[理化生]222動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體第二課時(shí)ppt課件

1、復(fù)習(xí)題問(wèn)復(fù)習(xí)題問(wèn)1 1、動(dòng)物細(xì)胞交融的原理？、動(dòng)物細(xì)胞交融的原理？2 2、誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞交融的方法？、誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞交融的方法？3 3、動(dòng)物細(xì)胞交融成功的標(biāo)志？、動(dòng)物細(xì)胞交融成功的標(biāo)志？4 4、動(dòng)物細(xì)胞交融最重要的應(yīng)用是？、動(dòng)物細(xì)胞交融最重要的應(yīng)用是？2.2.2 2.2.2 動(dòng)物細(xì)胞交融與動(dòng)物細(xì)胞交融與 單克隆抗體單克隆抗體第二課時(shí)第二課時(shí) 長(zhǎng)期以來(lái)，為了獲得抗體，采用的是把某長(zhǎng)期以來(lái)，為了獲得抗體，采用的是把某種抗原反復(fù)注射到動(dòng)物體內(nèi)，然后從動(dòng)物血清種抗原反復(fù)注射到動(dòng)物體內(nèi)，然后從動(dòng)物血清中別離出所需抗體的方法。用這種方法獲得的中別離出所需抗體的方法。用這種方法獲得的抗體，不僅抗體，不僅產(chǎn)量低產(chǎn)

2、量低，而且抗體的，而且抗體的特異性差特異性差，純純度低度低，反響不夠靈敏反響不夠靈敏。人們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生。人們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生免疫反響的過(guò)程中，體內(nèi)的免疫反響的過(guò)程中，體內(nèi)的B B細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬(wàn)種以上的特異性抗體，但是每個(gè)百萬(wàn)種以上的特異性抗體，但是每個(gè)B B細(xì)胞只分細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。要想獲得大量的單一抗體，泌一種特異性抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個(gè)必須用單個(gè)B B細(xì)胞進(jìn)展無(wú)性繁殖，即細(xì)胞進(jìn)展無(wú)性繁殖，即克隆克隆。問(wèn)題：?jiǎn)栴}： 體外培養(yǎng)的條件下，一個(gè)體外培養(yǎng)的條件下，一個(gè)B B淋巴細(xì)胞是淋巴細(xì)胞是不可能無(wú)限增值的，如何使單個(gè)不可能無(wú)限增值的，如何使單個(gè)

3、B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞增殖呢？有什么方法能使一個(gè)細(xì)胞同時(shí)具備增殖呢？有什么方法能使一個(gè)細(xì)胞同時(shí)具備產(chǎn)生抗體產(chǎn)生抗體和和無(wú)限增殖無(wú)限增殖才能呢？才能呢？19751975年英國(guó)科學(xué)家米爾斯坦和柯勒的實(shí)驗(yàn)?zāi)暧?guó)科學(xué)家米爾斯坦和柯勒的實(shí)驗(yàn)雜交瘤技術(shù)雜交瘤技術(shù)兩人因此在兩人因此在19841984年獲諾貝爾獎(jiǎng)年獲諾貝爾獎(jiǎng) 將可以產(chǎn)生特定抗體的將可以產(chǎn)生特定抗體的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞和具有無(wú)限增殖才能的和具有無(wú)限增殖才能的骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞交融交融在一起，形成在一起，形成雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞既能既能在體外快速增殖，在體外快速增殖，又能又能持續(xù)分泌特持續(xù)分泌特異性抗體。異性抗體。

4、二、單克隆抗體二、單克隆抗體 由單個(gè)由單個(gè)B B淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)無(wú)性繁殖克隆淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)無(wú)性繁殖克隆形成基因型一樣的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生形成基因型一樣的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體?？贵w。1 1、概念、概念特異性強(qiáng)、靈敏度高特異性強(qiáng)、靈敏度高, ,并且可以大量制備并且可以大量制備2 2、優(yōu)點(diǎn)、優(yōu)點(diǎn)3 3、制備過(guò)程、制備過(guò)程體內(nèi)培養(yǎng)體內(nèi)培養(yǎng)注射抗原注射抗原已免疫的已免疫的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞篩篩 選選雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞能產(chǎn)生特定抗體的雜能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞交瘤細(xì)胞篩篩 選選體外培養(yǎng)體外培

5、養(yǎng)單克隆抗體單克隆抗體第一次挑選選擇培養(yǎng)基：第一次挑選選擇培養(yǎng)基：雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞第二次挑選專一抗體陽(yáng)性檢驗(yàn)：第二次挑選專一抗體陽(yáng)性檢驗(yàn)：能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞4 4、兩次挑選的目的、兩次挑選的目的 交融后的細(xì)胞經(jīng)選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能交融后的細(xì)胞經(jīng)選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細(xì)胞就是雜交瘤細(xì)胞。但這些雜交瘤存活的細(xì)胞就是雜交瘤細(xì)胞。但這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞，通常細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞，通常用用“有限稀釋法來(lái)選擇。將雜交瘤細(xì)胞稀有限稀釋法來(lái)選擇。將雜交瘤細(xì)胞稀釋，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不釋，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細(xì)

6、胞不超過(guò)一個(gè)，通過(guò)培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測(cè)各超過(guò)一個(gè)，通過(guò)培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測(cè)各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體常用酶聯(lián)免疫孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體常用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法，那些上清液可與特定抗原結(jié)吸附試驗(yàn)法，那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽(yáng)性孔。合的培養(yǎng)孔為陽(yáng)性孔。 陽(yáng)性孔中的細(xì)胞還不能保證是來(lái)自單陽(yáng)性孔中的細(xì)胞還不能保證是來(lái)自單個(gè)細(xì)胞，挑選陽(yáng)性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)展有限個(gè)細(xì)胞，挑選陽(yáng)性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)展有限稀釋，一般需進(jìn)展稀釋，一般需進(jìn)展3 34 4次，直至確信每個(gè)次，直至確信每個(gè)孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。該過(guò)程即孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。該過(guò)程即為雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。為雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)

7、。 能準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)的細(xì)微差異，并能準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)的細(xì)微差異，并跟一定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，具有跟一定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，具有準(zhǔn)確、高效、準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)。的優(yōu)點(diǎn)。5 5、單克隆抗體的應(yīng)用、單克隆抗體的應(yīng)用1 1、作為診斷試劑、作為診斷試劑2 2、用于治療疾病和運(yùn)載藥物、用于治療疾病和運(yùn)載藥物 主要用于癌癥治療，可制成主要用于癌癥治療，可制成“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈，也有少量用于治療其它疾病。也有少量用于治療其它疾病。生物導(dǎo)彈：?jiǎn)慰寺】贵w生物導(dǎo)彈：?jiǎn)慰寺】贵w + + 藥物藥物導(dǎo)向?qū)驈楊^彈頭動(dòng)物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程植物細(xì)胞工程植物細(xì)胞工程植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物體

8、細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交應(yīng)用應(yīng)用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)核移植技術(shù)核移植技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞交融動(dòng)物細(xì)胞交融單克隆抗體單克隆抗體細(xì)胞工程細(xì)胞工程2 2、B B淋巴細(xì)胞具有產(chǎn)生單一抗體的才能，但不淋巴細(xì)胞具有產(chǎn)生單一抗體的才能，但不能在體外增殖；骨髓瘤細(xì)胞是一種癌細(xì)胞，它能在體外增殖；骨髓瘤細(xì)胞是一種癌細(xì)胞，它能在體外培養(yǎng)條件下無(wú)限增殖，但不能產(chǎn)生抗能在體外培養(yǎng)條件下無(wú)限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。因此，把一種體。因此，把一種B B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)展細(xì)胞交融，產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，它會(huì)兼有兩個(gè)展細(xì)胞交融，產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，它會(huì)兼有兩個(gè)親本細(xì)胞的特性親本細(xì)胞的特性在體外培養(yǎng)條件下能不斷在體外培

9、養(yǎng)條件下能不斷增殖，同時(shí)能產(chǎn)生出某種特異性的抗體。增殖，同時(shí)能產(chǎn)生出某種特異性的抗體。 1 1、單克隆抗體是指單克隆抗體是指 A. A.單個(gè)骨髓瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的抗體單個(gè)骨髓瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的抗體 B. B.單個(gè)單個(gè)B B淋巴細(xì)胞增殖產(chǎn)生的抗體淋巴細(xì)胞增殖產(chǎn)生的抗體 C. C.單個(gè)雜交瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的高度單一的單個(gè)雜交瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的高度單一的抗體抗體 D. D.單個(gè)抗體通過(guò)克隆化，產(chǎn)生大量抗體單個(gè)抗體通過(guò)克隆化，產(chǎn)生大量抗體C 2 2、科學(xué)家們用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞交科學(xué)家們用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞交融，得到雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量克隆融，得到雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量克隆抗體，與骨

10、髓瘤細(xì)胞交融的是抗體，與骨髓瘤細(xì)胞交融的是 A. A.經(jīng)過(guò)免疫的經(jīng)過(guò)免疫的T T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 B. B.未經(jīng)過(guò)免疫的未經(jīng)過(guò)免疫的T T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 C. C.經(jīng)過(guò)免疫的經(jīng)過(guò)免疫的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 D. D.未經(jīng)過(guò)免疫的未經(jīng)過(guò)免疫的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 C3 3、單克隆抗體制備過(guò)程中雜交瘤細(xì)胞是、單克隆抗體制備過(guò)程中雜交瘤細(xì)胞是A.A.由小鼠能產(chǎn)生抗體的由小鼠能產(chǎn)生抗體的B B淋巴細(xì)胞與肝細(xì)胞交融淋巴細(xì)胞與肝細(xì)胞交融 B.B.由小鼠一個(gè)由小鼠一個(gè)B B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)交融而成淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)交融而成 C.C.由小鼠一個(gè)由小鼠一個(gè)B B淋巴細(xì)胞與肌瘤細(xì)胞誘導(dǎo)交融而淋巴細(xì)胞與肌瘤細(xì)胞誘導(dǎo)交融

11、而成成 D.D.由小鼠一個(gè)由小鼠一個(gè)B B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)交融淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)交融而成而成 D4 4、單克隆抗體制備過(guò)程中，骨髓瘤細(xì)胞和、單克隆抗體制備過(guò)程中，骨髓瘤細(xì)胞和B B淋巴淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)交融后，要用特定培養(yǎng)基挑選出雜交瘤細(xì)胞誘導(dǎo)交融后，要用特定培養(yǎng)基挑選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是 淋巴細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞淋巴細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞 B B淋巴細(xì)胞自身交融細(xì)胞淋巴細(xì)胞自身交融細(xì)胞 小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身交融細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身交融細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 A A、 B B、 C C、 D D、 C5 5、用動(dòng)物細(xì)胞工

12、程技術(shù)獲取單克隆抗體，以下、用動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)獲取單克隆抗體，以下實(shí)驗(yàn)步驟中錯(cuò)誤的選項(xiàng)是實(shí)驗(yàn)步驟中錯(cuò)誤的選項(xiàng)是A A將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞B B用纖維素酶處理用纖維素酶處理B B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞胞C C用聚乙二醇作誘導(dǎo)劑，促使能產(chǎn)生抗體的用聚乙二醇作誘導(dǎo)劑，促使能產(chǎn)生抗體的B B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞交融淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞交融D D挑選雜交瘤細(xì)胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗挑選雜交瘤細(xì)胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體的細(xì)胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體體的細(xì)胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體B6.6.關(guān)于單

13、克隆抗體，以下表達(dá)不正確的選項(xiàng)是關(guān)于單克隆抗體，以下表達(dá)不正確的選項(xiàng)是A.A.可以制成診斷盒，用于疾病的診斷可以制成診斷盒，用于疾病的診斷B.B.可以與藥物結(jié)合，用于病變細(xì)胞的定向治療可以與藥物結(jié)合，用于病變細(xì)胞的定向治療C.C.可以利用基因工程技術(shù)消費(fèi)可以利用基因工程技術(shù)消費(fèi) D.D.可以在生物體內(nèi)消費(fèi)，不能體外消費(fèi)可以在生物體內(nèi)消費(fèi)，不能體外消費(fèi)D7 7、“生物導(dǎo)彈是指生物導(dǎo)彈是指 A. A.單克隆抗體單克隆抗體 B. B.雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 C. C.產(chǎn)生特定抗體的產(chǎn)生特定抗體的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 D. D.在單克隆抗體上連接抗癌藥物在單克隆抗體上連接抗癌藥物 D8 8、單克隆抗體

14、的優(yōu)點(diǎn)是、單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)是_9 9、單克隆抗體具有特異性強(qiáng)、靈敏度高的原、單克隆抗體具有特異性強(qiáng)、靈敏度高的原因是因是_1010、產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是、產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是_ 產(chǎn)生單克隆抗體的細(xì)胞是產(chǎn)生單克隆抗體的細(xì)胞是_特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備每一種每一種B B淋巴細(xì)胞只能分泌一種特異性抗體淋巴細(xì)胞只能分泌一種特異性抗體效應(yīng)效應(yīng)B B細(xì)胞漿細(xì)胞細(xì)胞漿細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞1111、雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)、雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn): :_1212、首次挑選是為了獲得、首次挑選是為了獲得_ 第二次挑選時(shí)為了獲得第二次挑選時(shí)為了獲得既能無(wú)限增殖，又能分泌特異性抗體既能無(wú)限增殖，又

15、能分泌特異性抗體雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞既能無(wú)限增殖，又能分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞既能無(wú)限增殖，又能分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞1313、看書(shū)上、看書(shū)上5353頁(yè)圖，分組討論，單抗制備過(guò)程分哪幾頁(yè)圖，分組討論，單抗制備過(guò)程分哪幾步？請(qǐng)用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過(guò)程步驟的步？請(qǐng)用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過(guò)程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來(lái)。順序是？圖解的字母按正確順序連接起來(lái)。順序是？ 1414、以下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)、以下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的消費(fèi)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案：計(jì)的消費(fèi)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案：B體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜

16、交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔AC1 1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是_2 2、該方案能到達(dá)預(yù)期效果嗎？為什么？、該方案能到達(dá)預(yù)期效果嗎？為什么？3 3、A A是從小鼠的脾臟中獲得是從小鼠的脾臟中獲得_,_,該細(xì)胞該細(xì)胞可以產(chǎn)生可以產(chǎn)生_制備單克隆抗體制備單克隆抗體 不能。沒(méi)有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無(wú)法不能。沒(méi)有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無(wú)法獲得產(chǎn)生單一抗體的獲得產(chǎn)生單一抗體的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞B B細(xì)胞細(xì)胞抗體抗體4 4、圖中、圖中B B為為_(kāi)過(guò)程，常用過(guò)程，常用_作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承_的遺傳的遺傳特性，既能特性，既能_,_

17、,又能又能_。5 5、C C過(guò)程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過(guò)程包括過(guò)程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過(guò)程包括_培培養(yǎng)和養(yǎng)和_培養(yǎng)兩個(gè)階段，其中培養(yǎng)兩個(gè)階段，其中_代以內(nèi)的代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。細(xì)胞交融細(xì)胞交融滅活的病毒滅活的病毒雙親細(xì)胞雙親細(xì)胞分泌抗體分泌抗體無(wú)限增殖無(wú)限增殖原代原代傳代傳代50501515、以下圖是單克隆抗體制備流程階段示意圖：、以下圖是單克隆抗體制備流程階段示意圖：1 1_ _ 技術(shù)是單克隆抗體技術(shù)的根底。技術(shù)是單克隆抗體技術(shù)的根底。2 2根據(jù)培養(yǎng)基的用處分類，圖中根據(jù)培養(yǎng)基的用處分類，圖中HATHAT培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。3 3單克隆抗體與常規(guī)的血清抗體相比，最

18、大的優(yōu)越單克隆抗體與常規(guī)的血清抗體相比，最大的優(yōu)越性是性是_ _ _。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)選擇選擇特異性強(qiáng)特異性強(qiáng), ,靈敏度高靈敏度高4 4動(dòng)物細(xì)胞交融除了采用植物細(xì)胞原生質(zhì)體交融常動(dòng)物細(xì)胞交融除了采用植物細(xì)胞原生質(zhì)體交融常用的誘導(dǎo)劑外，還可以采用用的誘導(dǎo)劑外，還可以采用_ _ _。5 5選出的雜交瘤細(xì)胞既具備骨髓瘤細(xì)胞的選出的雜交瘤細(xì)胞既具備骨髓瘤細(xì)胞的_特點(diǎn)，又具備淋巴細(xì)胞的特點(diǎn)，又具備淋巴細(xì)胞的_ _ _特點(diǎn)。特點(diǎn)。6 6淋巴細(xì)胞是由動(dòng)物體淋巴細(xì)胞是由動(dòng)物體_中的中的_ _ _ _ _細(xì)胞分化、發(fā)育而來(lái)。細(xì)胞分化、發(fā)育而來(lái)。滅活的病毒滅活的病毒無(wú)限增殖無(wú)限增殖分泌特異性抗體分泌特異性抗體骨髓骨髓造血干細(xì)