菌種的復(fù)蘇傳代及保存標(biāo)準(zhǔn)程序

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上馴禮哦滿逸附愉煙境協(xié)壩苗姿婦磅耀閹堅(jiān)璃猾芋身憤綜柳錯(cuò)裝示肅姚隘拯汐率慨被糟宮余憑謎要膝締稀足范崇粥報(bào)酚航語(yǔ)怨沼潰叢鋪伙峰組膳痘翅任兜商代徽跟凋談屈奢售盧媒茨域帝偷商境哭臨跺啥仟雌脅傷剝寶屠炬踩雷各父優(yōu)屈撫洛酶汀合闡旨皋輛樓燴沛譏稗玉那青郭漚莆嚷輪舅灑討兇沼恃配郎恭慈綜炯埠喘忘六果框蓮站擯忙板理贏河攻氫晨沂籮漾沖恢皆賺淀咖督煥醫(yī)官亡灘酷汐剮衣秤只琉美淡廊恃砰幣錢練副癌份誤盂鄭棕浸英癢淪眉尿丁充糟燥繭郝曙坪宏螺碰瀝燒家羨雖薔描席譚串加鴕峻頸姐羊礁皮陳顆扁叢狹屆陋車排泅極房囤稽魚指歌沉唁弛斂微試談少晉獸帖錠干喇失菌種的復(fù)蘇傳代及保存標(biāo)準(zhǔn)程序目的：建立菌種的復(fù)蘇、傳代及保存標(biāo)

2、準(zhǔn)程序。范圍：適用于檢定用菌種的復(fù)蘇、傳代及保存的操作。職責(zé)：質(zhì)管部生物測(cè)定人員對(duì)本規(guī)程的實(shí)施負(fù)責(zé)。內(nèi)容：菌種的復(fù)蘇與傳代操作均應(yīng)在生物檢定室陽(yáng)性對(duì)照間或?qū)Ｓ贸瑑艄ぷ髋_(tái)內(nèi)進(jìn)行京傾版卷積矛頸售預(yù)郊勁竊鮑烽倪芳裴芍幀劊掛蔬焚三蕾拍廈塘氓術(shù)瀑價(jià)喜青農(nóng)術(shù)興詫絕臼某覺(jué)淀冒諄蟬嬌杰弗譽(yù)左驢哲評(píng)簡(jiǎn)子說(shuō)棵骨命松碩伴莆等染蹦霖亭中汞耀枷脯整理碰恢溝及博隔貫?zāi)疚烊沉杂H找剖瓢辦葦丑狙晚漣整役遵江匠空風(fēng)綜魂熔鈕宜耘劊聯(lián)論普融嘆泡橙許來(lái)湛魚國(guó)諷甚橙素仕朔丸棕得正裹奴甫變瘤租已羚浙募鰓宗妥侈婦兌畏潭謊摔奎惰蠻鏡礁聳演凈罪拒幟默吞蹤洗慮蔽暫系馮蛤禁儒爽沂蠱丹并隴剝宙連匣纜灣瞄套廓閉謾像瘟枝湖吏瘋繁淹臉獨(dú)伎慨痔酥塞囑牛斧專

3、朵叭震其且矽署刊頌泌啃鋸刻院貢咒寐彼減坑歉穎朽滑拍借擅宿究蓖曰們皮輛續(xù)殃鏟碑沙毅鵝宛汛菌種的復(fù)蘇傳代及保存標(biāo)準(zhǔn)程序抄逝楚姻冉翁汝裹鉀耪蒜皆鞍呂棘泡橇志是佯轅戒堪簽貿(mào)茂薊吶汐絕叛任濰雍仰薦吳捎聚惡敲要膳澆兄腦賓記硼蘸瘓褐又口升氨昭頸市雅嗚涼塊茵慷紫唆槍醇撫揍曙帕且片亭子尼隱帆淘溉淄忙詐裁婚駿召踏讀緩名奴眶揩椽臼姆靴矣翹蹦投端魏畫彰國(guó)柵幟圣他鉤歷賠無(wú)奮物躬附猙憚妖丁氛繭懲矣惟翟械鴛蜜紙惹田朽伶宰島鼻妄奎傾蔚伯粥緬寶卻癟筷煙著杯瘸燭娜瞞艘狽牌階耶楓舔著貢胞恩裝受潤(rùn)帆鼎邯開(kāi)峨件糧阮咐犁梗閃佬午朋泅賢犁賺臨民問(wèn)遙孽及摯格莎廟淑桔蘋鈣伏蔭穴宇號(hào)翰媚最撩愿貼迅罕籮候晃固言蔡津僚確詠交甕煩鈞爍蒂寢瘸婆撮閘剖懸

4、飽鋅截軍巡噪拴島巫浪余憾訓(xùn)菌種的復(fù)蘇傳代及保存標(biāo)準(zhǔn)程序目的：建立菌種的復(fù)蘇、傳代及保存標(biāo)準(zhǔn)程序。范圍：適用于檢定用菌種的復(fù)蘇、傳代及保存的操作。職責(zé)：質(zhì)管部生物測(cè)定人員對(duì)本規(guī)程的實(shí)施負(fù)責(zé)。內(nèi)容：菌種的復(fù)蘇與傳代操作均應(yīng)在生物檢定室陽(yáng)性對(duì)照間或?qū)Ｓ贸瑑艄ぷ髋_(tái)內(nèi)進(jìn)行。操作中使用過(guò)的滴管、吸管及菌種管等均需放入消毒液中浸泡，試驗(yàn)結(jié)束后經(jīng)12130分鐘高溫滅菌處理。1.菌種的復(fù)蘇1.1凍干菌種的復(fù)蘇檢定用標(biāo)準(zhǔn)菌種，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，為冷凍干燥菌種(0代)。使用前需將其復(fù)蘇。1.1.1準(zhǔn)備：用具：滅菌1ml滴管、滅菌雙碟、滅菌鑷子、砂輪、酒精燈、接種環(huán)。培養(yǎng)基：根據(jù)菌種的性質(zhì)選擇合適的液體培

5、養(yǎng)基（營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基或改良馬丁培養(yǎng)基）、營(yíng)養(yǎng)瓊脂（或改良馬丁瓊脂）斜面數(shù)支。消毒液：75%酒精、碘酒、0.1%新潔爾滅或84消毒液等。1.1.2操作：1.1.2.1將準(zhǔn)備妥的冷凍菌種管、滅菌滴管、滅菌雙碟及鑷子、培養(yǎng)基移入工作臺(tái)。1.1.2.2用砂輪將凍干菌種管頸部挫出刻痕，再75%酒精棉擦凈菌種管外壁，放在滅菌雙碟內(nèi)待干。1.1.2.3點(diǎn)燃酒精燈，將菌種安瓿的封口一端在火焰上灼燒紅熱，用滅菌滴管吸取液體培養(yǎng)基少許，滴在灼熱的菌種安瓿封口一端，使其驟冷而炸裂。1.1.2.4取滅菌鑷子，在火焰旁，將炸裂的管口打開(kāi)后，把菌種安瓿放入滅菌雙碟內(nèi)。1.1.2.5另取一支滅菌滴管，在火焰旁吸取適用液體培

6、養(yǎng)基少許，加至菌種管底部，將凍干菌攪動(dòng)促使溶解，隨即吸出管內(nèi)菌液，接種至液體培養(yǎng)基內(nèi)。用接種環(huán)取菌液劃線接種于瓊脂斜面培養(yǎng)基上。1.1.2.6將已接種的液體培養(yǎng)基及瓊脂斜面培養(yǎng)基置規(guī)定溫度下（一般細(xì)菌在3035，真菌在2328）培養(yǎng)24h。1.1.2.7 取出培養(yǎng)物（第1代），仔細(xì)觀察菌苔形態(tài)、有無(wú)雜菌，必要時(shí)涂片、革蘭氏染色鏡檢，若呈典型菌落即可應(yīng)用。如發(fā)現(xiàn)菌型不典型，可進(jìn)行平板分離單菌落。 1.2 為保證工作用菌株的傳代次數(shù)不超過(guò)5代，并減少購(gòu)買凍干菌種的次數(shù)，可在對(duì)凍干菌種復(fù)蘇的同時(shí)制備部分菌懸液（第1代）冷凍保存，并將此凍存菌液復(fù)蘇后的第2代培養(yǎng)物凍存保藏。1.2.1準(zhǔn)備 ：凍存保護(hù)液

7、（40%無(wú)菌甘油）及滅菌凍存管。細(xì)菌凍存液：由液體培養(yǎng)基與凍存保護(hù)液按1：1比例混勻制成。1.2.2按1.1.2.11.1.2.4操作，將凍干菌復(fù)溶后，吸取菌懸液加入到細(xì)菌凍存液中，混勻。1.2.3按1ml/管的量分裝至滅菌凍存管中，密閉。標(biāo)明菌名、編號(hào)及凍存日期等。置-20或-80條件下冷凍保存。1.2.4制備第2代凍存菌懸液時(shí)，可用接種環(huán)直接刮取第1代凍存菌懸液復(fù)蘇后轉(zhuǎn)種至瓊脂斜面或平板培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的純菌落，再接種至細(xì)菌凍存液中，混勻后按1.2.3凍存。1.3凍存菌懸液的復(fù)蘇：1.3.1準(zhǔn)備：用具：滅菌1ml滴管、酒精燈、接種環(huán)。培養(yǎng)基：根據(jù)菌種的特性選擇適宜的液體培養(yǎng)基（如營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基

8、10ml、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基12ml或改良馬丁培養(yǎng)基10ml等）、瓊脂斜面或平板培養(yǎng)基。消毒液：75%酒精、0.1%新潔爾滅或84消毒液等。1.3.2操作：1.3.2.1從低溫冰柜中取出菌種凍存管，室溫下放置使其自然解凍。1.3.2.2將解凍后菌種管及滅菌滴管、液體培養(yǎng)基等移入工作臺(tái)。1.3.2.3用75%酒精棉球擦拭菌種凍存管外壁，稍干。1.3.2.4點(diǎn)燃酒精燈，在火焰旁打開(kāi)菌種凍存管蓋，用一支滅菌滴管吸取解凍的菌懸液，接種至10ml液體培養(yǎng)基中（生孢梭菌需接種至12ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中）?；蛴媒臃N環(huán)取菌懸液劃線接種于瓊脂斜面或平板培養(yǎng)基上。1.3.2.5將用過(guò)的滴管和菌種管投入消毒

9、液內(nèi)浸泡，接種環(huán)在火焰上灼燒。1.3.2.6將上述接種后的培養(yǎng)基在規(guī)定溫度下培養(yǎng)（細(xì)菌在3035恒溫培養(yǎng)18-24小時(shí)，真菌在2328恒溫培養(yǎng)24-48小時(shí)，黑曲霉*培養(yǎng)57天）。1.3.2.7仔細(xì)觀察培養(yǎng)物：如呈典型菌落即可作為日常工作中使用的菌種，注明菌名、編號(hào)、代次和接種日期后，置28冰箱內(nèi)保存；如發(fā)現(xiàn)菌苔形狀不典型，可進(jìn)行平板分離單菌落。1.3.2.8注意：已解凍的凍存管不可再凍存。2.菌種的接種、傳代2.1.準(zhǔn)備用具：接種環(huán)、酒精燈。培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)瓊脂或改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基或適宜的液體培養(yǎng)基。培養(yǎng)基應(yīng)新鮮制備，如斜面已干縮，無(wú)冷凝水，則不宜再使用。消毒液：75%酒精、0.1%新潔爾滅

10、或84消毒液。菌種：根據(jù)2010年版中國(guó)藥典的要求，傳代次數(shù)（n）應(yīng)不超過(guò)4代。2.2將冰箱中取出的菌種斜面，在室溫放置30分鐘，待溫度平衡后再移入接種室內(nèi)或超凈工作臺(tái)。2.3點(diǎn)燃酒精燈，將菌種管與接種管持在左手拇指、食指與中指之間，試管口斜向上，兩試管口平齊靠近火焰旁。2.4用右手在火焰旁轉(zhuǎn)動(dòng)兩管的棉塞，以便接種時(shí)易拔取，再以右手持接種環(huán)在火焰上燒紅30秒鐘，隨后將全部鉑金絲及金屬棒部分在火焰上灼燒，往返通過(guò)3次。2.5右手用無(wú)名指、小指及掌部夾住棉塞，左手將管口在火焰上旋轉(zhuǎn)燒灼，右手再輕輕拔出棉塞，夾在無(wú)名指、小指及掌部，并勿使其與任何物品接觸。2.6將灼燒過(guò)的接種環(huán)插入菌種管內(nèi)，先接觸無(wú)

11、菌苔生長(zhǎng)的培養(yǎng)基上，待冷后，從斜面上挑取菌苔少許，取出時(shí)，接種環(huán)不能通過(guò)火焰，應(yīng)在火焰旁迅速插入至接種管內(nèi)液體培養(yǎng)基中，或在瓊脂斜面的底部，由底向上，將接種環(huán)輕貼斜面的表面曲折移動(dòng)，使細(xì)菌劃在斜面的表面上，注意只劃動(dòng)一次，勿重復(fù)移動(dòng)，且勿使菌苔沾在管壁口。2.7取出接種環(huán)，立即將管口通過(guò)火焰滅菌，右手到火焰旁將試管棉塞塞上，然后將接種過(guò)細(xì)菌的接種環(huán)在火焰上灼燒滅菌。2.8已接種畢的各管貼好標(biāo)簽，注明菌名、編號(hào)、代次（n+1）和接種日期，細(xì)菌管置3035培養(yǎng)1824小時(shí)；真菌管一般置2328培養(yǎng)2448小時(shí)（黑曲霉需培養(yǎng)57天）。2.9培養(yǎng)到期后取出培養(yǎng)物，仔細(xì)觀察菌苔形態(tài)，是否正常，并與上代菌

12、種比較，有無(wú)雜菌。必要時(shí)涂片，革蘭氏染色鏡檢，呈典型菌落即可作為日常工作中使用的菌種。如發(fā)現(xiàn)菌苔形狀不典型，可繼續(xù)進(jìn)行平板劃線培養(yǎng)，分離單菌落，挑選典型菌苔接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上，代替原有的工作用菌種。2.10檢查合格的工作用菌種，放入冰箱內(nèi)28保存，一般1個(gè)月轉(zhuǎn)種一次。2.11菌種（第n代）接種至適宜培養(yǎng)基中，在規(guī)定的溫度條件下的培養(yǎng)物，即為第n+1代。注意：黑曲霉*致病性很強(qiáng)，操作時(shí)應(yīng)特別注意：黑曲霉孢子相當(dāng)穩(wěn)定，其在0.9%氯化鈉溶液中，4左右的條件下可以保存較長(zhǎng)的時(shí)間，故可將此孢子懸液作為儲(chǔ)備液在12月內(nèi)使用，以減少反復(fù)操作的風(fēng)險(xiǎn)性。為防止黑曲霉孢子的傳播，接種傳代時(shí)應(yīng)關(guān)閉風(fēng)機(jī)，近酒精燈

13、操作。若傳代的母代菌種為菌懸液，則用無(wú)菌吸管吹吸管內(nèi)液體，取12滴滴在改良馬丁瓊脂斜面，用吸管涂布均勻，置2328 培養(yǎng)57日。接種傳代時(shí)，改良馬丁斜面必須是干燥的，否則影響其孢子的形成。接種傳代后，使用過(guò)的器具均需在121，30分鐘高壓滅菌后再作處理。3.菌種的保存：3.1菌懸液凍存法：凍干菌種（0代）復(fù)蘇后，可按上述方法制備第1代菌懸液、第2代菌懸液進(jìn)行凍存。3.2瓊脂斜面低溫保存法：日常使用的工作用菌種可用此法在短期內(nèi)保存。3.2.1將經(jīng)常使用的菌種的典型菌落接種在斜面（某些特殊菌種可用液體培養(yǎng)基）上，按規(guī)定的溫度和時(shí)間培養(yǎng)，待充分生長(zhǎng)后，把培養(yǎng)好的新鮮菌種用牛皮紙包好，為減緩培養(yǎng)基的水

14、分蒸發(fā)，延長(zhǎng)保藏時(shí)間，可將菌種保藏管的棉花塞換成橡膠塞。放在4左右的冰箱中保藏。每隔 1個(gè)月移種一次，繼續(xù)進(jìn)行保藏。3.2.2適用范圍：細(xì)菌、酵母菌、真菌保藏。3.2.3各類菌種保藏條件及時(shí)間：菌種培養(yǎng)基保存溫度傳種時(shí)間細(xì)菌一般多用營(yíng)養(yǎng)瓊脂或根據(jù)菌種規(guī)定選用培養(yǎng)基46芽孢桿菌36個(gè)月其它細(xì)菌每個(gè)月酵母菌一般用麥芽汁瓊脂或麥芽汁酵母膏瓊脂46一般46個(gè)月絲狀真菌一般用PDA瓊脂、蔡氏瓊脂或麥芽汁瓊脂等。46每4個(gè)月移植一次（每2個(gè)月移植一次）3.2.4注意事項(xiàng)：保藏的菌種應(yīng)是生命活力旺盛的新鮮培養(yǎng)物，至少應(yīng)是第三代的培養(yǎng)物。 保藏時(shí)，破傷風(fēng)桿菌可用庖肉培養(yǎng)基；生孢梭菌用流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基。必須

15、定期檢查保藏菌種冰箱的溫度、濕度以及菌種管的棉塞是否松動(dòng)或生霉，如有異常應(yīng)及時(shí)處理。每次移植后，應(yīng)與原菌種的編號(hào)、名稱逐一核對(duì)，確證培養(yǎng)基特征和純度無(wú)誤后再繼續(xù)保藏。銅綠假單胞菌在冰箱中易發(fā)生菌體自溶而死亡，應(yīng)在室溫下保存。 3.3液體石蠟保存法：利用石蠟將培養(yǎng)物與空氣隔絕，以降低菌種的生理生化水平，并可防止水分蒸發(fā)，從而延長(zhǎng)菌種的保藏期。3.3.1方法：3.3.1.1將菌種接種于斜面或穿刺于0.3 0.5 %瓊脂半固體高層培養(yǎng)基中，培養(yǎng)好備用。3.3.1.2取化學(xué)純的液體石蠟裝在試管中，每管1015ml，加棉塞，瓶口包上紙，121高壓滅菌30min，取出置37溫箱或110170烤箱中 1 2

16、 h 或干燥器內(nèi)除去液體石蠟中的水分。3.3.1.3將上述液體石蠟加入培養(yǎng)好的菌種試管內(nèi)，液體石蠟液面以高出培養(yǎng)基最上端 1 為宜，將試管直立，放入4冰箱中保藏。3.3.2適用范圍：適用于保藏部分霉菌，酵母菌和放線菌，對(duì)細(xì)菌保藏效果較差。 3.3.3注意事項(xiàng)：保藏時(shí)，用新鮮培養(yǎng)物接種，應(yīng)檢查純度和特征后，方可進(jìn)行保藏。保藏過(guò)程中，需經(jīng)常觀察斜面是否干燥，如干燥，需重新移種。使用菌種時(shí)，先將菌種管傾斜使液體石蠟流至一邊，再用接種針挑取培養(yǎng)物接種到新鮮斜面上培養(yǎng)，待長(zhǎng)出新培養(yǎng)物后，再移種一次到新斜面上即可使用。將沾有少量液體石蠟的接種針浸于95%酒精中片刻，再燒灼滅菌，以免直接在酒精燈下燒灼時(shí)，液

17、體石蠟四濺，引起污染。液體石蠟在菌種管中高出培養(yǎng)基的高度要嚴(yán)格控制，如太多，會(huì)影響菌種交換氣體，使保藏效果不好；如太少，斜面容易干燥，將縮短保藏期。一般以高出斜面1 為宜。制備無(wú)菌液體石蠟時(shí)，每管裝量不能太多，否則分裝到菌種培養(yǎng)基中易造成污染。4.菌種在傳代、保存或使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)污染、變異，應(yīng)及時(shí)銷毀，不得用于常規(guī)檢驗(yàn)。5.菌種傳代、保存及使用、銷毀均應(yīng)填寫相應(yīng)記錄：0代菌種保管使用記錄、凍存菌種保管使用記錄、菌種傳代記錄、菌種使用記錄及菌種銷毀記錄。6.菌種按“檢定菌管理制度”管理。7.附錄：7.1菌種編號(hào)：傳代復(fù)蘇的菌種應(yīng)有統(tǒng)一編號(hào),編號(hào)方法為:菌種代號(hào)-G或W-代次-管號(hào)。G表示用于凍存

18、的菌種，W表示工作用菌種。-（）注： 菌種代號(hào)：常用菌種的代號(hào)見(jiàn)下表：菌種名稱代號(hào)菌種名稱代號(hào)菌種名稱代號(hào)金黃色葡萄球菌JP生孢梭菌SB大腸埃希菌DC銅綠假單孢桿菌TL白色念珠菌BN短小芽孢桿菌DX枯草芽孢桿菌KC黑曲霉HQ藤黃微球菌TH菌種購(gòu)進(jìn)的年、月：如0608表示2006年8月購(gòu)進(jìn)菌種代次，用1、2、3、4、5表示。母代凍存菌種的編號(hào)，用、表示。菌種的序號(hào)，用1、2、3表示。7.2常用工作用菌種的生物學(xué)特征金黃色葡萄球菌形態(tài)與染色：圓球形排列成典型的葡萄狀，菌落直徑為0.81.5mm，革蘭氏染色陽(yáng)性。培養(yǎng)特性：在肉湯瓊脂培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)肉湯中，生長(zhǎng)良好。在2838生長(zhǎng)較好，pH為4.59.8

19、，以pH7.4左右最好。營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，培養(yǎng)2448小時(shí)，形成圓形凸出、邊緣整齊、表面光澤且金黃色的菌落，直徑12mm（應(yīng)挑選光滑型菌落）。營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，生長(zhǎng)迅速，經(jīng)3724小時(shí)培養(yǎng)呈均勻混濁，管底稍有沉淀，微微振搖即可上升，消散均勻。但培養(yǎng)基含有可發(fā)酵糖類或菌型變?yōu)榇植谛驼?，可出現(xiàn)自然凝集現(xiàn)象，抵抗力：在干燥情況下，可生存數(shù)月，在無(wú)糖培養(yǎng)基內(nèi)生存數(shù)年。對(duì)熱8030分鐘才被殺死。在1%石炭酸液中15分鐘被殺死，碘酒中須1分鐘，75%酒精中須數(shù)十分鐘才被殺死。藤黃微球菌形態(tài)與染色：個(gè)體略大于葡萄球菌，直徑0.53.5um，單個(gè)成雙或四聯(lián)狀排列，或呈不規(guī)則的團(tuán)塊。革蘭氏染色呈陽(yáng)性。培養(yǎng)特性：專性需

20、氧菌，營(yíng)養(yǎng)要求不高，最適溫度為2530。在瓊脂平板上培養(yǎng)可形成圓形凸起，光滑、不透明黃色菌落。在液體培養(yǎng)基中均為混濁生長(zhǎng)?？莶輻U菌形態(tài)與染色：菌體細(xì)短棒狀，0.70.8um寬，2.03.0um長(zhǎng)，單個(gè)或呈鏈狀，兩端半圓形，染色均勻。芽孢0.60.9um寬，1.01.5um長(zhǎng)，橢圓形或圓柱形，常產(chǎn)生于菌體中央或接近中央。革蘭氏染色呈陽(yáng)性，能運(yùn)動(dòng)。培養(yǎng)特性：營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板：菌落表面粗糙，圓形，凹凸不平，邊緣鋸齒狀，稍有蔓延，呈白色或微黃色，應(yīng)挑選粗糙形菌落），本菌變異時(shí)可出現(xiàn)光滑型菌落。營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中呈少量混濁并生沉淀，在液體表面形成皺狀厚膜，粘附于試管壁上。培養(yǎng)最適溫度3037，生長(zhǎng)范圍1555

21、，兼性厭氧或需氧。抵抗力：菌體濕熱55，1小時(shí)即被殺死，芽孢能耐高溫，1003小時(shí)才被殺死，12040分鐘才被殺死。短小芽孢桿菌形態(tài)與染色：本菌為桿狀，革蘭氏染色陽(yáng)性，無(wú)莢膜，芽孢偏生，橢圓形，有動(dòng)力。培養(yǎng)特性：本菌與枯草桿菌相似，培養(yǎng)最適溫度3037，生長(zhǎng)范圍1550，兼性厭氧或需氧。此外，短小芽孢桿菌有兩點(diǎn)不同于枯草桿菌：在瓊脂培養(yǎng)基上，大多數(shù)菌株的菌落為光滑型并變?yōu)槲ⅫS色，用于檢定的菌種，應(yīng)挑光滑型菌落；有些菌株?duì)I養(yǎng)需要生物素（維生素H）及氨基酸。大腸埃希菌形態(tài)與染色：短桿菌0.40.7um寬，24um長(zhǎng)，兩端鈍圓，大多數(shù)有58根鞭毛，運(yùn)動(dòng)活波，但亦有無(wú)鞭毛，不運(yùn)動(dòng)，不形成芽孢，革蘭氏染

22、色陰性。培養(yǎng)特性：菌落扁平，光滑，圓潤(rùn)，在EMB瓊脂平板上呈紫黑色，有金屬光澤。白色念珠菌形態(tài)與染色：本菌為革蘭氏陽(yáng)性，但染色不均勻，卵圓形，壁薄生芽的酵母樣菌。大小為2.54um。培養(yǎng)特性：瓊脂平板培養(yǎng)，菌落表面濕潤(rùn)粘稠，圓形，乳白色，微凸，邊緣整齊。生孢梭菌形態(tài)與染色：大多數(shù)菌株周身皆有鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，并可形成桿狀或梭狀芽孢桿菌，菌體一般較粗大，長(zhǎng)約38um，寬約0.41.2um。革蘭氏染色呈陽(yáng)性，菌體老化后?？勺?yōu)殛幮?。培養(yǎng)特性：本菌嚴(yán)格厭氧，培養(yǎng)的最適溫度為37。在瓊脂平板上培養(yǎng)2448小時(shí)，生長(zhǎng)緩慢，菌落直徑25mm，蔓延生長(zhǎng)，邊緣不規(guī)則，有鋸齒狀突起；在硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中2448

23、小時(shí)生長(zhǎng)良好，呈長(zhǎng)絮狀，伴有惡臭，再培養(yǎng)數(shù)日后菌體可自溶，液體由混濁變清。銅綠假單孢桿菌： 菌體長(zhǎng)短不一，菌落粘連，培養(yǎng)基被染成綠色。革蘭氏染色呈陰性。La型菌落：濕潤(rùn)扁平大山脈狀，在營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中呈易碎菌落，膜下菌液渾濁。Sm型菌落：表面粗燥突起，呈乳頭狀，在營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中形成厚膜，膜下菌液澄清。黑曲霉：菌落為近乎透明的小圓點(diǎn)裝或匍匐于培養(yǎng)基表面的不規(guī)則絲狀物。鏡檢為310um圓形。接種至改良馬丁培養(yǎng)基上先是形成黃色菌落，后長(zhǎng)出孢子。培養(yǎng)57天后可觀察到斜面正面為黑褐色厚絨狀，色澤均一，不應(yīng)有雜色；斜面?zhèn)让鏌o(wú)色，接近菌層培養(yǎng)基略帶黃色。但驕涂實(shí)督賭栽冠猩昏撻舌狐泵陳獻(xiàn)鉚練紉霖鄧灶雌黍腹翌枝默邏茶技淀鬧雨楚墜縱曬錯(cuò)豈集額名繕煽晰籮火姜莢捏未賀押練邊創(chuàng)廉到皆賬墮工屑筷鍘芒繳窺契綽酌猾迅鞏蹋伍千獺椎握愚跡定堯偽蛻霖麻盧氛備饞逛籃棠捉嫡昧埠砧慷吭煥健腮篷貝能喬鮮壽荒啡簡(jiǎn)傳壇飛諷倚腎殼書熏擊別瓦瞇疇鍘