生物藥物分析與檢測(cè)抗生素藥物分析

1、生物藥物分析與檢測(cè)抗生素藥物分析 （一）鑒別試驗(yàn)（一）鑒別試驗(yàn) 1官能團(tuán)的顯色反應(yīng)官能團(tuán)的顯色反應(yīng) 如如內(nèi)酰胺類的羥肟酸鐵反應(yīng)、內(nèi)酰胺類的羥肟酸鐵反應(yīng)、氨基糖苷類的麥芽酚反應(yīng)等。氨基糖苷類的麥芽酚反應(yīng)等。 2光譜法光譜法 包括紫外吸收光譜和紅外吸收光譜。包括紫外吸收光譜和紅外吸收光譜。 3色譜法色譜法 包括高效液相色譜和薄層色譜。包括高效液相色譜和薄層色譜。 4生物學(xué)法生物學(xué)法 檢查抗生素的抗菌能力。檢查抗生素的抗菌能力。 第一節(jié)第一節(jié) 概概 述述 二、抗生素藥物的質(zhì)量分析二、抗生素藥物的質(zhì)量分析 （二）檢查（二）檢查 1影響產(chǎn)品穩(wěn)定性的指標(biāo)影響產(chǎn)品穩(wěn)定性的指標(biāo) 包括晶型、水分、包括晶型、水分

2、、pH等。等。 2控制有機(jī)和無(wú)機(jī)雜質(zhì)的指標(biāo)控制有機(jī)和無(wú)機(jī)雜質(zhì)的指標(biāo) 包括澄清度與顏色、有包括澄清度與顏色、有關(guān)物質(zhì)、殘留溶劑、熾灼殘?jiān)?、重金屬等。關(guān)物質(zhì)、殘留溶劑、熾灼殘?jiān)?、重金屬等?3與臨床安全性密切相關(guān)的指標(biāo)與臨床安全性密切相關(guān)的指標(biāo) 包括異常毒性、熱原、包括異常毒性、熱原、細(xì)菌或內(nèi)毒素、降壓物質(zhì)、無(wú)菌等。細(xì)菌或內(nèi)毒素、降壓物質(zhì)、無(wú)菌等。 4其他指標(biāo)其他指標(biāo) 對(duì)多組分抗生素進(jìn)行組分分析等。對(duì)多組分抗生素進(jìn)行組分分析等。 第一節(jié)第一節(jié) 概概 述述 二、抗生素藥物的質(zhì)量分析二、抗生素藥物的質(zhì)量分析 （三）含量測(cè)定或效價(jià)測(cè)定（三）含量測(cè)定或效價(jià)測(cè)定 1微生物檢定法：以抗生素對(duì)微生物的殺傷或抑制

3、程微生物檢定法：以抗生素對(duì)微生物的殺傷或抑制程度為指標(biāo)來(lái)衡量抗生素效價(jià)的一種方法。具有測(cè)定結(jié)果與度為指標(biāo)來(lái)衡量抗生素效價(jià)的一種方法。具有測(cè)定結(jié)果與臨床效果一致、靈敏度高、干擾物質(zhì)少等特點(diǎn)。但也存在臨床效果一致、靈敏度高、干擾物質(zhì)少等特點(diǎn)。但也存在操作繁瑣、培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)、測(cè)定誤差大等缺點(diǎn)。操作繁瑣、培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)、測(cè)定誤差大等缺點(diǎn)。 2理化方法：根據(jù)抗生素的分子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，利用其特有理化方法：根據(jù)抗生素的分子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，利用其特有的化學(xué)或物理化學(xué)及反應(yīng)而進(jìn)行的。理化方法優(yōu)點(diǎn)是準(zhǔn)確的化學(xué)或物理化學(xué)及反應(yīng)而進(jìn)行的。理化方法優(yōu)點(diǎn)是準(zhǔn)確度高、操作簡(jiǎn)便、快速，但其含量不一定代表生物效價(jià)，度高、操作簡(jiǎn)便、快速，但其含

4、量不一定代表生物效價(jià)，測(cè)定方法易受雜質(zhì)干擾等問(wèn)題。測(cè)定方法易受雜質(zhì)干擾等問(wèn)題。第一節(jié)第一節(jié) 概概 述述 二、抗生素藥物的質(zhì)量分析二、抗生素藥物的質(zhì)量分析 1-內(nèi)酰胺類：主要包括青霉素類和頭孢菌素類等。內(nèi)酰胺類：主要包括青霉素類和頭孢菌素類等。 2氨基糖苷類：包括鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素、妥氨基糖苷類：包括鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素、妥布霉素、丁胺卡那霉素、新霉素、核糖霉素等。布霉素、丁胺卡那霉素、新霉素、核糖霉素等。 3四環(huán)素類：包括四環(huán)素、土霉素、金霉素等。四環(huán)素類：包括四環(huán)素、土霉素、金霉素等。 4氯霉素類：包括氯霉素、甲砜霉素等。氯霉素類：包括氯霉素、甲砜霉素等。 5大環(huán)內(nèi)脂類：臨床常

5、用的有紅霉素、白霉素、無(wú)味紅大環(huán)內(nèi)脂類：臨床常用的有紅霉素、白霉素、無(wú)味紅霉素、乙酰螺旋霉素、麥迪霉素、交沙霉素等。霉素、乙酰螺旋霉素、麥迪霉素、交沙霉素等。 6其它：如作用于其它：如作用于G+細(xì)菌的其它抗生素：如林可霉素、細(xì)菌的其它抗生素：如林可霉素、氯林可霉素、萬(wàn)古霉素、桿菌肽等；氯林可霉素、萬(wàn)古霉素、桿菌肽等； 第一節(jié)第一節(jié) 概概 述述 三、抗生素的分類三、抗生素的分類 （一）化學(xué)結(jié)構(gòu)（一）化學(xué)結(jié)構(gòu) 青霉素類的分子結(jié)構(gòu)是由母核青霉素類的分子結(jié)構(gòu)是由母核6-氨基青霉烷酸（氨基青霉烷酸（6-APA）和側(cè)鏈和側(cè)鏈RCO-兩部分結(jié)合而成。孢菌素類的分子結(jié)構(gòu)是由母兩部分結(jié)合而成。孢菌素類的分子結(jié)構(gòu)

6、是由母核核6-氨基頭孢烷酸（氨基頭孢烷酸（7-ACA）和側(cè)鏈）和側(cè)鏈RCO-兩部分結(jié)合而成。兩部分結(jié)合而成。 第二節(jié)第二節(jié) -內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生素 一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì) （二）性質(zhì)（二）性質(zhì) 1酸性酸性 青霉素類和頭孢菌素類結(jié)構(gòu)中有游離的羧基，具有較青霉素類和頭孢菌素類結(jié)構(gòu)中有游離的羧基，具有較強(qiáng)的酸性，強(qiáng)的酸性，pKa值在之間，能與無(wú)機(jī)堿或某些有機(jī)堿成鹽，值在之間，能與無(wú)機(jī)堿或某些有機(jī)堿成鹽，如青霉素如青霉素G鈉、青霉素鈉、青霉素G鉀等。鉀等。 2旋光性旋光性 青霉素類（青霉素類（3個(gè)手性碳原子）和頭孢菌素類結(jié)構(gòu)中都有個(gè)手性碳原子）和頭孢菌素類結(jié)構(gòu)中都有手性碳原子（手

7、性碳原子（2個(gè)），都具有旋光性。個(gè)），都具有旋光性。 第二節(jié)第二節(jié) -內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生素 一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì) （二）性質(zhì)（二）性質(zhì) 3紫外吸收紫外吸收 青霉素類母核沒(méi)有共軛系統(tǒng)，沒(méi)有紫外吸收，但青霉青霉素類母核沒(méi)有共軛系統(tǒng)，沒(méi)有紫外吸收，但青霉素類藥物在弱酸性下水解，可以產(chǎn)生具有共軛雙鍵的青霉素類藥物在弱酸性下水解，可以產(chǎn)生具有共軛雙鍵的青霉烯酸，在紫外光區(qū)有吸收。側(cè)鏈中有苯環(huán)等取代基的藥物，烯酸，在紫外光區(qū)有吸收。側(cè)鏈中有苯環(huán)等取代基的藥物，在紫外光區(qū)也有吸收。像芐青霉素。頭孢菌素類分子中有在紫外光區(qū)也有吸收。像芐青霉素。頭孢菌素類分子中有共軛體系（共軛體系（OC

8、NCC）在波長(zhǎng)）在波長(zhǎng)260nm處有最大吸收。處有最大吸收。 第二節(jié)第二節(jié) -內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生素 一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì) （二）性質(zhì)（二）性質(zhì) 4. -內(nèi)酰胺環(huán)的不穩(wěn)定性內(nèi)酰胺環(huán)的不穩(wěn)定性 干燥、純凈青霉素類抗生素穩(wěn)定，其水溶液很不穩(wěn)定干燥、純凈青霉素類抗生素穩(wěn)定，其水溶液很不穩(wěn)定不穩(wěn)定的部分是不穩(wěn)定的部分是 -內(nèi)酰胺環(huán)。內(nèi)酰胺環(huán)。 -內(nèi)酰胺環(huán)在酸、堿、青霉內(nèi)酰胺環(huán)在酸、堿、青霉素酶、某些金屬離子的作用下，可使素酶、某些金屬離子的作用下，可使 -內(nèi)酰胺環(huán)開環(huán)或發(fā)內(nèi)酰胺環(huán)開環(huán)或發(fā)生分子重排，而失去抗菌作用，形成一系列降解產(chǎn)物。生分子重排，而失去抗菌作用，形成一系列降解產(chǎn)物

9、。 第二節(jié)第二節(jié) -內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生素 一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì) （一）呈色反應(yīng)（一）呈色反應(yīng) 1羥肟酸鐵反應(yīng)羥肟酸鐵反應(yīng) 青霉素和頭孢菌素在堿性條件下與鹽酸羥胺作用，青霉素和頭孢菌素在堿性條件下與鹽酸羥胺作用， -內(nèi)內(nèi)酰胺環(huán)破裂生成羥肟酸，在稀酸中與高鐵離子顯色。酰胺環(huán)破裂生成羥肟酸，在稀酸中與高鐵離子顯色。 2類似肽鍵的反應(yīng)類似肽鍵的反應(yīng) 青霉素和頭孢菌素均具有青霉素和頭孢菌素均具有-CONH-結(jié)構(gòu)，一些取代基有結(jié)構(gòu)，一些取代基有-氨基結(jié)構(gòu)，可顯茚三酮反應(yīng)和雙縮脲反應(yīng)。氨基結(jié)構(gòu)，可顯茚三酮反應(yīng)和雙縮脲反應(yīng)。 第二節(jié)第二節(jié) -內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生素 二、鑒別試驗(yàn)二

10、、鑒別試驗(yàn) （一）呈色反應(yīng)（一）呈色反應(yīng) 3其它呈色反應(yīng)其它呈色反應(yīng) （1）與重氮苯磺酸反應(yīng)）與重氮苯磺酸反應(yīng) 頭孢哌酮結(jié)構(gòu)中含有酚羥基，可與重氮苯磺酸發(fā)生偶頭孢哌酮結(jié)構(gòu)中含有酚羥基，可與重氮苯磺酸發(fā)生偶合反應(yīng)而顯色。合反應(yīng)而顯色。 （2）與變色酸）與變色酸-硫酸反應(yīng)硫酸反應(yīng) 青霉素類藥物中，如阿莫西林、氨芐西林等結(jié)構(gòu)中有青霉素類藥物中，如阿莫西林、氨芐西林等結(jié)構(gòu)中有活潑活潑“-CH2-”經(jīng)硫酸加熱分解生成的甲醛與變色酸反應(yīng)而經(jīng)硫酸加熱分解生成的甲醛與變色酸反應(yīng)而呈色。呈色。 第二節(jié)第二節(jié) -內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生素 二、鑒別試驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn) （二）各種鹽的反應(yīng)（二）各種鹽的反應(yīng) K+、N

11、a+的火焰反應(yīng)的火焰反應(yīng) 青霉素和頭孢菌素類藥物多制成青霉素和頭孢菌素類藥物多制成鈉鹽或鉀鹽使用，可利用火焰反應(yīng)進(jìn)行鑒別。鈉鹽或鉀鹽使用，可利用火焰反應(yīng)進(jìn)行鑒別。 （三）光譜法（三）光譜法 1紅外光譜法紅外光譜法 內(nèi)酰胺環(huán)上的羰基伸縮振動(dòng)增強(qiáng)而向高波數(shù)方向位內(nèi)酰胺環(huán)上的羰基伸縮振動(dòng)增強(qiáng)而向高波數(shù)方向位移，仲酰胺的氨基、羰基伸縮振動(dòng)，羧基離子伸縮振動(dòng)是移，仲酰胺的氨基、羰基伸縮振動(dòng)，羧基離子伸縮振動(dòng)是本類藥物的特征峰。本類藥物的特征峰。 2紫外光譜法紫外光譜法 通常利用最大吸收波長(zhǎng)進(jìn)行鑒別。通常利用最大吸收波長(zhǎng)進(jìn)行鑒別。 第二節(jié)第二節(jié) -內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生素 二、鑒別試驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn) （

12、一）聚合物（一）聚合物 聚合物的定量方法：一般用于聚合物的定量方法：一般用于SephadexG-10凝膠色譜系凝膠色譜系統(tǒng)中統(tǒng)中-內(nèi)酰胺抗生素中高分子雜質(zhì)的檢查。在該分離系統(tǒng)內(nèi)酰胺抗生素中高分子雜質(zhì)的檢查。在該分離系統(tǒng)中，除部分寡聚物外，中，除部分寡聚物外，-內(nèi)酰胺抗生素中高分子雜質(zhì)在色內(nèi)酰胺抗生素中高分子雜質(zhì)在色譜過(guò)程中均不保留，即所有的高分子雜質(zhì)表現(xiàn)為單一的色譜過(guò)程中均不保留，即所有的高分子雜質(zhì)表現(xiàn)為單一的色譜峰，以藥物自身為對(duì)照品，按外標(biāo)法計(jì)算藥品中高分子譜峰，以藥物自身為對(duì)照品，按外標(biāo)法計(jì)算藥品中高分子雜質(zhì)的相對(duì)百分含量。雜質(zhì)的相對(duì)百分含量。 第二節(jié)第二節(jié) -內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生

13、素 三、特殊雜質(zhì)的檢查三、特殊雜質(zhì)的檢查 垂直向下的移動(dòng)和無(wú)定向的擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)。大分子物質(zhì)由于直徑較大，不易進(jìn)入凝膠顆粒的微孔，而只能分布顆粒之間，所以在洗脫時(shí)向下移動(dòng)的速度較快。小分子物質(zhì)除了可在凝膠顆粒間隙中擴(kuò)散外，還可以進(jìn)入凝膠顆粒的微孔中，即進(jìn)入凝膠相內(nèi)，在向下移動(dòng)的過(guò)程中，從一個(gè)凝膠內(nèi)擴(kuò)散到顆粒間隙后再進(jìn)入另一凝膠顆粒，如此不斷地進(jìn)入和擴(kuò)散，小分子物質(zhì)的下移速度落后于大分子物質(zhì)，從而使樣品中分子大的先流出色譜柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出，這種現(xiàn)象叫分子篩效應(yīng)。 （二）有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體（二）有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體 通常采用色譜法（通常采用色譜法（HPLC法等）檢查法等）檢查-內(nèi)酰胺類

14、抗生素內(nèi)酰胺類抗生素中的有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體。中的有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體。 （三）雜質(zhì)吸光度（三）雜質(zhì)吸光度 藥典常采用測(cè)定雜質(zhì)吸光度的方法來(lái)控制本類抗生素藥典常采用測(cè)定雜質(zhì)吸光度的方法來(lái)控制本類抗生素的雜質(zhì)含量。的雜質(zhì)含量。 例如：將青霉素鈉（鉀）配成例如：將青霉素鈉（鉀）配成1.80mgml-1的溶液，在的溶液，在波長(zhǎng)波長(zhǎng)280nm處的（控制雜質(zhì)量）；在波長(zhǎng)處的（控制雜質(zhì)量）；在波長(zhǎng)264nm處的處的A為為（檢查藥物量）。（檢查藥物量）。 第二節(jié)第二節(jié) -內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生素 三、特殊雜質(zhì)的檢查三、特殊雜質(zhì)的檢查 HPLC法具有快速、高效、靈敏、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性法具有快速、高效、靈敏、專屬性

15、強(qiáng)、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，在本類藥的含量中應(yīng)用越來(lái)廣泛。好等特點(diǎn)，在本類藥的含量中應(yīng)用越來(lái)廣泛。 多數(shù)采用反向多數(shù)采用反向HPLC測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算含量。測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算含量。 如氨芐西林原料藥含量測(cè)定：取本品約如氨芐西林原料藥含量測(cè)定：取本品約25mg，精密稱，精密稱定，置定，置25ml容量瓶中，加稀釋液適量，超聲處理使溶解后，容量瓶中，加稀釋液適量，超聲處理使溶解后，再用上述稀釋液稀釋至刻度，搖勻，取再用上述稀釋液稀釋至刻度，搖勻，取20l注入液相色譜注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取氨芐西林對(duì)照品儀，記錄色譜圖；另取氨芐西林對(duì)照品25mg，同法測(cè)定。，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中氨芐

16、西林（按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中氨芐西林（C16H19N3O4S）的含量。的含量。 第二節(jié)第二節(jié) -內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生素 四、含量測(cè)定四、含量測(cè)定 （一）化學(xué)結(jié)構(gòu)（一）化學(xué)結(jié)構(gòu) 鏈霉素的結(jié)構(gòu)是由鏈霉胍和鏈霉糖、鏈霉素的結(jié)構(gòu)是由鏈霉胍和鏈霉糖、 N-甲基甲基-L-葡萄糖葡萄糖胺結(jié)合而成的堿性苷。胺結(jié)合而成的堿性苷。第三節(jié)第三節(jié) 氨基糖苷類抗生素氨基糖苷類抗生素 一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì) （一）化學(xué)結(jié)構(gòu)（一）化學(xué)結(jié)構(gòu) 慶大霉素是由紫素胺和脫氧鏈霉胺、慶大霉素是由紫素胺和脫氧鏈霉胺、N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲基戊糖胺結(jié)合而成的苷。它是由三個(gè)類似結(jié)構(gòu)的甲基戊糖胺結(jié)合而成的

17、苷。它是由三個(gè)類似結(jié)構(gòu)的C1、C2、C1a組成的混合物組成的混合物。第三節(jié)第三節(jié) 氨基糖苷類抗生素氨基糖苷類抗生素 一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì) C1：R1=R2=CH3 ; C2：R1=CH3, R2=H ; C1a：R1=R2=H, R3=H （二）性質(zhì)（二）性質(zhì) 1堿性與溶解性：由于結(jié)構(gòu)中含有多個(gè)羥基和堿性基團(tuán)。堿性與溶解性：由于結(jié)構(gòu)中含有多個(gè)羥基和堿性基團(tuán)。 2旋光性：本類藥物結(jié)構(gòu)中有多個(gè)氨基糖，具有旋光性。旋光性：本類藥物結(jié)構(gòu)中有多個(gè)氨基糖，具有旋光性。如硫酸慶大霉素的比旋度為如硫酸慶大霉素的比旋度為+107。+121。 3穩(wěn)定性：硫酸鏈霉素和硫酸慶大霉素干燥品比較穩(wěn)定，穩(wěn)定

18、性：硫酸鏈霉素和硫酸慶大霉素干燥品比較穩(wěn)定，硫酸鏈霉素水溶液在硫酸鏈霉素水溶液在pH5最穩(wěn)定，硫酸慶大霉素在最穩(wěn)定，硫酸慶大霉素在pH212比較穩(wěn)定。比較穩(wěn)定。 4UV：鏈霉素：鏈霉素max=230nm，慶大霉素?zé)o共軛雙鍵，因，慶大霉素?zé)o共軛雙鍵，因此無(wú)紫外吸收。此無(wú)紫外吸收。 第三節(jié)第三節(jié) 氨基糖苷類抗生素氨基糖苷類抗生素 一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì) （一）茚三酮反應(yīng)（一）茚三酮反應(yīng) 本類藥物具有羥基胺結(jié)構(gòu)和本類藥物具有羥基胺結(jié)構(gòu)和-氨基，可與茚三酮縮合，生氨基，可與茚三酮縮合，生成藍(lán)紫色化合物。成藍(lán)紫色化合物。 取慶大霉素取慶大霉素5mg，加水，加水1ml，0.1%茚三酮的水飽和

19、正丁醇茚三酮的水飽和正丁醇溶液溶液1ml，吡啶，水浴加熱，吡啶，水浴加熱5min，顯紫色。，顯紫色。 （二）（二）Molisch試驗(yàn)試驗(yàn) 具有五碳糖或六碳糖結(jié)構(gòu)的氨基糖苷類抗生素經(jīng)酸水解具有五碳糖或六碳糖結(jié)構(gòu)的氨基糖苷類抗生素經(jīng)酸水解后，在鹽酸或硫酸作用下脫水，成糠醛（五碳）或羥甲基后，在鹽酸或硫酸作用下脫水，成糠醛（五碳）或羥甲基糠醛（六碳糖）。這些產(chǎn)物遇糠醛（六碳糖）。這些產(chǎn)物遇a-萘酚或蒽酮成色。萘酚或蒽酮成色。 第三節(jié)第三節(jié) 氨基糖苷類抗生素氨基糖苷類抗生素 二、鑒別試驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn) （三）（三）N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)（甲基葡萄糖胺反應(yīng)（Elson-Morgan反應(yīng)）反應(yīng)） 鏈霉素水解產(chǎn)

20、物鏈霉素水解產(chǎn)物N-甲基葡萄糖胺在堿性溶液中與乙酰丙甲基葡萄糖胺在堿性溶液中與乙酰丙酮縮合成吡咯衍生物，與二甲氨基苯甲醛的酸性醇溶液反酮縮合成吡咯衍生物，與二甲氨基苯甲醛的酸性醇溶液反應(yīng)，即生成紅色化合物。應(yīng)，即生成紅色化合物。 （四）麥芽酚（四）麥芽酚（Maltol）反應(yīng)）反應(yīng) 鏈霉素在堿性溶液中，鏈酶糖經(jīng)分子重排，消除鏈霉素在堿性溶液中，鏈酶糖經(jīng)分子重排，消除N甲基甲基葡萄糖胺及鏈酶胍，生成麥牙酚，麥牙酚可與鐵離子在微葡萄糖胺及鏈酶胍，生成麥牙酚，麥牙酚可與鐵離子在微酸性溶液中形成紫紅色配位化合物。酸性溶液中形成紫紅色配位化合物。 第三節(jié)第三節(jié) 氨基糖苷類抗生素氨基糖苷類抗生素 二、鑒別試

21、驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn) （五）坂口反應(yīng)（五）坂口反應(yīng) 本品水溶液，加氫氧化鈉試液，水解為鏈酶胍，與本品水溶液，加氫氧化鈉試液，水解為鏈酶胍，與8羥羥基喹啉作用，再加次溴酸鈉試液，生成橙紅色化合物?；饔茫偌哟武逅徕c試液，生成橙紅色化合物。 （六）硫酸鹽反應(yīng)（六）硫酸鹽反應(yīng) 本類藥物多為硫酸鹽，可利用硫酸鹽與氯化鋇試液生成本類藥物多為硫酸鹽，可利用硫酸鹽與氯化鋇試液生成白色硫酸鋇沉淀進(jìn)行鑒別。白色硫酸鋇沉淀進(jìn)行鑒別。 第三節(jié)第三節(jié) 氨基糖苷類抗生素氨基糖苷類抗生素 二、鑒別試驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn) （七）（七） TLC法法 中國(guó)藥典中國(guó)藥典2005版采用該法對(duì)硫酸慶大霉素進(jìn)行鑒別。方版采用該法對(duì)硫酸慶大霉

22、素進(jìn)行鑒別。方法：取供試品溶液和對(duì)照品溶液各法：取供試品溶液和對(duì)照品溶液各2l，分別點(diǎn)于同一硅膠，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，用氯仿薄層板上，用氯仿-甲醇甲醇-氨水（氨水（1:1:1）的下層混合液為展）的下層混合液為展開劑，展開后，晾干，置碘蒸氣中顯色，供試品溶液和對(duì)開劑，展開后，晾干，置碘蒸氣中顯色，供試品溶液和對(duì)照品溶液所顯斑點(diǎn)的顏色和位置應(yīng)一致。照品溶液所顯斑點(diǎn)的顏色和位置應(yīng)一致。（八）光譜法（八）光譜法 采用紅外光譜法可鑒別慶大霉素。慶大霉素?zé)o紫外吸收，采用紅外光譜法可鑒別慶大霉素。慶大霉素?zé)o紫外吸收，而鏈霉素可采用紫外法鑒別，而鏈霉素可采用紫外法鑒別，max=230nm。 第三節(jié)第三

23、節(jié) 氨基糖苷類抗生素氨基糖苷類抗生素 二、鑒別試驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn) 取本品適量，精密稱定，加水制成含取本品適量，精密稱定，加水制成含0.65mgml-1的溶液，的溶液，取取4ml置置10ml容量瓶中，加異丙醇容量瓶中，加異丙醇2ml與鄰苯二醛試液，用與鄰苯二醛試液，用異丙醇稀釋至刻度，搖勻，置異丙醇稀釋至刻度，搖勻，置60水浴中加熱水浴中加熱15min，冷，冷卻，濾過(guò)，量取濾液卻，濾過(guò)，量取濾液10l注入高效液相色譜儀，記錄色譜注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。另取慶大霉素標(biāo)準(zhǔn)品，同法測(cè)定。圖。另取慶大霉素標(biāo)準(zhǔn)品，同法測(cè)定。C組分的保留時(shí)間組分的保留時(shí)間依次為：依次為：C1、C1、C2、C2。量取。

24、量取C1、C1、C2、C2的峰的峰高，按峰面積歸一化法計(jì)算：高，按峰面積歸一化法計(jì)算： 第三節(jié)第三節(jié) 氨基糖苷類抗生素氨基糖苷類抗生素 三、特殊雜質(zhì)檢查及組分分析三、特殊雜質(zhì)檢查及組分分析 規(guī)定：規(guī)定：C1 應(yīng)為應(yīng)為2550%，C1a應(yīng)為應(yīng)為1540%，C2a +C2應(yīng)為應(yīng)為2050%。 目前各國(guó)藥典均采用微生物檢定法測(cè)定本類藥物的效價(jià)。目前各國(guó)藥典均采用微生物檢定法測(cè)定本類藥物的效價(jià)。本法系利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)的擴(kuò)散作用量反應(yīng)平行本法系利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)的擴(kuò)散作用量反應(yīng)平行線原理的設(shè)計(jì)，比較標(biāo)準(zhǔn)品與供試品兩者對(duì)接種的試驗(yàn)菌線原理的設(shè)計(jì)，比較標(biāo)準(zhǔn)品與供試品兩者對(duì)接種的試驗(yàn)菌產(chǎn)生抑菌圈

25、的大小，以測(cè)定供試品效價(jià)的一種方法。產(chǎn)生抑菌圈的大小，以測(cè)定供試品效價(jià)的一種方法。 第三節(jié)第三節(jié) 氨基糖苷類抗生素氨基糖苷類抗生素 四、含量測(cè)定四、含量測(cè)定 （一）化學(xué)結(jié)構(gòu)（一）化學(xué)結(jié)構(gòu) 四環(huán)素類抗生素具有十二氫化并四苯基本結(jié)構(gòu)，屬于廣四環(huán)素類抗生素具有十二氫化并四苯基本結(jié)構(gòu)，屬于廣譜抗菌藥物。譜抗菌藥物。 第四節(jié)第四節(jié) 四環(huán)素類抗生素四環(huán)素類抗生素 一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 藥物名稱藥物名稱RR1R2R3四環(huán)素四環(huán)素金霉素金霉素HClOHOHCH3CH3HH （二）性質(zhì)（二）性質(zhì) 1酸堿性與溶解度酸堿性與溶解度 本類抗生素結(jié)構(gòu)中含有酚羥基、烯醇型羥基，顯弱酸性，本類抗生素結(jié)構(gòu)中含

26、有酚羥基、烯醇型羥基，顯弱酸性，而二甲胺基又顯弱堿性，故四環(huán)素類抗生素是兩性化合物。而二甲胺基又顯弱堿性，故四環(huán)素類抗生素是兩性化合物。與酸、堿均能成鹽。與酸、堿均能成鹽。 2旋光性旋光性 四環(huán)素類抗生素分子結(jié)構(gòu)中具有不對(duì)稱碳原子，有旋光四環(huán)素類抗生素分子結(jié)構(gòu)中具有不對(duì)稱碳原子，有旋光性，可用于定性、定量分析。性，可用于定性、定量分析。 第四節(jié)第四節(jié) 四環(huán)素類抗生素四環(huán)素類抗生素 一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì) （二）性質(zhì)（二）性質(zhì) 3紫外吸收和熒光性質(zhì)紫外吸收和熒光性質(zhì) 四環(huán)素類抗生素分子結(jié)構(gòu)中具有共軛雙鍵系統(tǒng)，在紫外四環(huán)素類抗生素分子結(jié)構(gòu)中具有共軛雙鍵系統(tǒng)，在紫外區(qū)有吸收，在紫外照射下可產(chǎn)生熒光，它們的降解產(chǎn)物也區(qū)有吸收，在紫外照射下可產(chǎn)生熒光，它們的降解產(chǎn)物也具有熒光。具有熒光。 4與金屬離子絡(luò)合與金屬離子絡(luò)合 與金屬離子與金屬離子Ca2+ 、Mg2+、Fe3+、Al3+生成有色配位化合物，生成有色配位化合物，并在產(chǎn)生熒光。并在產(chǎn)生熒光。 第四節(jié)第四節(jié) 四環(huán)素類抗生素四環(huán)素類抗生素 一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì) （二）性質(zhì)（二）性質(zhì) 5不穩(wěn)定性不穩(wěn)定