(五)、血型、交叉配血

1、正定型正定型 根據(jù)根據(jù)IgM類(lèi)特異性血型抗體與紅細(xì)胞類(lèi)特異性血型抗體與紅細(xì)胞膜上特異性抗原結(jié)合出現(xiàn)凝集反應(yīng)的原理，用膜上特異性抗原結(jié)合出現(xiàn)凝集反應(yīng)的原理，用已知已知IgM類(lèi)特異性標(biāo)準(zhǔn)抗類(lèi)特異性標(biāo)準(zhǔn)抗A、抗、抗B血清室溫下與血清室溫下與被檢紅細(xì)胞在鹽水中反應(yīng)，若出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，被檢紅細(xì)胞在鹽水中反應(yīng)，若出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，表明被檢紅細(xì)胞膜上有血型抗體相對(duì)應(yīng)的抗原，表明被檢紅細(xì)胞膜上有血型抗體相對(duì)應(yīng)的抗原，來(lái)判斷和鑒定被檢者的血型。來(lái)判斷和鑒定被檢者的血型。 反定型反定型 用已知標(biāo)準(zhǔn)用已知標(biāo)準(zhǔn)A，B，O型紅細(xì)胞分別與型紅細(xì)胞分別與被檢血清反應(yīng)，若出現(xiàn)凝集，證明被檢血被檢血清反應(yīng)，若出現(xiàn)凝集，證明被檢血清中

2、存在與該紅細(xì)胞抗原相對(duì)應(yīng)的抗體。清中存在與該紅細(xì)胞抗原相對(duì)應(yīng)的抗體。根據(jù)血清中存在的血型抗體和根據(jù)血清中存在的血型抗體和Landsteiner定律判斷和鑒定被檢者血型。定律判斷和鑒定被檢者血型。 試劑 標(biāo)準(zhǔn)抗A、抗B血型定型試劑 5%（體積比）A，B，型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞生理鹽水懸液。 生理鹽水 器材 試管、試管架、記號(hào)筆、吸管、離心機(jī)、玻片、顯微鏡 標(biāo)本 5%被檢紅細(xì)胞生理鹽水懸液，血清或血漿試管法：試管法： 1：標(biāo)記試管：標(biāo)記試管 取試管兩支，分別標(biāo)記抗取試管兩支，分別標(biāo)記抗A，抗，抗B。 2：加定型試劑：加定型試劑 將抗將抗A、抗、抗B試劑各試劑各1滴分別加入滴分別加入抗抗A，抗，抗B試管中。試

3、管中。 3：加入紅細(xì)胞懸液：加入紅細(xì)胞懸液 各加各加5%被檢者紅細(xì)胞生理鹽被檢者紅細(xì)胞生理鹽水懸液水懸液1滴于試管中，混勻，以滴于試管中，混勻，以1000r/min離心離心1min。 4：觀察結(jié)果觀察結(jié)果 先觀察上層液有無(wú)溶血現(xiàn)象，再斜先觀察上層液有無(wú)溶血現(xiàn)象，再斜持試管輕輕搖動(dòng)或彈動(dòng)，使管底紅細(xì)胞再懸浮，持試管輕輕搖動(dòng)或彈動(dòng)，使管底紅細(xì)胞再懸浮，觀察有無(wú)凝集，如僅輕微凝集或不見(jiàn)凝集，必觀察有無(wú)凝集，如僅輕微凝集或不見(jiàn)凝集，必須將反應(yīng)物倒于玻片上以低倍鏡觀察。須將反應(yīng)物倒于玻片上以低倍鏡觀察。 5：判斷結(jié)果 凝集判斷標(biāo)準(zhǔn)：完全凝集者，上層液無(wú)色清亮，底部有紅細(xì)胞凝塊，呈花邊狀，輕彈試管凝塊不散

4、開(kāi)。完全不凝集的試管，上層液無(wú)色清亮，血細(xì)胞均勻沉積管底，邊緣整齊，重懸細(xì)胞后成均勻的紅色懸液。試管法試管法： 1：標(biāo)記試管：標(biāo)記試管 取試管取試管3支，分別標(biāo)記支，分別標(biāo)記A，B，O。 2：加入樣本血清或血漿：加入樣本血清或血漿 血樣經(jīng)血樣經(jīng)2500r/min離心離心3min分離分離出血漿或血清，在出血漿或血清，在A，B，O試管中分別加試管中分別加1滴血漿或滴血漿或血清，血清， 3：加標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液：加標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液 再分別加入再分別加入5%A型、型、B型、型標(biāo)型、型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞生理鹽水懸液各準(zhǔn)紅細(xì)胞生理鹽水懸液各1滴，混勻，以滴，混勻，以1000r/min離離心心1min。 4：觀察結(jié)果：觀

5、察結(jié)果 先觀察上層液有無(wú)溶血現(xiàn)象，再斜持試管輕先觀察上層液有無(wú)溶血現(xiàn)象，再斜持試管輕輕搖動(dòng)或彈動(dòng)，使管底紅細(xì)胞再懸浮，觀察有無(wú)凝集，輕搖動(dòng)或彈動(dòng)，使管底紅細(xì)胞再懸浮，觀察有無(wú)凝集，如僅輕微凝集或不見(jiàn)凝集，必須將反應(yīng)物倒于玻片上如僅輕微凝集或不見(jiàn)凝集，必須將反應(yīng)物倒于玻片上以低倍鏡觀察。以低倍鏡觀察。 紅細(xì)胞的紅細(xì)胞的ABOABO正反定型結(jié)果判斷正反定型結(jié)果判斷正向定型 反向定型抗A 抗B 抗A,B A細(xì)胞B細(xì)胞O細(xì)胞 - - + - O+ - + - + - A- + + + - - B+ + + - - - AB判斷結(jié)果1.嚴(yán)格標(biāo)記，器材干燥潔凈，防止溶血，避免交叉污染。2.試管法出現(xiàn)溶血現(xiàn)

6、象，表明存在抗原抗體反應(yīng)并有補(bǔ)體激活。3.46個(gè)月以內(nèi)嬰兒反定型可能不凝集或凝集很弱，年老體弱者抗原較弱，最好用試管法鑒定血型。4.亞型紅細(xì)胞抗原較弱，凝集較弱。5.防止冷凝集素的干擾。6.某些疾病可能使紅細(xì)胞定型困難：嚴(yán)重的腸道細(xì)菌感染出現(xiàn)類(lèi)B抗原；血清中存在病理性冷凝集素；部分高球蛋白與異常球蛋白癥患者。 操作步驟操作步驟 1 采血部位成人以左手無(wú)名指內(nèi)側(cè)為宜,6月以下嬰幼兒通常選拇指內(nèi)側(cè)或足跟兩側(cè)采血。 2 輕輕按摩采血部位。 3 用棉簽蘸取消毒液消毒局部皮膚、待干。 4 緊捏刺血部位,使其自然充血。 5 用無(wú)菌刺針穿刺,動(dòng)作應(yīng)迅速,深度23mm,稍加擠壓以血液流出為宜。 6 用干棉球擦

7、去第一滴血。 7 按需要依次采血。 8 采血完畢,用干棉球壓住傷口,止血3min。 1 除特殊情況外，不在耳垂采血。采血應(yīng)避開(kāi)凍瘡、炎癥、損傷、水腫等部位。 2采血后輕輕擠壓血液順暢流出，避免過(guò)度擠壓，混入組織液易致凝固。 3進(jìn)行多項(xiàng)檢驗(yàn)時(shí),采血次序?yàn)檠“逵?jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測(cè)定、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、涂片等。出血時(shí)間、凝血時(shí)間用APTT、PT和PLT計(jì)數(shù)聯(lián)合取代。u分類(lèi)分類(lèi) 1.“主側(cè)主側(cè)”配血配血 2.“次側(cè)次側(cè)”配血配血獻(xiàn)血者獻(xiàn)血者 受血者受血者紅細(xì)胞紅細(xì)胞 紅細(xì)胞紅細(xì)胞血清血清 血清血清供血者紅細(xì)胞與受血者血清反應(yīng)（供血者紅細(xì)胞與受血者血清反應(yīng)（主側(cè)主側(cè)交叉配血）交叉配血） 受血者紅細(xì)胞

8、與供血者血清反應(yīng)（次側(cè)交叉配血）受血者紅細(xì)胞與供血者血清反應(yīng)（次側(cè)交叉配血）其其目的目的是檢查受血者與供血者是否存在血型抗原與抗體不合的情是檢查受血者與供血者是否存在血型抗原與抗體不合的情況。況。 u1.鹽水介質(zhì)法鹽水介質(zhì)法u2.酶介質(zhì)法酶介質(zhì)法 u3.抗人球蛋白介質(zhì)法抗人球蛋白介質(zhì)法u4.凝聚胺法凝聚胺法u5.微柱凝膠免疫技術(shù)微柱凝膠免疫技術(shù) 鹽水介質(zhì)法（鹽水介質(zhì)法（Immediatespin，IS ）是利用天然是利用天然IgM類(lèi)血型抗體與對(duì)應(yīng)紅細(xì)胞類(lèi)血型抗體與對(duì)應(yīng)紅細(xì)胞抗原在室溫下的鹽水介質(zhì)中出現(xiàn)凝集反抗原在室溫下的鹽水介質(zhì)中出現(xiàn)凝集反應(yīng)，通過(guò)離心觀察受血者血清與供血者應(yīng)，通過(guò)離心觀察受血

9、者血清與供血者紅細(xì)胞以及受血者紅細(xì)胞與供血者血清紅細(xì)胞以及受血者紅細(xì)胞與供血者血清之間有無(wú)凝集現(xiàn)象，判斷供血者與受血之間有無(wú)凝集現(xiàn)象，判斷供血者與受血者之間有無(wú)者之間有無(wú)ABO血型不合的情況。血型不合的情況。 酶技術(shù) 利用木瓜酶或菠蘿酶破壞紅細(xì)胞表面唾液酸，使紅細(xì)利用木瓜酶或菠蘿酶破壞紅細(xì)胞表面唾液酸，使紅細(xì)胞失去電荷，縮小細(xì)胞間距離胞失去電荷，縮小細(xì)胞間距離 同時(shí)改變紅細(xì)胞膜表面結(jié)構(gòu)，使某些隱蔽的抗原暴露，同時(shí)改變紅細(xì)胞膜表面結(jié)構(gòu)，使某些隱蔽的抗原暴露，從而增強(qiáng)凝集反應(yīng)從而增強(qiáng)凝集反應(yīng) 主要用于一些不完全抗體的檢測(cè)主要用于一些不完全抗體的檢測(cè)凝聚胺技術(shù) 利用多聚季胺鹽在介質(zhì)溶液中產(chǎn)生大量正電

10、荷中和紅利用多聚季胺鹽在介質(zhì)溶液中產(chǎn)生大量正電荷中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，減少紅細(xì)胞間排斥，形成可逆凝細(xì)胞表面的負(fù)電荷，減少紅細(xì)胞間排斥，形成可逆凝集，加入解聚液僅可使非特異性聚集分散，而發(fā)生抗集，加入解聚液僅可使非特異性聚集分散，而發(fā)生抗原抗體特異性反應(yīng)凝集不會(huì)散開(kāi)。原抗體特異性反應(yīng)凝集不會(huì)散開(kāi)。凝膠卡式檢測(cè)法的工作原理 將將紅細(xì)胞懸液和血清紅細(xì)胞懸液和血清加在凝膠上部反應(yīng)，加在凝膠上部反應(yīng)，離心后觀察離心后觀察 凝集的紅細(xì)胞凝集的紅細(xì)胞，被阻擋在微柱中凝膠的上部或中央，被阻擋在微柱中凝膠的上部或中央，證明發(fā)生凝集反應(yīng)，判斷凝集反應(yīng)陽(yáng)性證明發(fā)生凝集反應(yīng)，判斷凝集反應(yīng)陽(yáng)性 游離的紅細(xì)胞，游離的紅

11、細(xì)胞，擠過(guò)裝有過(guò)濾介質(zhì)的微柱到達(dá)底部，擠過(guò)裝有過(guò)濾介質(zhì)的微柱到達(dá)底部，證明未發(fā)生凝集，判斷凝集反應(yīng)陰性證明未發(fā)生凝集，判斷凝集反應(yīng)陰性 1：試劑 生理鹽水 2：器材 試管，試管架、記號(hào)筆、一次性塑料吸管，玻片、離心機(jī)，顯微鏡， 3：標(biāo)本 患者、獻(xiàn)血員靜脈血1：患者標(biāo)本準(zhǔn)備 分離血清，標(biāo)記為PS（patient serum） 配制5患者紅細(xì)胞生理鹽水懸液，標(biāo)記為PC（patient cell）：獻(xiàn)血員標(biāo)本準(zhǔn)備分離血清，標(biāo)記為DS（donor serum）配制5獻(xiàn)血員紅細(xì)胞生理鹽水懸液，標(biāo)記為DC（donor cell） 1.取兩支試管，分別標(biāo)明主，次，即主側(cè)配血管和次側(cè)配血管。 2.在主側(cè)配血管中加PS 1滴，滴， 3.在次側(cè)配血管中加DS 1滴，滴， 4.混勻，1000r/min離心1min。 5.觀察結(jié)果 先觀察試管上層液有無(wú)溶血，再斜持試管輕輕搖動(dòng)，觀察管底反應(yīng)物有無(wú)凝集，重懸液在低倍鏡下觀察有無(wú)紅細(xì)胞凝集。凝集結(jié)果判斷：判斷標(biāo)準(zhǔn)同