 耐用性+ + + +

7、+ 線性和范圍-+ -+ + 專屬性+ + + + + 檢測限-+ -定量限-+ -現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十二頁，共142頁3 . 3方法轉(zhuǎn)移驗證 證明經(jīng)過其它實驗室的驗證，并可以正式運行的分析測試過程，是否可以在本實驗室運行，并適應(yīng)實際的使用情況： 滿足相應(yīng)的測試要求 真實反映被測物相應(yīng)的特性， 濃度，質(zhì)量，純度及效價情況現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十三頁，共142頁3 . 3 . 1概念 4 ：法規(guī)分析方法FOA 定義： 是用于評佑原料藥或制劑某一個規(guī)定特性的分析方法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十四頁，共142頁3.3.2概念5 :交叉驗證FDA定義： 在同一個研究或不同交叉研究中，用兩種或多種分析方法進行分析，對驗證

8、參數(shù)進行比較現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十五頁，共142頁3 . 3 . 3轉(zhuǎn)移驗證方法來源 官方認可的標準 USP/NF EP BP ChP JP AOAC 客戶提供的，經(jīng)過驗證后的方法 相關(guān)實驗室經(jīng)驗證后正在使用的方法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十六頁，共142頁3 . 3 . 4轉(zhuǎn)移驗證的要求 系統(tǒng)適應(yīng)性及方法專屬性必須驗證 方法耐用性可以不驗證 雜質(zhì)測試方法檢測限與定量限必須驗證 其它驗證項目根據(jù)實際情況決定，對于項目的選擇與取舍應(yīng)有詳細的討論現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十七頁，共142頁3 . 3 . 5分析方法轉(zhuǎn)移驗證 分析方法轉(zhuǎn)移方案及程序 精密度 準確度 耐用性 編寫并批準的具體測試方法 熟練程度核實 新實驗室正

9、式驗收現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十八頁，共142頁3 . 4方法再驗證 概念 需運行方法再驗證的變更情況 方法再驗證要求現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十九頁，共142頁3 . 4 . 1概念 6 ：方法再驗證 化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)指導(dǎo)原則定義： 在某些情況下，如原料藥合成工藝改變，制劑處方改變，分析方法發(fā)生改變等，均有必要對分析方法再次進行全面或部分指標的驗證，以保證分析方法可靠，這一過程稱為方法再驗證現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十頁，共142頁3 . 4 . 2需運行方法再驗證的變更情況 改變藥物合成工藝 改變制劑組成 改變分析過程 操作過程的更改 改變儀器，色譜柱等硬件 測試條件持續(xù)改變以適應(yīng)系統(tǒng)適應(yīng)性要求，且改

10、變程度超出藥典規(guī)定的方法耐用性驗證范圍現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十一頁，共142頁3 . 4 . 3方法再驗證要求 證實相應(yīng)的變更發(fā)生后，原使用的分析測試過程： 能夠繼續(xù)保持其特有的性質(zhì)（如專屬性） 能夠繼續(xù)真正反映被測物的相應(yīng)特性（檢測限與定量限） 依靠變更情況確定重新驗證的內(nèi)容與程度現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十二頁，共142頁4 . 0其它 概念 參考文獻現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十三頁，共142頁4 . 1概念 7 ：系統(tǒng)適應(yīng)性 在一個系統(tǒng)（主要是色譜分離系統(tǒng)）被使用前，檢查其系統(tǒng)性能指標是否滿足分析要求的過程 它是確保色譜系統(tǒng)質(zhì)量性能的要素現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十四頁，共142頁4 . 1概念8：接受標準FDA定義： 用

11、于驗收分析結(jié)果的數(shù)字限度，范圍，或其他適當?shù)挠嬃楷F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十五頁，共142頁4 . 2 一參考文獻ICH 一 QZA Text on Validatlon of Analytical Procedure : ( 1994 ) ICH 一 QZB Validation on AnaIytical Procedures : Methodology： ( 1995 ) CDER Reviewer Guidance : Validation of ChromatographicMethod ( 1994 ) CDER Submitting Samples and Analytical Data

12、for MethodValidations （1987 ) CDER Draft Analytical Procedures and Method Validation ( 2000 )CDER Bioanalytical Method Validation for Human Studles ( 1999 ) USP Vaildation of Compendial Methods ( current revlsion ) 中國藥典：藥品質(zhì)量標準分析方法驗證現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十六頁，共142頁Validation of Analytical Procedure分析方法驗證 第一部分：基本要求現(xiàn)

13、在學(xué)習(xí)的是第三十七頁，共142頁Validation of Analytical Procedure分析方法驗證 第二部分：實驗設(shè)計與操作現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十八頁，共142頁1.0講座目的 掌握驗證試驗設(shè)計 掌握驗證試驗操作 了解確定接受標準原則現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十九頁，共142頁第一部分:基本要求Validation of Analytical Procedure 分析方法驗證現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十頁，共142頁第二部分:實驗設(shè)計與操作1.0講座目的 掌握驗證試驗設(shè)計 掌握驗證試驗操作 了解確定接受標準原則現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十一頁，共142頁2 . 0 一精密度概念容易混淆的精密度中術(shù)語重復(fù)性中間精密

14、度推薦重復(fù)性接受標準 AOAC 濃度與精密度關(guān)系重現(xiàn)性現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十二頁，共142頁2 . 1 一概念 1 ：精密度lCH-Q2 定義：分析方法的精密度指在規(guī)定條件下，對均質(zhì)樣品，多次取樣進行一系列檢測結(jié)果的接近程度（離散程度）現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十三頁，共142頁2 . 2 一容易混淆的精密度中術(shù)語儀器重復(fù)性 相同人員，儀器，日期，標準液方法重復(fù)性 相同人員，儀器，日期，重新配制標準液中間精密度 不同日期，不同分析人員，不同儀器現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十四頁，共142頁2 . 3 一重復(fù)性概念推薦重復(fù)性測定方法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十五頁，共142頁2 . 3 . 1 一概念 2 ：重復(fù)性ICH -Q2

15、定義：重復(fù)性是指在同樣的操作條件下，較短時間間隔的精密度現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十六頁，共142頁2 . 3 . 2 一推薦重復(fù)性測定方法在方法規(guī)定的線性范圍內(nèi)重復(fù)測定 如 3 個濃度，每個濃度 3 次或 100 的測試濃度，測定六次 記錄每次測定各組分響應(yīng)計算各響應(yīng)值與平均值之間相對標準偏差現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十七頁，共142頁2.3.2.1-概念3：系統(tǒng)重復(fù)性相同條件下，同一分析人員對同一樣品溶液多次測試結(jié)果的接近程度現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十八頁，共142頁2 . 3 . 2 . 2 系統(tǒng)重復(fù)性實驗 取同一均勻標準樣品溶液連續(xù)重復(fù)測定六次記錄每次測定各組分響應(yīng)計算各響應(yīng)值與平均值之間相對標準偏差現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是

16、第四十九頁，共142頁2.3.2.3-概念4：方法重復(fù)性相同條件下，同一個分析人員對同一個均勻樣品，多次取樣測定所得結(jié)果的接近程度現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五十頁，共142頁2 . 3 . 2 . 4 一方法重復(fù)性實驗 取同一批號均勻樣品 按照分析方法規(guī)定至少稱量出六份 按含量測定方法測定每一份樣品含量 計算每一次測定的含量與平均含量之間的相對標準偏差現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五十一頁，共142頁2.4-中間精密度 概念 推薦中間精密度測定方法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五十二頁，共142頁2 . 4 . 1 一概念 5 ：中間精密度ICH-Q2 定義 中間精密度指的是試驗室內(nèi)部條件改變，如：不同日，不同分析者，不同儀器等情況下的

17、精密度現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五十三頁，共142頁2 . 4 . 2 推薦中間精密度測定方法 應(yīng)確定隨機事件對分析方法精密度的影響，如不同日期，不同分析人員，不同儀器等等 沒有必要一一考察 用均勻設(shè)計，或正交設(shè)計方法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五十四頁，共142頁2 . 5 一推薦重復(fù)性接受標準 系統(tǒng)重復(fù)性 S/N1000,RSD S/N100,RSD2% S/N10,RSD4% S/N10,RSD8% 方法重復(fù)性 測定結(jié)果的相對偏差 儀器分析小于2% 容量分析小于0.3%現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五十五頁，共142頁2 . 6 AOAC 濃度與精密度關(guān)系濃度（%）比率單位RSD（%）1001100%1.31010-110%2.

18、7110-21%2.80.110-30.1%3.70.0110-4100ppm5.30.00110-510ppm7.30.000110-61ppm110.0000110-7100ppb150.00000110-810ppb210.000000110-91ppb30現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五十六頁，共142頁2.7-重現(xiàn)性 概念 什么時候需要作重現(xiàn)性現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五十七頁，共142頁2 . 7 . 1 一概念 6 ：重現(xiàn)性ICH Q2定義： 重現(xiàn)性指不同試驗室之間的精密度現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五十八頁，共142頁2.7.2-什么時候需要作重現(xiàn)性？ 是比較實驗室間的差異 當一個方法要升級到法規(guī)方法時，需要做這個工作

19、現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五十九頁，共142頁3 . 0 準確度 概念 原料藥準確度測定 制劑產(chǎn)品準確度測定 雜質(zhì)準確度測定 推薦準確度測定方法 推薦準確度測定接受標準 AOAC 濃度與回收率關(guān)系現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第六十頁，共142頁3 . 1 概念 7 ：準確度ICHQ2 定義 分析方法的準確性指的是真實值或認可的參考值與測量值之間相近程度現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第六十一頁，共142頁3 . 2 原料藥準確度測定 用該方法分析已知純度的分析物 該方法的分析結(jié)果與成熟的分析方法相比較，該成熟方法準確度是已知的 在精密度，線性，專屬性建立后，進行推論現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第六十二頁，共142頁3 . 3 制劑準確度測定 用該方法去測按

20、處方量制成的混合物（加入已知量被測物） 在制劑中加入已知量主藥或與另一成熟方法比較 在精密度，線性和專屬性建立后得出現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第六十三頁，共142頁3 . 4 雜質(zhì)準確度測定 在樣品（原料浩擠）中加入已知量的雜質(zhì) 無法得到雜質(zhì)降解物的，與采用其他方法測得的結(jié)果比較，可以使用原料的響應(yīng)值現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第六十四頁，共142頁3 . 5 推薦準確度測定方法 在六個空白樣品中，分別加入已知濃度的樣品（濃度范圍為含量測定濃度的 80120 % ) 計算該方法的百分回收率現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第六十五頁，共142頁3.6推薦準確度測定接受標準 測定得到的主品的百分回收率與理論回收率100%間的相對標準偏差不得大于方

21、法重復(fù)性相對標準偏差的4倍現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第六十六頁，共142頁3.7AOAC濃度與回收率關(guān)系濃度（%）比率單位平均回收率（%）1001100%98-1021010-110%98-102110-21%97-1030.110-30.1%95-1050.0110-4100ppm90-1070.00110-510ppm80-1100.000110-61ppm80-1100.0000110-7100ppb80-1100.00000110-810ppb60-1150.000000110-91ppb40-120現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第六十七頁，共142頁4 . 0 檢測限 概念 直觀法 信噪比法 標準偏差和斜率法 推薦

22、檢測限測定方法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第六十八頁，共142頁4 . 1概念 8 ：檢測限ICH Q2 定義 檢測限度指的是樣品中的被分析物質(zhì)能夠被檢測到的最低量，但不一定要準確定量現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第六十九頁，共142頁4 . 2 直觀法 直觀評價可以用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法 檢測限的測定是通過對一系列已知濃度被分析物的樣品進行分析，并以能準確（或被可靠）地檢測被測物的最小量或最低濃度來建立現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第七十頁，共142頁4 . 3 信噪比法 用于能顯示基線噪音的分析方法把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較算出能被可靠地測出的最低濃度或量 一般以信噪比為3：1或2：1時相應(yīng)的濃

23、度或注入儀器的量確定檢測限現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第七十一頁，共142頁4 . 4 標準偏差和斜率法 根據(jù)響應(yīng)值的標準偏差和斜率 檢測限度（DL）=3 . 3 / s ：響應(yīng)值的標準偏差（通過空白樣品測背景響應(yīng)值或Y軸截距） s ：校正曲線的斜率（通過被測物的校正曲線求得）現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第七十二頁，共142頁4 . 5 推薦檢測限測定方法 在最靈敏的儀器狀態(tài)下 測定至少四個空白樣品 洗脫時間需要覆蓋整個樣品中所有組分的樣品溶液 每個樣品進樣三次 計算該組分的最小檢測限現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第七十三頁，共142頁5.0定量限 概念 推薦定量限測定方法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第七十四頁，共142頁5 . 1 概念 9 ：定量限ICH

24、 Q2 定義： 某種分析方法的定量限度是指具有合適準確性和精密度的條件下，能夠定量測定分析組分的最低限量。它是樣品中含量低的化合物定量分析的參數(shù)，特別適用于雜質(zhì)和（或）降解產(chǎn)物的測定現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第七十五頁，共142頁5 . 2 推薦定量限測定方法 按檢測限方法測定儀器的平均噪聲 然后按信噪比等于10.00.5配置樣品溶液 連續(xù)進樣三次 計算組分的最小定量限現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第七十六頁，共142頁6 . 0 耐用性 概念 變動因素 色譜分析中耐用性項目現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第七十七頁，共142頁6 . 1 概念概念10:耐用性耐用性ICHQ2 定義 分析方法的耐用性是指試驗參數(shù)適當?shù)匕l(fā)生細小改變時，測量能力保持

25、不受影響，可用于說明正常使用時的可靠性現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第七十八頁，共142頁6 . 2 變動因素 流動相的組成 pH值 不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱 柱溫 流速等現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第七十九頁，共142頁6 . 2 變動因素 典型氣相色譜法變動因素 載氣 流速 不同廠牌或批號的色譜柱 固定相 擔體 柱溫 進樣口 檢測器溫度現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第八十頁，共142頁6.3色譜分析中耐用性項目分析方法變量所有分析樣品制備操作提取時間HPLC濃度項組成不同的柱溫度濃度GC不同的柱溫度流量現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第八十一頁，共142頁7 . 0 線性度 概念 線性范圍 推薦線性度測定方法 推薦線性度測定接受標準現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第八十二

26、頁，共142頁7 . 1 概念11 ：線性度ICHQ2 定義 分析方法的線性是指在給定的范圍內(nèi)檢測結(jié)果與樣品中被分析物的濃度（含量）成比例關(guān)系的能力現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第八十三頁，共142頁7 . 3 推薦線性度測定方法 在含量測定濃度的70%-130%或50%-150%均勻選擇至少六個不同的濃度點 每一個嘗試至少需要測定四次 記錄各對應(yīng)濃度下的響應(yīng)值現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第八十四頁，共142頁7 . 2 推薦線性度測定接受標準 相關(guān)系數(shù)應(yīng)當在0 . 999與1 . 000 之間 經(jīng)線性回歸處理 其截距不應(yīng)明顯地偏離零點現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第八十五頁，共142頁8 . 0 專屬性 概念 推薦專屬性測定方法 降解研究內(nèi)容

27、現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第八十六頁，共142頁8.1概念13：專屬性ICH-Q2定義 專屬性是指在一些可能存在的組分，如雜質(zhì)，降解物，基質(zhì)等存在時，對被分析物準確可靠測定的能力現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第八十七頁，共142頁8.1推薦專屬性測定方法 按照規(guī)定的標準或參考文獻的色譜分析方法 分別將原料藥，中間體，可得到雜質(zhì)，原料，中間體，前體及降解產(chǎn)物的樣品分別進樣 記錄各物質(zhì)的相對保留時間 確保各樣品之間的峰可以分開 至少確保其他物質(zhì)的峰與主峰分開現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第八十八頁，共142頁8 . 2 概念 14 ：穩(wěn)定性指示性分析方法FDA定義 穩(wěn)定性指示性分析方法是一種驗證了的定量分析方法，其能夠測定原料藥或藥品在有關(guān)性質(zhì)的

28、變化 一個穩(wěn)定性指示性分析能在沒有降解產(chǎn)物，工藝雜質(zhì)，輔助材料或其他的雜質(zhì)干擾下，準確地對活性成分進行測量現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第八十九頁，共142頁8 . 3 降解研究目的 降解途徑 影響因素 確定包裝 分析方法專屬性現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第九十頁，共142頁8 . 4 降解研究內(nèi)容 光 酸 堿 氧化 還原 高熱 高濕現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第九十一頁，共142頁Validation of Analytical Procedure分析方法驗證 第二部分：實驗設(shè)計與操作現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第九十二頁，共142頁Validation of Analytical Procedure分析方法驗證 第三部分：鹽酸氟西汀驗證實例現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第

29、九十三頁，共142頁1 . 1 目的 掌握色譜方法驗證所需要的項目 掌握色譜驗證基本實驗方法 了解穩(wěn)定性指示性方法驗證的要求 了解析因分析在驗證中應(yīng)用現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第九十四頁，共142頁1 . 2 簡介 美國某公司生產(chǎn)10mg和20mg鹽酸氟西汀兩種相膠囊 其重量與配方相同僅鹽酸氟西汀與輔料比例不同 所驗證方法時公司內(nèi)部對美國和歐盟市場產(chǎn)品放行和穩(wěn)定性研究中使用的含量和雜質(zhì)分析的方法 該分析方法已經(jīng)建立現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第九十五頁，共142頁1 . 3 驗證項目清單 1 精密度 2 線性 3 范圍 4 準確性 5 低濃度鹽酸氟西汀驗證 6 m -鹽酸氟西汀驗證 7 選擇性 8 耐用性現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第九十

30、六頁，共142頁2 . 0 精密度 項目： 系統(tǒng)重復(fù)性方法重復(fù)性中間精密度現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第九十七頁，共142頁2 . 1 系統(tǒng)重復(fù)性 方法 按照分析方法要求，配制鹽酸氟西汀標準溶液 重復(fù)進樣 5 次 計算 峰面積平均值與相對標準偏差現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第九十八頁，共142頁2 . 2 方法重復(fù)性 方法 按照分析方法要求，分別配制 20mg 鹽酸氟西汀樣品溶液 6 個分別進樣 計算 含量相對標準偏差現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第九十九頁，共142頁2 . 3 中間精密度 方法 由另外一個分析員，在不同日期，另外的儀器上，按照分析方法 分別配制 20 mg 鹽酸氟西汀樣品溶液 6 個 計算 含量及相對標準偏差現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第

31、一百頁，共142頁3 . 0 線性 方法 正常含量分析用標準溶液濃度的 50到 200% 范圍內(nèi) 均勻選擇 5個點 并配制相應(yīng)濃度的鹽酸氟西汀含量標準溶液 分別進樣 計算 線性回歸分析 相關(guān)系數(shù)，斜率，Y軸截距現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百零一頁，共142頁4 . 0 范圍 方法 正常20mg樣品含量分析濃度50到200范圍內(nèi) 均勻選5個點 配制鹽酸氟西汀樣品溶液 分別進樣 計算 線性回歸分析 相關(guān)系數(shù)，斜率，Y軸截距現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百零二頁，共142頁5 . 0 準確性 項目 標準品準確性 樣品準確性現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百零三頁，共142頁5 . 1 標準品準確性 方法 按照分析方法要求，配制鹽酸氟西汀標準

32、溶液重復(fù)進樣 5 次 計算 準確性 測定濃度值用峰面積按照回歸方程進行計算現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百零四頁，共142頁5 . 2 樣品準確性 方法 按照產(chǎn)品標準量，在70到180正常標示量選均勻選擇 4 個點，混合輔料與及鹽酸氟西汀 每點3個樣品，分別進樣 計算 回收率測定濃度值用峰面積按照回歸方程進行計算現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百零五頁，共142頁6 . 0低濃度鹽酸氟西汀驗證 項目： 線性 準確性 系統(tǒng)重復(fù)性 定量限度 檢測限度現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百零六頁，共142頁6 . 1 線性 方法 按照分析方法要求，均勻選擇 6個點配制標示量的 0 . 02到 1 . 0 含量標準溶液 分別進樣 計算 線性回歸分析

33、相關(guān)系數(shù)，斜率，Y袖截距現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百零七頁，共142頁6 . 2 準確性 方法 配制雜質(zhì)濃度的標準溶液 進樣6次 計算 按峰面積用回歸線性方程來計算測量濃度 平均值，相對標準偏差現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百零八頁，共142頁6 . 3 系統(tǒng)重復(fù)性 方法 配制工作濃度的 0 . 02和 0 . 05標準溶液 分別進樣6次 計算 峰面積的平均值與相對標準偏差現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百零九頁，共142頁6 . 4 定量限度 用系統(tǒng)重復(fù)性實驗中的標準偏和線性回歸 方程中的斜率差計算現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百一十頁，共142頁6 . 5 檢測限度 用系統(tǒng)重復(fù)性實驗中的標準偏和線性回歸 方程中的斜率差計算現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百一

34、十一頁，共142頁7 . 0 m -鹽酸氟西汀驗證 項目： 線性 檢測限度 定量限度 準確性 精密度方法重復(fù)性中間精密度 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百一十二頁，共142頁7 . 1 m-鹽酸氟西汀簡介 M -鹽酸氟西汀是產(chǎn)品中的一個雜質(zhì) m -鹽酸氟西汀在0 . 05- 1 . 0區(qū)間呈線性 相對響應(yīng)因子（對鹽酸氟西?。?F = 132 . 73952/74859534 = 1 . 8現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百一十三頁，共142頁7 . 2定量限度 根據(jù) 鹽酸氟西汀定量限相對響應(yīng)值 計算鹽酸 m -氟西汀定量限度現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百一十四頁，共142頁7 . 3 檢測限度 根據(jù) 鹽酸氟西汀檢測限度 相對響應(yīng)值 計

35、算鹽酸 m -氟西汀檢測限度現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百一十五頁，共142頁7 . 4回收 方法 分別6個標空白中加0 . 05的 m -鹽酸氟西汀 進樣 計算 回收率實際檢測值用峰面積按照回歸線性方程計算現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百一十六頁，共142頁7 . 5準確性 方法 在已知 m -鹽酸氟西汀含量的樣品中分別在0 . 4 % , 0 . 5和 0 . 6 % 3 個水平加入 m -鹽酸氟西汀標準品 每組3個樣品中 計算 回收率 實際檢測值用峰面積按照回歸線性方程計算現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百一十七頁，共142頁7 . 6 重復(fù)性 項目 方法重復(fù)性 中間精密度現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百一十八頁，共142頁7. 61方法重復(fù)

36、性 方法 按照要求配制溶液 反復(fù)進樣6次 計算 平均值 標準偏差 相對標準偏差現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百一十九頁，共142頁7 . 62 中間精密度 方法 另外一個分析員，在不同日期，另外的儀器上按照方法重復(fù)性方法 配制溶液6次 分別進樣 計算 含量及相對標準偏差現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百二十頁，共142頁8 . 0 選擇性1.降解 2.系統(tǒng)適用性 1）原樣 3.空白 2）酸降解 4）氧化降解 5）日光降解 6）溶液加熱降解 7）粉末加熱降解現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百二十一頁，共142頁8 . 1 簡介 降解產(chǎn)物的選擇性試驗是分析方法穩(wěn)定性指示性驗證的一個重要部分 主要目的是通過試驗證明各種降解的產(chǎn)物與所要分析的物質(zhì)

37、庫完全分開 本試驗中的主要設(shè)備是二極管矩陣檢測器并通過計算：純度角，匹配角，純度閾值匹配閾值，含量來證明峰的純度現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百二十二頁，共142頁8.2原樣品 方法 20mg膠囊按照規(guī)定的方法進行分析 標準品按照規(guī)定的方法進樣分析現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百二十三頁，共142頁8 . 3 酸降解 方法： 樣品：稱量大約等量20mg的樣品，轉(zhuǎn)移到 50ml 容量瓶中，加入20ml 稀釋劑，并超聲處理10分鐘。加 lml的濃鹽酸。放置18小時。用 10N 氫氧化鈉中和到 pH 5 . 5。稀釋到刻度。過濾。 標準品：稱量大約22mg 的標準品，轉(zhuǎn)移到 50ml 容量瓶中，加入 20ml稀釋劑，加2ml

38、的鹽酸。放置18小時。用10N氫氧化鈉中和到 pH5 . 5。稀釋到刻度。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百二十四頁，共142頁8 . 4堿降解 方法： 樣品：稱量大約等量20mg的樣品，轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中，加入20ml 稀釋劑，并超聲處理10分鐘。加 lml 的5N氫氧化鈉。放置18小時。用5N鹽酸中和到 pH 5 . 5。稀釋到刻度。過濾。 標準品：稱量大約22mg的標準品，轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中，加入20ml 稀釋劑，加2 ml的5N氫氧化鈉。放置18小時。用5N鹽酸中和到 p H5 . 5。稀釋到刻度。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一百二十五頁，共142頁8 . 5氧化降解 樣品：稱量大約等量20mg的樣品，轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中，加入20ml 稀釋劑，并超聲處理10分鐘。加 lml 的30%過氧化氫。放置5小時。稀釋到刻度。過濾。 標準品：稱量大約22mg的標準品，轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中，加入20ml