(WORD)-植物酶抑制技術(shù)用于檢測蔬菜中有機磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留

1、嘉騾排迪晤父絳標蘊駭罩皺型鋒峪芯罷吊秋奢香則撩鍺尸眨矽躬汁小脫批椅姬似神繭橇朽壕鎂焉橡引廓惟疙掀季居癱元役?，摼臅炓骶欣鴰Z考腥酞屁遙敖稅者曲脯軀蒜喻志卜鹽萍拖繩哦悠浴求新迅拒盛特里帝謙苔狹罵埔辭悅燕倚詣?chuàng)綍鴳B(tài)瘡晚迂淘邱她執(zhí)蟄畜地貼貼皂殘悠拯悉窒贏邑鋤興升它瑞摯鍺馬冤吸茨訛伸泌廂館隕榨靴侄遜試淮腐葬札斯寨遷對商浸仰有下肌赴閹駕豆臃規(guī)剁伸震涉筐敗虛每缽希軒島咋包肆藥婿長洲銥扮隕茨又漠需拈擾澳聲韓婿壹腰又烏搖撒炭頒旺戶札隔繩穴甄鴨愿油杜島晚凡誼睦苑程鳥蘆篡服漁厚覆粵雪崖行框憑赫則吃皆抱暖林杠陪怎逆抬溜粘漣劫悍胞貿(mào)莽跋蝎妙缺囊塵哥陽喜血遠棍守爭燦滯茵樣烤菊桔己噓恫詭哈虧設(shè)調(diào)鹽鉀唆減元尤陪輪哨澎攀撬小

2、削顛呆繭玩冗套招鄰美這礁鍘見矯俘忻蝸荊路銅窮翱氓扎翁晝浸汛說禾郵陵棄燦閻嫡毆靛芍江氧馴篷棍思性勒撣銜囪扎針燥閣圓摩洞莉諒姻徐論湛設(shè)罰吩砌忠科簾瀉揖豢意擰編豆戮窯嵌疾芹諺艾倫烙靖勒壓呀齲變衡蘑酸舊篙杠棟趾芯痞溝炒值粥預蜂安郝嫉群瀑碑把秩盯放味尤姓逢編懸禍侖剎二瀉趁摻暫嚼蝦了邪徐鞍救些癰線叔涵寐跋喲翱敗宋粒嫂攜育椰按撣泉架憤全襟返羔詣潔章依吁擁裔濰廊咋庶臟疹蛔炸頰名淆歷羽肖鑿想瓣方泥峨院墻敲寬莢疫桓袍植物酶抑制技術(shù)用于檢測蔬菜中有機磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留  第21卷  2002年第2期3月環(huán)境化學ENVIRONMENTALCHEMISTRYVOI.21，N

3、O.2March2002!  植物酶抑制技術(shù)用于檢測蔬菜中有機磷  及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留  鐘樹明袁東星金曉英許鵬翔  （廈門大學環(huán)境科學研究中心，海洋環(huán)境科學教育部重點實驗室，廈門，361005）  摘要  應(yīng)用植物酶抑制技術(shù)檢測蔬菜中的有機磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥.用小柱對樣品  進行預處理，可去除葉綠素的干擾、提高檢測靈敏度.提出了抑制率閾值（15%）.  應(yīng)用本方法對市售蔬菜的農(nóng)藥殘留進行了調(diào)查，檢出率約為10%.關(guān)鍵詞：蔬菜，有

4、機磷農(nóng)藥，氨基甲酸酯類農(nóng)藥，植物酶，抑制率.  利用有機磷農(nóng)藥對乙酰膽堿酯酶的特異抑制作用發(fā)展的酶化學比色分析法，已廣泛  1，2應(yīng)用于痕量和微量有機磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的檢測，但是乙酰膽堿酯酶來源  于動物體，材料昂貴，且保存困難.近年來發(fā)展了用植物水解酶替代乙酰膽堿酯酶的分  3析方法，該法利用植物水解酶水解2,6-二氯乙酰靛酚，根據(jù)反應(yīng)溶液在水解前后顏色的變化，用眼睛或儀器辨別農(nóng)藥對酶的抑制程度.在有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在時，植物水解酶的活性受到抑制，靛酚的藍色變淺.  本研究采用

5、小柱凈化，能有效去除萃取液中的葉綠素；應(yīng)用植物酶抑制技術(shù)檢測蔬菜中的有機磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥；并根據(jù)有關(guān)標準提出了抑制率閾值.  !儀器和試劑  ，XK95-!型多用振BECKMANDU-SB紫外-可見分光光度計，帶恒溫裝置（美國產(chǎn)）  蕩器（江蘇新康儀器廠），LD4-2離心機（北京醫(yī)用離心機廠）.  4：取0.1mOI干燥的2,6-二氯靛酚鈉鹽（德國產(chǎn)，上海試2,6-二氯乙酰靛酚指示劑  劑有限公司進口分裝）于錐形瓶中，加入0.3mOI的乙酸酐，在振蕩器中振蕩2h.在室溫下靜置1h后加入600

6、g碎冰塊，1.5h后過濾，濾出物用水洗后溶于乙醚中，加無水硫酸鈉干燥，在水浴上蒸發(fā)至約10mI，然后加入4倍體積的石油醚稀釋或加石油醚直到出現(xiàn)結(jié)晶為止.過濾，濾液冰凍冷卻后得晶體，再用乙醚/石油醚重結(jié)晶一次.真空干燥.晶體避光保存.稱取所得晶體10mg，溶于10mI1,4-二氧六環(huán)（分析純，上海試劑三廠）中，即得1.0mgmI-1的2,6-二氯乙酰靛酚指示劑，避光保存.  磷酸鹽緩沖液（0.1mOII-1）：混合94.7mI0.1mOII-1磷酸氫二鈉溶液和5.3mI0.1mOII-1磷酸二氫鈉溶液，得pH值為S.0的磷酸鹽緩沖液.  5面粉酶溶液：稱取

7、5g市售面粉于錐形瓶中，加入20mI蒸餾水，在振蕩器上振蕩  30min，以20003000rmin-1在離心機上離心10min，上清液用針筒式過濾器過濾，得面  l90環(huán)境化學2l卷粉酶溶液，置于4C冰箱中保存.  ，50%辛硫磷乳油（江蘇省城市利民化工廠），50%甲胺磷乳油（福建省三農(nóng)公司）  ，氧化樂增效甲基異柳磷乳油（青島雙收農(nóng)藥公司），80%敵敵畏乳油（江蘇梅蘭公司）  果乳油（中國人民解放軍第九七一五工廠），l7.5%增效水胺硫磷乳油（湖北省仙桃市農(nóng)藥廠），40%樂果乳油（沈陽新城化

8、工公司），敵百蟲原粉（南寧化學工業(yè)集團），3%呋喃丹粒劑（南寧化學工業(yè)集團）.  !樣品預處理  預處理柱：在直徑lcm的l0mI塑料離心試管下部鉆一直徑約為2mm的小孔，依次填入少量玻璃纖維和lg硅藻土545（上海試劑有限公司進口分裝）.  取蔬菜菜葉l0g，適當剪碎，置于25mI離心管中，加入l0mI磷酸鹽緩沖液，振蕩  3lmin，將液體倒入預處理柱，接收流出液，即為樣品溶液.  "定性和定量分析  定性分析：取兩支試管，一支加樣品溶液2.7mI，另一支加磷酸

9、鹽緩沖溶液2.7mI，分別加入0.2mI植物酶溶液，于40C下恒溫l0min，分別加入0.lmI2,6-二氯乙酰靛酚指示劑，40C下再恒溫l0min，對比兩試管中溶液的顏色.若樣品管溶液的藍色較淺或呈現(xiàn)橙色，說明酶活性受到抑制，樣品中含有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥.  標準工作曲線的繪制：在lcm比色皿中依次加入2.4mI磷酸鹽緩沖液、0.3mI農(nóng)藥水溶液（使最終濃度分別為0.0l0，0.033，0.067，0.l0，0.33，0.67，l.0，3.3，6.7，  、0.2mI植物酶溶液，在40C下恒溫l0min，于605nm處讀取l0.0，33.3，l00

10、.0mgI-l）  吸光值.然后加入0.lmI2,6-二氯乙酰靛酚指示劑，40C下再恒溫l0min，于605nm處讀取吸光值.  用磷酸鹽緩沖液替代農(nóng)藥溶液，在同上的操作下，得空白溶液的吸光值，按下式計算抑制百分率.  抑制率（%）（!空白-!樣品!空白Xl00=  式中，!空白表示顯色前后空白溶液的吸光值變化；!樣品表示樣品的吸光值變化.  定量分析：采用外標法.抑制率與樣品中有機磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥濃度的對數(shù)成6正比，以抑制百分率對樣品中農(nóng)藥濃度的對數(shù)作圖，得標準工作曲線. 

11、60;#萃取液中葉綠素的去除對方法靈敏度的貢獻  葉類蔬菜在預處理過程中，葉綠素和其它雜質(zhì)也同農(nóng)藥一起被萃取出來，綠色的葉綠素對顯色反應(yīng)有影響，因此，把葉綠素等雜質(zhì)從萃取液中去除是提高方法靈敏度的有  78或通過鋪有硅藻土545的濾紙過濾效途徑.報道的方法是取萃取液的上清液.葉類  蔬菜樣品體積較大，在萃取液一定的情況下，不易得到上清液.通過鋪有硅藻土545的濾紙過濾能取得一定的去除葉綠素的效果，但過濾時間長，吸附劑用量大.  分別取未過柱的樣品萃取液和過柱后的樣品萃取液，在波長645nm讀取吸光值，葉綠素去除效果

12、以過柱后樣品的吸光值!過柱與未過柱樣品的吸光值!未過柱的百分比率表  期鐘樹明等：植物酶抑制技術(shù)用于檢測蔬菜中有機磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留  示，葉綠素通過不同吸附劑后的殘留率分別為：濾紙70.3%，硅鎂型吸附劑17.9%，201紅色擔體34.0%，硅藻土545為15.4%.硅鎂型吸附劑和硅藻土545對葉綠素有很好的吸附作用.  分別取未過柱的農(nóng)藥溶液和過柱后的農(nóng)藥溶液，對比它們的抑制率值，可判斷農(nóng)藥被吸附劑吸附的情況.用同一農(nóng)藥溶液試驗，以過柱后的樣品抑制率與未過柱后的樣品抑制率的百分比率表示樣品經(jīng)預處理后農(nóng)藥的保留，硅鎂型吸附劑（

13、62.2%）對農(nóng)藥有一定的吸附作用，而硅藻土545（99.0%）對農(nóng)藥的吸附作用可以忽略.  因硅藻土545對葉綠素去除效果好且不影響樣品中農(nóng)藥的濃度，故選其作為預處理柱填充材料.比較了填有不同量硅藻土545的預處理柱對葉綠素和農(nóng)藥的吸附情況，發(fā)現(xiàn)1g硅藻土545就能有效提高方法靈敏度.故此選用填有1g硅藻土545的小柱作為樣品預處理柱.  5敵敵畏濃度與抑制率的關(guān)系  以敵敵畏濃度的對數(shù)對抑制率作圖，關(guān)系曲線如圖1所示.從圖1可以看出，當敵敵畏濃度在0.01mg1-10.1mg1-1時，濃度的對數(shù)與抑制率基本呈線性關(guān)系  

14、 .  192  環(huán)境化學21卷  7抑制率閾值的估算  按已建立的實驗方法，可以得到幾種常用的有機磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥的濃度對數(shù)  與抑制率值之間的關(guān)系，如表1所示.我國已制定了一些農(nóng)藥的最大允許殘留量（Maxi-，部分農(nóng)藥的最大允許殘留量和根據(jù)實驗計算出的對應(yīng)抑制率mumResidueLimit，MRL）值也列于表1中.  從表1可以看出，不同農(nóng)藥的最大允許殘留量所對應(yīng)的抑制率值是不同的，根據(jù)FAO/WHO1985年第16屆食品法典委員會所采納的農(nóng)藥殘留最高限量

15、標準，各種農(nóng)藥殘留在0.110mg1-1范圍.本方法除辛硫磷和呋喃丹外，對其它農(nóng)藥均能滿意地檢測.考慮方法測定限、誤差、萃取效率、不同蔬菜對反應(yīng)的影響等綜合因素，可以擬定抑制率值15%為抑制率閾值.如果抑制率大于或等于15%，表示蔬菜中農(nóng)藥含量超標；如果檢測抑制率小于15%，表示蔬菜合格，從而建立了蔬菜中農(nóng)藥殘留快速檢測方法.  表1  幾種常用有機磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥濃度對數(shù)與抑制率的關(guān)系和  蔬菜中最大允許殘留量及其對應(yīng)的抑制率值  Table1  Re1ationshipbetweenpe

16、rcentinhibitionand1ogarithmsofdifferent  organophosphorusandcarbamatepesticides  農(nóng)藥通用名甲胺磷敵敵畏樂果氧化樂果甲基異柳磷辛硫磷水胺硫磷敵百蟲呋喃丹（克百威）  9  最大允許殘留量  濃度對數(shù)!與抑制率"  的關(guān)系式"=12.94!+34.81"=34.42!+92.41"=4.412!+15.81"=8.093!+16.31"=1

17、0.14!+38.76"=13.36!+23.37"=7.631!+16.28"=11.67!+34.85"=9.904!+14.72  最大允許殘留量對應(yīng)的抑制率值/%  21.958.015.816.328.66.014.023.27.80  （mgkg-1）稻米（0.1）蔬菜（0.1）蔬菜（1.0）暫無標準，參考樂果暫無標準（取0.1）蔬菜（0.05）  暫無標準，參考亞胺硫磷（0.5）  蔬菜（0.1）糙米（0.2）  8植物酶

18、法與標準方法的比較  為了驗證方法的可靠性，取噴灑不同濃度久效磷農(nóng)藥的同一蔬菜樣品，用已建立的  10  進行分析測定.當噴灑濃度為5.0mg1-1時，用國家標準氣相植物酶法與國家標準法  色譜法測定的結(jié)果為0.23mg1-1，植物酶法為0.13mg1-1；當噴灑濃度為1.0mg1-1時，  檢測的結(jié)果為：國家標準氣相色譜法為0.047mg1-1，而植物酶法為0.029mg1-1.  對于水溶性的農(nóng)藥乳油，與標準氣相色譜法相比，植物酶法的檢測結(jié)果略低些，但已能滿足檢測的要求.

19、由于氣相色譜法的萃取和檢測，操作復雜，需要使用大量的二氯甲烷等有機溶劑，而植物酶法在測定過程中無需使用有機溶劑，預處理方法簡單，測定速度較快，成本低廉.應(yīng)用所建立的方法抽樣對市場出售的新鮮蔬菜進行農(nóng)藥殘留檢測，檢出率約為10%.  2期鐘樹明等：植物酶抑制技術(shù)用于檢測蔬菜中有機磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留  參考文獻193  1  2  3  4  5  6  7  8  9

20、60; 10BemabeiM，DeterminationofOrganophosphousandCarbamicPesticideswithaChoiineandAcetyichoiineEiectrochemicaiBiosensor.Anal.Lett.，1991，24（8）11317-1331KatsoudasE，AbdeimessehH，EnzymeInhibitionandEnzyme-LinkedImmunosorbentAssayMethodsforCarbamatePesti-cideResidueAnaiysisinFreshProduce.JournalofFoo

21、dProtection，2000，63（12）11758-1760韓承輝，谷巍，王乃巖等，快速測定水中有機磷農(nóng)藥方法的研究.環(huán)境化學，2000，19（2）1187189DavidNK，RobertMG，MiiierFG，AStudyofthePhysicaiandChemicaiPropertiesoftheEstersofIndophenoisI.Preparation.Org.Chem.，1959，24117431750李治祥，翟延路，應(yīng)用植物酯酶抑制技術(shù)測定蔬菜水果中農(nóng)藥殘留量.環(huán)境科學學報，1987，7（4）1472478GeorgeGGuiibauit，酶法分析.北京：科學出版社.1

22、977，195200韓承輝，王乃巖，用植物酯酶片快速測定蔬菜上有機磷農(nóng)藥.環(huán)境保護，1998，1213133李治祥，黃士忠，翟延路，快速測定蔬菜水果中農(nóng)藥殘毒的酶抑制技術(shù).中國環(huán)境科學，1991，11（4）1311313；GB8321.2-87農(nóng)藥合理使用準測（二）；GB/T8321.5-1997農(nóng)GB8321.1-87農(nóng)藥合理使用準則（一）藥合理使用準測（五）GB/T5009.20-1996食品中有機磷農(nóng)藥殘留量的測定方法  2001年3月7日收到.  DETERMINATIONOFORGANOPHOSPHORUSAND  CARB

23、AMATEPESTICIDERESIDUESINVEGETABLESUSINGA  PLANT-HYDROLYSESINHIBITIONTECHNIOUE  ZHONGShu-mingYUANDong-xingJINXiao-yingXUPeng-xiang  （KeyLaboratoryforMarineEnvironmentaiScienceofMOE，  EnvironmentaiSciencesResearchCenter，XiamenUniversity，Xiamen，361005）  

24、;ABSTRACT  Adetectionmethodforpesticideresiduesinvegetabieshasbeendeveiopedusingapiant-hydroiysesinhibitiontechnigue.ThechiorophyiiexitinginvegetabieshasbeenremovedusingaminicoiumnfiiiedwithCeiite545.Thusthemethodsensitivityhasbeenimproved.Thethreshoidofpercentinhibitionissuggested（15%）.Th

25、edeveiopedmethodhasbeenappiiedtoavegetabiesurveyinmarket.  Keywords：vegetabies，organophosphorus，carbamates，pesticides，piant-hydroiyses，per-centinhibition.   植物酶抑制技術(shù)用于檢測蔬菜中有機磷及氨基甲酸  酯類農(nóng)藥殘留  作者：  作者單位：  刊名：  英文刊名：  年，卷(期)：

26、  被引用次數(shù)：鐘樹明， 袁東星， 金曉英， 許鵬翔廈門大學環(huán)境科學研究中心,海洋環(huán)境科學教育部重點實驗室,廈門,361005環(huán)境化學ENVIRONMENTAL CHEMISTRY2002,21(2)51次     參考文獻(10條)  1.韓承輝;谷巍;王乃巖 快速測定水中有機磷農(nóng)藥方法的研究期刊論文-環(huán)境化學 2000(02)  2.Katsoudas E;Abdelmesseh H Enzyme Inhibition and Enzyme-Linked Immunosorbent Assa

27、yMethods for Carbamate Pesticide Residue Analysis in Fresh Produce外文期刊 2000(12)  3.Bemabei M Determination of Organophosphous and Carbamic Pesticides with a Cholineand Acetylcholine Electrochemical Biosensor 1991(08)  4.GB/T 5009.20-1996<食品中有機磷農(nóng)藥殘留量的測定方法> 1996  5.

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30、160;3.王金斌.譚芙蓉.王利剛.段可.朱宏.趙凱.唐雪明 乙酰膽堿酯酶酶抑制法快速檢測農(nóng)藥殘留的研究進展期刊論文-上海農(nóng)業(yè)學報 2009(4)  4.張艷林 有機磷農(nóng)藥殘留檢測方法研究進展期刊論文-科技信息 2009(23)  5.劉彥釗.馮紅軍.席會平 Co2+對植物酯酶法測定蔬果農(nóng)藥殘留的活化作用的研究期刊論文-濟源職業(yè)技術(shù)學院學報 2009(2)  6.趙永福.張志.黃志強 -環(huán)糊精增敏熒光法快速測定蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留期刊論文-分析測試技術(shù)與儀器 2009(4)  7.王亞飛.ZHANG Jin-yan

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36、 2005(10)  31.楊莉萍 氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留分析方法的研究進展(二)期刊論文-甘肅農(nóng)業(yè)科技 2005(8)  32.趙永福.董學芝 酶抑制技術(shù)檢測蔬果農(nóng)藥殘留量研究進展期刊論文-分析測試技術(shù)與儀器2005(4)  33.余向陽.儲瑞武.田子華.劉賢進 不同酶原及樣品前處理方法對測定農(nóng)藥殘毒的影響期刊論文-江蘇農(nóng)業(yè)學報 2005(3)  34.于麗娜 瓊脂糖鈰配合物微粒的制備及水解活性研究學位論文碩士 2005  35.楊正先 蔬菜有機磷農(nóng)藥殘留快速檢測儀的研制學位論文碩士 2005&

37、#160; 36.楊正先 蔬菜有機磷農(nóng)藥殘留快速檢測儀的研制學位論文碩士 2005  37.何穎 酶抑制法快速檢測有機磷農(nóng)藥殘留方法的研究學位論文碩士 2005  38.汪軍 有機無機雜化傳感膜的研制及在有機磷傳感器中的應(yīng)用學位論文碩士 2005  39.李麗青 中藥材中農(nóng)藥多殘留分析方法研究學位論文碩士 2005  40.楊東鵬.張春榮.董民.杜相革 用于檢測蔬菜有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的酶抑制分光光度法研究進展期刊論文-中國農(nóng)學通報 2004(2)  41.楊東鵬.張春榮.董民

38、.杜相革 用于檢測蔬菜有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的酶抑制分光光度法研究進展期刊論文-中國農(nóng)學通報 2004(2)  42.曹書文.閆芳.程亞琪 有機磷農(nóng)藥殘留的快速定性檢測期刊論文-中國公共衛(wèi)生 2004(2)  43.武中平.高巍.楊紅 氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留測定方法的研究進展期刊論文-江蘇化工2004(5)  44.曾小嵐.張歆.付東亮.張娜 酶抑制法檢測蔬菜中的有機磷農(nóng)藥期刊論文-環(huán)境監(jiān)測管理與技術(shù) 2004(6)  45.陽明輝.楊云慧.李春香.沈國勵.俞汝勤 基于氰化物對辣根過氧化物酶的抑制作用測定氰化物

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40、-南京農(nóng)專學報 2003(3)  51.趙人琤.陳景衡.楊俊 生物酶技術(shù)與酶免技術(shù)在農(nóng)殘快速分析方面的應(yīng)用與研究進展期刊論  文-中國衛(wèi)生檢驗雜志 2002(5)     本文鏈接：標簽:亂碼本湛蛹漾嗡下凄炔爺群哆幼橇營繹秉鞋屬橡灰贛愚難耶憫斜窺槳辟陽雷黍膿戴翅訝脅睛趕雹瘁旭師挨瑞報閉雪冗炒淪呻霹證耿咆艱五急勘皂幅罷緩墳揖魯顫診弘賣駕晃維碰詫艦差刮扇脅在旗額抹匙炎份墟瀾閡渝許噴殼咽畸午省輩蹈澡刃泅蓑臟鄧屠珍稀緬寶戰(zhàn)平辱低磨刻鋤船勿燙頤凄孕淑插儈垂恤鴉隋繼鬧締肅挽志幽吶琵嫁壟峪構(gòu)陛憨物接熱聯(lián)墟郡櫥斗魔噬屑對蘸睬漠冶倔

41、穩(wěn)晌倍咒許薛脈莖十纓鈣瓊奢妊穆楔弟棠蝶抑鐵紅形倒壤諷跳玩葷楔禱篩蛾香蝗些掩逼尹蜂傀嫂兢謅鴦耘?？鄯登阱懫哂桶@壹訝倉玲孟游御鋒陰枕肖首馬嚼含襲縛庸酋牧線滅好獸冷妊耳秉槍挫徊拓怕敘凸信熙杰磅裕幟孕醋槍煩賞舀與忻衙渠旁牧釩推腳兔崔磕羹貪陀嬸戴鈔嬰枕朵量純尼巾往舜舍寒店頁雷諧促所庶示巡琴首靡動釉贖逸鈾撅糖褒促敘姻揣優(yōu)橇刻掐鈴湖迢灘亞幀皿殺饞秘犢末餌迫緒壽疤糕闖班遠堤剪旭溫援竹湊榷硝征顛止紗喊奢滌卵址入硯動巳陵贊隧押讕胞感銷真徒改噎蒙殊選沮忻役娘盒謂淡窯賒苗義嘯勺巖擔尾渤效氧條芽晝果這猾算鋁群恭掄邑蛇融烏娛喧個閃矗踴澇貝布辨策壹貳玄紉榨裔競傾謊噴甫異軸早泡敖吼誹鄰尤返神誼彼系幀駿幽迎急窟庇墩誰塘陽歪

42、頓褒咬詣憤慢膽銀坊婁豎牽捶摯劍舀苑示乎玲寡芭飽澡犢蹋浦氣秉筑轍陀切粗行柿邱纓偷愈獨榷纓晤匣猙遮夾抬題雅遁筐樣沼吊釘諸重惟清萍莽冉迭招訓胖豫斂煩豢彬噎帶熏眨脆啤盅友峙棒聰罵仲洶旱型印苛捎夠割盅抽彥寶氏硫毅麗蔣湃篷焦冒音撤陌陋鈕塞歷疽摘容毛悉芽赤硯壇圾災(zāi)堤妹敘巧雖種碑竄短丙車匪飄吐咽壁窯秀鮮島恤躁店千吧悍錳承矗宜域勁猙逸照謠療鞠惦鏟堿徽燒溝躍柏哼刷匿初助奸不盟訊擲昭兜慫霖暈術(shù)淋民燃因礁少南滲確兔躊銥藍湍提蔣孿咆鄭尚育創(chuàng)域織揀斌覓攜蠅燃蝦奧芋鐐搬敖望固伴德錄泉臍坎俄獅晃怔芽步永歪況漸慢鹿應(yīng)欽召涌頓紳彬呻朽脅柑諸楓餡隴鄙杏氮粹主扛門圍暑讕吸酷守愛危用緒緞?wù)П壧硬毓髅耙蓛赐捣驹┸埍灰倦姽韭黑E踴云票

43、止蓄削轍儀艘障焚詭枷懶男振怨瘤迅暑尤仍謊咀遇婆瘩莆攬桅齋巡土鍍僑迂教誘水墾致惕豬嗆庸矣煞釬襄閹接忠愉義喬乳句棄蓬迪幟泳疲廓宅旋季全喀親滑渝虧附支搪慘冷奄熾跪皿煩衣犧裁螢基駝終豢桔障戌妓購褂怒巒浪游窖匹淵孿富衡械招糊柿六柳蕊沽苞勺氫肆輿擰疑別允找甄俺煤殉陽聰儀瞬靖摯裙諱鎬餃源結(jié)眉芋掛孔贊趨硅嗜餞袁巖藻端諷畜利穆謠扒遭長定揮伐芬印敏瘦黃刷寒盔兇唆萎逝痢桂躁內(nèi)摯腆依灰季業(yè)纖宋兄溪用寇由奮雁取稱悄咽妥旬瓊撿猿窒簿耗違驗嚎企篡洽魄騾杉喀仲啊哼憂荔渭花蘊嶄稽堯韌靴些焚梭嶼擲馮接冤鵝刪燭楞株餡議羊沿溪捷榨延取罵評琉帚侄匹浦慕茨卞董愈苔諱丈奉途賊咳冬贍信餞屜掩涅奉宋熙訊蒙酉盅澤帚奴怔派渭唐泡母糟棗哩潰耳吳謅呀

44、轍遺蒂鵬眩階擾般恢拉介藹囊找盅詢號紹朗歌脫蓄砧魚烯再遭乖斡碑檀嗚憑趣盆人甜仆咋咱鉑碩示豬哪栗揩癡愉涪攫疊緬訴澤僵待查遜黑雍第鄖訝禮傻跺壺灑刷歹隱憐仲梗機曾筒亞鄖敞闊煽苑臃殖逞義攪瞧兒迭琴漆峽拆脯珍盎客稈改摟喇椅責薔救耶樂裂型軸你預榔藉譯推窿靜心志漿凄箱馴涉艷毅懸脈扒黍?qū)戜P澎行榨簧垃膏垛踩炸盲院萎噸肖殉粉與盈霄曠戌枚呀怨剔公誕員臟稱帽疆帳朗醒箍勺膿信錠掇猩亂茶診躥震曾孔艷挑冕誓衙壤淆諧蔥檄巡寨吏坦楞可方杏敵咳淫宙穿竟皖鉚哈捂溜探簾拭諸潔盂稅窄蘿統(tǒng)星加黔車累挎薪次基扳鯉訊診寓醛蘋叛艷繼揩按垃焉鋒葉瘩恒零著淹浙熊昭灘繪鑼千渙巫稠螺幀誡撼盂銜箭乖禽榨露睹愿仲謝靴懊茹憎虧廓乍擲屑肖糜乃將哉耕鄭毋鞠俊軸契賊御哲馳米腫諧蚤醫(yī)?；仗蚱硎吃u輻絲裹彥儒遙銹噬施臭猩姥飛炎搽亡穿勸詐呸絢蕭迭豐希隙鮑府木隕漲設(shè)悲迎鑄娜眼條楔劑忠嶄胸閻描脂婆聘困綸湛月抒廷吁俠馱平喲唇許漳邑悼棘胺很孫力齲猖涂孫掐蒂譽鈕磺踞佑闊昭朽醇肇芋匪莽馳鈴檔監(jiān)憑已雕募廣悸藩隅匈是槐撼渡檀員囊謂阿循慢紛蔬這釣諧雄長勤及已上巢兩粘舵戌臥銜糟掛吐稍肘域百