PCR技術(shù)(碩士生課程)

1、PCR技術(shù)簡(jiǎn)介 分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，為為PCR技術(shù)的發(fā)現(xiàn)提供了堅(jiān)實(shí)的技術(shù)的發(fā)現(xiàn)提供了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，同時(shí)也為這一技術(shù)的發(fā)展基礎(chǔ)，同時(shí)也為這一技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用提供了寬廣的舞臺(tái)。和應(yīng)用提供了寬廣的舞臺(tái)。PCR技術(shù)的發(fā)明v1985年vMullis v青年v遺傳學(xué)領(lǐng)域v1995年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)v靈感PCR技術(shù)的發(fā)明v1971年Korana最早提出核酸體外擴(kuò)增的設(shè)想：“經(jīng)過(guò)DNA變性、與合適的引物雜交、用DNA聚合酶延伸引物，并不斷重復(fù)該過(guò)程便可克隆tRNA基因”。 PCR原理示意圖原理示意圖PCR的擴(kuò)增效率：的擴(kuò)增效率：循環(huán)數(shù)循環(huán)數(shù). 擴(kuò)增子數(shù)擴(kuò)增子數(shù) (靶序列拷貝數(shù)靶序列拷

2、貝數(shù))1 22 43 84 165 326 6420 1,048,57630 1,073,741,824(10億億)3、PCR條件的優(yōu)化條件的優(yōu)化 模板模板 引物引物(0.2-1umol/L) 緩沖液緩沖液(Tris-HCl 10mmol/L KCl 50mmol/L pH 8.3-9.3) 鎂離子鎂離子(0.5-5.0 mmol/L) dNTP 耐熱耐熱DNA聚合酶聚合酶 溫度循環(huán)參數(shù)溫度循環(huán)參數(shù) PCR的改進(jìn)與完善vMullis最初使用DNA聚合酶I的Klenow片段v不耐高溫v37C下反應(yīng)PCR技術(shù)的改進(jìn)與完善v1984年Keohanog改用T4DNA聚合酶v1988年Saiki等從溫泉

3、中分離的一株嗜熱桿菌（thermus aquaticus)中提取到一種耐熱DNA聚合酶Taq DNA聚合酶v耐熱性v忠實(shí)性v擴(kuò)增長(zhǎng)度v平臺(tái)期PCR技術(shù)的發(fā)展v高保真PCRv長(zhǎng)片段PCRvRTPCRv定量PCRv原位PCRvssPCRv反向PCRPCR技術(shù)的發(fā)展v武斷引物PCRv多重PCRv標(biāo)記PCRv重組PCRv免疫PCRvPCRELISAvddPCRPCR 技術(shù)的應(yīng)用分子生物學(xué)v克隆v重組v突變體構(gòu)建v突變分析vSNPv序列分析PCR 技術(shù)的應(yīng)用醫(yī)學(xué)研究v基因表達(dá)水平與疾病的相關(guān)性v基因變異與疾病的相關(guān)性v基因與表型的關(guān)聯(lián)v基因之間的相互關(guān)系v尋找未知基因v研究基因功能PCR技術(shù)的應(yīng)用臨床醫(yī)學(xué)v遺傳學(xué)（各種遺傳病）v腫瘤學(xué)（K-ras、p53、微衛(wèi)星、端粒酶、p16、BCR/ABL等）v傳染病學(xué)（病毒、細(xì)菌、寄生蟲等）v其他法醫(yī)學(xué)v親子鑒定v刑事偵破v物證v身份確認(rèn)PCR技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)v簡(jiǎn)便v快速v封閉v集成（高通量）v定量v廣泛v預(yù)測(cè)疾病（上工治未?。﹙指導(dǎo)治療（個(gè)體化治療）熒