薄層色譜法(TLC)

1、薄層色譜法薄層色譜法(TLC(TLC) )班級：藥物化學班級：藥物化學姓名姓名：XXX日期：日期：2016.10.22課程：現代分離技術課程：現代分離技術一、定義一、定義：薄層色譜：常用TLC表示，又稱薄層層析，屬于固液吸附色譜。原理是利用混合物中各組分吸附或溶解性能的不同，達到分離的效果。另一方面若在制作薄層板時，把吸附層加厚，將樣品點成一條線，則可分離多達500mg的樣品。二二、特點特點及應用原則及應用原則：1、薄層色譜的特點： 靈敏度及分辨率高、分離快速、操作方便、同時分離多個樣品、樣品預處理簡單、設備簡單。2、展開劑體系的選擇： 一般展開劑體系選擇如下：根據分離樣品性質、薄層色譜板性質

2、選擇一個二元溶劑體系，通過調節(jié)溶劑比例以尋求適合Rf值。三、儀器與材料三、儀器與材料1 1、薄層板、薄層板2 2、點樣器、點樣器3 3、展開容器、展開容器4 4、顯色設備、顯色設備5 5、色譜檢視裝置、色譜檢視裝置1、薄層板、薄層板1.1薄層板分類自制薄層板普通薄層板和高效薄層板硅膠GF254、氧化鋁、纖維素、聚酰胺薄層板和C18鍵合相、氨基鍵合相、腈基鍵合相、二醇基鍵合相薄層板(固定相類型分類)1.1.1自制薄層板: 須能保證色譜質量；對薄層板需特別處理和化學改性可用；節(jié)約成本。玻璃板要求：表面光潔、平整，厚1-2mm，潔凈。規(guī)格：10cm10cm、10 cm15cm、10 cm20cm、2

3、0 cm20cm1.1.21.1.2薄層板的自制方法薄層板的自制方法：1、初步溶解CMC鈉鹽（0.5%-0.8%）2、恒溫再次溶解3、離心或抽濾（取上清液）4、溶解硅膠（1:3）注：超聲溶解。5、涂布6、晾干活化2 2、固定相、固定相： 最常用固定相： 硅膠G、硅膠GF254、硅膠H、硅膠HF254； 氧化鋁； 硅澡土； 纖維素等。 吸附劑：直徑10-40m 黏合劑：0.2%-0.5%羧甲基纖維素鈉、10%-15%煅石膏、淀粉、有機高分子聚合物、特殊要求可用緩沖液、稀堿液等。3 3、點樣器、點樣器 毛細管毛細管 微量注射器微量注射器 半自動及全自動點樣器半自動及全自動點樣器4 4、展開、展開容

4、器容器 專用平底或雙槽展開缸、蓋能密閉 特殊水平展開缸5 5、顯、顯色設備色設備 噴霧顯色：玻璃噴霧瓶或專用噴霧器，用壓縮氣體可使試劑呈均勻細霧狀噴出 浸漬顯色 蒸氣熏蒸顯色顯色劑的要求：顯色劑的要求：至少可以把微克級的被分離物質顯示出來；能給出一個確定的顯示區(qū)域；顯示區(qū)域有一定的穩(wěn)定 性。顯色劑可以分成兩大類：顯色劑可以分成兩大類： 一類是檢查一般有機化合物的通用顯色劑； 另一類是根據化合物分類或特殊官能團設計的專屬性顯色劑。 常用通用顯色劑常用通用顯色劑顯色劑顯色劑呈現顏色呈現顏色硫酸-水；硫酸-乙醇不同有機化合物顯不同顏色0.5碘的氯仿溶液 顯黃棕色中性0.05高錳酸鉀溶液 顯黃色堿性高

5、錳酸鉀試劑 顯黃色鐵氰化鉀-三氯化鐵試劑 還原性物質顯藍色，再噴2molL鹽酸溶液，則藍色加深。5磷鉬酸乙醇溶液 還原性化合物顯藍色，再用氨氣薰，則背景變?yōu)闊o色。專屬性專屬性顯色劑顯色劑顯色劑顯色劑適用化合物適用化合物硝酸銀過氧化氫鹵代烴類熒光素溴不飽和烴四氯鄰苯二甲酸酐芳香烴甲醛硫酸多環(huán)芳烴3，5一二硝基苯酰氯醇類品紅亞硫酸醛基化合物硝普鈉鐵氰化物肪族含氮化物四、操作方法：四、操作方法：點樣點樣 形狀：圓點狀、窄細條狀 點樣位置：距底邊1-1.5cm、圓點直徑不大于0.3cm、條帶寬0.5-1.0cm 樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點好樣的薄層板用電吹風的熱風吹干或放入

6、干燥器里晾干。展開展開 以直立展開為多 展開劑用量：展開后仍留有三分之二以上體積為宜；浸入展開劑的深度以距原點0.5cm為宜； 展開距離：8-15cm 溶劑蒸氣預飽和：15-30分鐘展開系統(tǒng)的飽和展開系統(tǒng)的飽和 一般使用的是一般使用的是雙槽雙槽的展開缸，一槽用來放的展開缸，一槽用來放展開劑展開劑，另一槽可加入，另一槽可加入氨水或硫酸氨水或硫酸。把待。把待展開的板放入兩槽間的平臺，斜架著，蓋展開的板放入兩槽間的平臺，斜架著，蓋上展開缸的蓋子。讓展開劑的蒸氣充滿展上展開缸的蓋子。讓展開劑的蒸氣充滿展開缸，并使薄層板吸附蒸氣達到飽和，防開缸，并使薄層板吸附蒸氣達到飽和，防止邊沿效應，飽和時間在止邊沿

7、效應，飽和時間在半個小時半個小時左右。左右。展開時難免要打開蓋子把薄層板放入展開展開時難免要打開蓋子把薄層板放入展開劑中，不過對薄層板與蒸氣的吸附平衡影劑中，不過對薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大，當然動作應該盡量響不大，當然動作應該盡量輕、快輕、快 五、注意事項五、注意事項 用涂布器制板的要點：玻璃板要用涂布器制板的要點：玻璃板要清潔清潔；調漿要；調漿要均均勻勻；涂布后的薄層板應低溫緩慢干燥。；涂布后的薄層板應低溫緩慢干燥。 自制薄板要求：表面均勻、平整、光滑，無麻點、自制薄板要求：表面均勻、平整、光滑，無麻點、無氣泡、無破損、無污染。無氣泡、無破損、無污染。 薄層厚薄對薄層厚薄對R Rf f值影響：硅膠值影響：硅膠G G板當厚低于板當厚低于150m150m時，時， R Rf f值隨薄層的減低而增大，可變性大；板厚值隨薄層的減低而增大，可變性大；板厚