高壓液相色譜HPLC常見故障及排除方法

1、高壓液相色譜HPLC常見故障及排除方法 (一)保留時間變化 可能的原因 : 解決方法1.柱溫變化 : 柱恒溫2.等度與梯度間未能充分平衡 : 至少用10倍柱體積的流動相平衡柱3.緩沖液容量不夠 : 用>25mmol/L的緩沖液4.柱污染 : 每天沖洗柱5.柱內(nèi)條件變化 : 穩(wěn)定進樣條件,調(diào)節(jié)流動相6.柱快達到壽命 : 采用保護柱(二)保留時間縮短可能的原因 : 解決方法1.流速增加 : 檢查泵,重新設定流速2.樣品超載 : 降低樣品量3.鍵合相流失 : 流動相PH值保持在37.5檢查柱的方向4.流動相組成變化 : 防止流動相蒸發(fā)或沉淀5.溫度增加 : 柱恒溫(三)保留時間延長可能

2、的原因 : 解決方法1.流速下降 : 管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡2.硅膠柱上活性點變化 : 用流動相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱3.鍵合相流失 : 同前(二)34.流動相組成變化 : 同前(二)45.溫度降低 : 同前(二)5(四)出現(xiàn)肩峰或分叉可能的原因 : 解決方法1.樣品體積過大 : 用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%2.樣品溶劑過強 : 采用較弱的樣品溶劑3.柱塌陷或形成短路通道 : 更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效 : 更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品5.進樣器損壞 : 更換進樣器轉(zhuǎn)子(五)基線噪聲可能的原因 : 解決方法1.氣泡

3、(尖銳峰) : 流動相脫氣,加柱后背壓2.污染(隨機噪聲) : 清洗柱,凈化樣品,用HPLC級試劑3.檢測器燈連續(xù)噪聲 : 更換氘燈4.電干擾(偶然噪聲) : 采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來源(如水浴等)5.檢測器中有氣泡 : 流動相脫氣,加柱后背壓(六)鬼峰可能的原因 : 解決方法1.進樣閥殘余峰 : 每次用后用強溶劑清洗閥,改進閥和樣品的清洗2.樣品中未知物 : 處理樣品3.柱未平衡 : 重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑 (尤其是離子對色譜)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜) : 每天新配,用抗氧化劑5.水污染(反相) : 通過變化平衡時間檢查水質(zhì)量，用HPLC級的水。成都雅源科技專業(yè)提供國產(chǎn)實

4、驗設備，進口實驗設備（島津、安捷倫等）主要產(chǎn)品：氣相色譜儀、液相色譜儀、色譜柱、氣相色譜柱、液相色譜柱、樣品瓶、標準品、凈化工作臺、旋光儀、熔點儀、色譜純試劑、純水機、酒色譜、柱溫箱、水分測定儀、分析天平、紫外可見分光光度計、離心機、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、超聲波清洗機、定氮儀、氮吹儀、折光儀、酸度計、電導率儀、農(nóng)殘速測儀、生物安全柜、恒溫濕箱、真空干燥箱、藥物穩(wěn)定性試驗箱、培養(yǎng)箱、干燥箱、馬弗爐、原子吸收等。(七)峰展寬可能的原因 : 解決方法1.進樣體積過大 : 同(四)12.在進樣閥中造成峰擴展 : 進樣前后排出氣泡以降低擴散3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢 : 設定速率應是每峰大于10點4.檢測器時間常數(shù)過大 : 設定時間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10%5.流動相粘度過高 : 增加柱溫,采用低粘度流動相6.檢測池體積過大 : 用小體積池,卸下熱交換器7.保留時間過長 : 等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫8.柱外體積過大 : 將連接管徑和連接管長度降至最小9.樣品過載 : 進小濃度小體積樣品（八）峰拖尾可能的原因 : 解決方法1.柱超載 : 降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相2.峰干擾 : 清潔樣品,調(diào)整流動相3.硅羥基作用 加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相PH值,鈍化樣品4.同前(四)4 : 同前(四)45.同前(四)3 5. : 同前(四)36.死體積或柱外體