芝堤山野生紫芝的分離純化及馴化栽培

1、項目編號 寧德師范學院服務海西建設項目 申 請 書項 目 類 型：一般項目項 目 名 稱：閩東野生紫芝的分離純化及馴化栽培項目負責人：陳錫雄所在單位：生物工程系聯系電話子郵箱：chenxixiong申請日期：2010.9.5寧德師范學院二一年九月填 表 說 明一、申請書各項內容要求實事求是，逐條認真填寫，表達要明確、嚴謹，外來語同時用原文和中文表達。二、申請書一式二份，采用A4幅面，于左側裝訂成冊。各欄空格不夠時，請自行加頁。封面上“項目編號”申請者不必填寫。三、簡表的內容應嚴格按規(guī)定填寫。凡選擇性欄目，請在提示符A、B、C上打“Ö”，其余欄目說明如下：項目

2、名稱要確切反映項目內容，字數最多不超過25個漢字（包括標點符號）。所屬學科根據申請項目所屬學科，嚴格按國家標準學科分類與代碼（GB/T13745-92）填寫。起止年月申請資助年限一般在五年以內。所在單位名稱須按單位公章填寫全稱。項 目 名 稱閩東野生紫芝的分離純化及馴化栽培項目類別所屬行業(yè)1農業(yè) 2. 食藥用菌項目類型A.基礎研究；B.應用基礎研究；C.應用研究（含社科、自然）；D.試驗發(fā)展；E.新產品；F.推廣開發(fā)；G.其它所屬學科1生物學 2.生物技術起止年限2010.9-2013.9申請金額3萬元項目負責人姓 名陳錫雄性別男出生年月1963.3職 稱副教授學歷本科學位/授予國別學士/中國

3、所在單位（院、系、所）寧德師范學院生物工程系主 要 合 作 單 位項目組人 員總數高級職稱中級職稱初級職稱輔助人員5311一、本項目已具備的條件靈芝是一種藥用菌，靈芝多糖具有扶正固本、滋補強壯、延年益壽的主要功能，前期研究已分離得到多株閩東紫芝，提取基因組DNA，并對提取方法進行了適當的改進，得到電泳譜帶清晰、整齊，可用于PCR擴增和指紋分析的基因組DNA模版。為進一步開展研究工作提供初步的基礎。 實驗室現有與本項目研究有關的主要儀器設備有：各型號多種高壓鍋、超凈工作臺、菌種室、栽培室、高速冷凍離心機、超低溫冰箱、超純水系統、PCR儀、電泳系統、凝膠成像系統、制冰機、紫外分光光度計等，為開展實

4、驗工作提供了很好的基礎。二、本項目對促進海峽西岸經濟區(qū)建設及推動科技進步、產業(yè)結構調整和社會發(fā)展的重要意義我國是靈芝的王國，世界上靈芝科的種類主要分布在亞洲、澳洲、非洲及美洲的熱帶及亞熱帶，少數分布于溫帶。我國地跨熱帶至寒溫帶，靈芝科種類多而分布廣?，F代醫(yī)學已證實靈芝具有特殊的療效。隨著野生靈芝資源的過度開采，野生靈芝越來越少見，資源趨于枯竭。從野生種類中馴化優(yōu)良生產菌種，或具有藥效高的品種則潛力很大。 （一）符合海西產業(yè)政策與布局，有利于推動農村科技進步本項目屬于生物技術產業(yè)領域，生物技術是海西經濟區(qū)建設的重點產業(yè)之一，其最大特點是可再生、無污染、良性循環(huán)、永續(xù)利用。利用生物技術在農村發(fā)展現

5、代農林業(yè)，開發(fā)兼具生態(tài)功能的新型菌類產業(yè)，利用農業(yè)生產中產生的廢棄物作為栽培基質，獲得良好的經濟效益、社會效益及生態(tài)效益，對推動農村科技進步具有積極的意義。 （二）增加農民收入，促進地方經濟發(fā)展在古代，我國勞動人民盛贊稱靈芝為仙草，在神農本草經、名醫(yī)別錄及本草綱目等多種典籍中都把靈芝列為上品，謂紫芝“主耳聾，利關節(jié)，保神益精，堅筋骨，好顏色，久服輕身不老延年。”謂赤芝“主胸中結，益心氣，補中增智慧不忘，久食輕身不老，延年成仙?！倍F代醫(yī)學也證明了靈芝的特有功效。目前，我國近年來開始大面積進行人工栽培生產，并逐漸向靈芝深加工產業(yè)發(fā)展，產值可達數億元人民幣，極具商品開發(fā)價值。因此，開展靈芝良種選育

6、、高產栽培研究，發(fā)展靈芝栽培業(yè)有利于農民增產增收，促進地方社會經濟的發(fā)展。（三）有利于落實“三農”政策，促進新農村建設“發(fā)展農業(yè)、建設農村、造福農民”的“三農”政策越來越受到各級政府的重視。立足古田縣，輻射周邊縣市，發(fā)展靈芝產業(yè)，可大幅提升林地的經營效益，直接增加農民的就業(yè)，緩解環(huán)境保護和農民收入之間的矛盾，對項目區(qū)社會主義新農村建設將產生積極影響。（四）促進食藥用菌產業(yè)結構調整項目的立項實施將為實現“高起點、規(guī)?；⒘挤N化、標準化”建設靈芝人工栽培示范基地、推動新型食藥用菌產業(yè)發(fā)展提供有力的支持。該項研究成果為靈芝優(yōu)良品種的鑒定和引種提供技術參考，為這種新型經濟植物種質資源的合理利用和馴化栽

7、培提供理論依據，避免盲目引種及長期栽培導致的種質退化造成的資源浪費和經濟損失。并可延長產業(yè)鏈，促進食藥用菌產業(yè)的種類、結構、經營方式的調整和優(yōu)化，促進經濟增長方式的轉變，促進農村經濟的可持續(xù)發(fā)展，對項目區(qū)全面建設小康社會產生推動作用和影響。三、項目內容本項目構建研究開發(fā)平臺與科技推廣服務體系，開展靈芝良種選育和人工高效栽培關鍵技術研究與應用。（一） 樣品采集及分離純化 1.選擇春末或夏初季節(jié)，從支堤山系不同的區(qū)位采集靈芝品種，進行初步的分級處理并登記造冊。 2. 然后按常規(guī)方法對所采集的樣品進行分離純化，將得到若干個靈芝品種，進行適當擴培并得到足夠量的靈芝試管菌種以供后續(xù)實驗使用。（二）利用A

8、FLP分子標記技術對靈芝樣本進行種質鑒定1. 高質量基因組DNA的提取 對CTAB分離靈芝基因組總DNA的方法進行了適當的改進，得到電泳譜帶清晰、整齊，可用于酶切、PCR擴增和進行指紋圖譜分析的基因組DNA模版。2. 引物設計和合成從已發(fā)表的文獻中查詢并合成AFLP預擴增引物和選擇性擴增引物。3. 酶切、連接及PCR反應體系的優(yōu)化為了摸索適宜于靈芝的AFLP反應體系，本實驗擬通過以瓊脂糖凝膠為檢測體系，對影響酶切、連接及PCR擴增的Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物濃度以及退火溫度等反應條件進行優(yōu)化選擇。4. 引物篩選根據設計好的引物對小量樣本進行預試驗，檢驗引物的有效性，選取擴

9、增條帶清晰、重現性高且多態(tài)性良好的多個引物組合。5. 品系鑒定利用篩選出的特異AFLP引物和反應條件，對供試樣本進行試驗，并對特異譜帶和帶組合進行分析，構建各樣本的DNA指紋圖譜，鑒定靈芝各樣本，合并來源不同，但遺傳組成上相同的各重復樣本，以減小后續(xù)工作量。6. 數據分析電泳條帶按1/0進行數據轉換，清晰和再現性強的潛帶記為1，無擴增譜帶記為0，生成0和l組成的原始矩陣。以此為據，獲得各樣本的DNA指紋圖譜。（三） 進行馴化栽培實驗1.選擇生長狀態(tài)良好的菌株35個進行菌種的擴培，采用二級擴培方法，得到足夠量的栽培用菌種。2.擬定栽培路線，確定栽培方法，將不同菌株進行栽培對照，篩選出優(yōu)良高產菌株

10、。四、工作進度安排（一） 第一階段 樣品的采集、分離、純化及擴培 1. 2010.102011.3完成相關資料的收集，擬定野外靈芝采集的路線圖及確定野外采集樣品的區(qū)域，并做好靈芝分離純化前的準備工作。2.2011.32011.6按既定路線圖進行野外野生靈芝的采集，對樣品進行初步分級處理并做好妥善處理。3.2011.32011.9完成實驗室靈芝樣品的分離、純化工作，并對各品系進行適當的擴大培養(yǎng)，以獲得的一定量的試管原種。供后續(xù)實驗使用。（二） 第二階段 利用AFLP分子標記技術對靈芝樣本進行種質鑒定1.2011.32011.6 AFLP反應體系的優(yōu)化和引物篩選2.2011.62011.11構建各

11、樣本的DNA指紋圖譜3.2011.112012.5確定試栽菌種并按常規(guī)方法進行供試菌株的一、二級菌種的生產，以供后續(xù)栽培實驗。（三） 第三階段 馴化栽培實驗1. 2012.52012.9進行靈芝不同品種的定性栽培實驗，并由此確定幾個當家品種。2. 2012.92013.3確定之當家品種進行一、二級菌種的生產。3.2013.32013.9對供試品種的靈芝進行定量栽培實驗，根據數理統計分析可得出 我們所需的靈芝品種。五、經費預算（單位：萬元）注：按項目類型，另附經費預算表總 投 資3萬元其 他經費來源合 計其 中其他部門撥款單位配套貸 款其 他00000六、項目組成員表（含主要合作單位參加人員）姓

12、 名出生年月性別職稱職務從事專業(yè)在項目中分工項目負責人所在單位簽 章陳錫雄1963.3男副教授教師教學項目支持人生物工程系丁建發(fā)1967.2男副教授教師教學資料收集整理及數據處理生物工程系張維瑞1966.3男教授級高級農藝師教師食用菌菌種分離、篩選及菌種生產生物工程系薛駿軼1984.9男助理實驗師實驗員教學靈芝種質資源分子鑒定生物工程系阮俊峰1983.11男助理實驗師實驗員教學靈芝的栽培生產生物工程系七、合作單位意見（對合作研究內容、參加人員素質與水平及提供的研究工作條件等簽署具體意見） 單位（公章） 年 月 日八、院（系）審查意見課題組長期從事食用菌教學和科研，具有扎實的研究基礎和前期研究工

13、作，能完成該項目的研究工作。該項目建設有利于推動地方食用菌產業(yè)發(fā)展，提高農民收入，具有一定的社會效益和經濟效益。同意該課題申報！ 學校（公章） 2010年 10 月 8 日 九、學校審查意見 年 月 日附：經費預算表 單位：（萬元）總投資3.0申請資助合計其中2010年2011年2012年2013年2014年3.00.80.81.4-其他經費來源合計其中其他部門撥款單位配套貸 款其 他預算支出科目總投資預算數其中：申請資助總投資預算數計算依據1、項目直接費3.03.0（1）人員費（2）設備費其中：購置試制（3）修繕費0.10.1儀器維護（4）能源材料費1.51.5引物合成+TaqDNA聚合酶+內切酶+分離純化試劑+電泳、染色試劑+其他藥品培養(yǎng)基耗材（5）試驗外協費（6）會議費0.40.4參加學術會議2×0.2（7）差旅費0.50.5樣品采集3×.05×3（8）出版物、文獻、信息傳