全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理ppt課件

1、美國雅培美國雅培i2000化學(xué)發(fā)光免疫化學(xué)發(fā)光免疫分析儀分析儀吉林市中心醫(yī)院滕彥玲化學(xué)發(fā)光基本原理化學(xué)發(fā)光基本原理 反應(yīng)體系中的某種物質(zhì)的分子反應(yīng)體系中的某種物質(zhì)的分子(反應(yīng)物、反應(yīng)物、產(chǎn)物、中間體或熒光物質(zhì)產(chǎn)物、中間體或熒光物質(zhì)) 吸收了反應(yīng)所釋放吸收了反應(yīng)所釋放的能量而由基態(tài)躍遷至激發(fā)態(tài)，然后再從激的能量而由基態(tài)躍遷至激發(fā)態(tài)，然后再從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)，同時(shí)將能量以光輻射的形式發(fā)態(tài)返回基態(tài)，同時(shí)將能量以光輻射的形式釋放出來，產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光釋放出來，產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光.將化學(xué)發(fā)光反應(yīng)應(yīng)用于分析化學(xué)，根據(jù)某一將化學(xué)發(fā)光反應(yīng)應(yīng)用于分析化學(xué)，根據(jù)某一時(shí)刻的發(fā)光強(qiáng)度或反應(yīng)的發(fā)光總量來確定體時(shí)刻的發(fā)光強(qiáng)度或反應(yīng)的

2、發(fā)光總量來確定體系的相應(yīng)組分含量的分析方法叫化學(xué)發(fā)光分系的相應(yīng)組分含量的分析方法叫化學(xué)發(fā)光分析法析法. 化學(xué)發(fā)光的反應(yīng)必須具備兩個(gè)條件化學(xué)發(fā)光的反應(yīng)必須具備兩個(gè)條件v一、是該反應(yīng)能釋放出一定的能量，且釋放出的能量可以被某種反應(yīng)產(chǎn)物或中間體所吸收，使之處于激發(fā)態(tài)；v二、是這種激發(fā)態(tài)產(chǎn)物應(yīng)具有一定的化學(xué)發(fā)光量子產(chǎn)率，或者可以將其能量有效地轉(zhuǎn)移給某種熒光物質(zhì)，產(chǎn)生光輻射. v基于此，并不是任何化學(xué)反應(yīng)都能產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，因此，如果測量條件適當(dāng)，化學(xué)發(fā)光分析會(huì)有足夠的選擇性. 化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)v最早發(fā)現(xiàn)的化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象發(fā)生在生物體內(nèi)，即熒火蟲，現(xiàn)在最早發(fā)現(xiàn)的化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象發(fā)生在生物體

3、內(nèi)，即熒火蟲，現(xiàn)在稱之為生物發(fā)光稱之為生物發(fā)光(Bioluminescence). v到了十九世紀(jì)后期人們發(fā)現(xiàn)簡單的非生物有機(jī)化合物也能產(chǎn)到了十九世紀(jì)后期人們發(fā)現(xiàn)簡單的非生物有機(jī)化合物也能產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光生化學(xué)發(fā)光.v1877年，發(fā)現(xiàn)洛汾堿年，發(fā)現(xiàn)洛汾堿(2，4，5-三苯基咪唑三苯基咪唑)在堿性介質(zhì)中被在堿性介質(zhì)中被過氧化氫等試劑氧化時(shí)發(fā)出綠色的光過氧化氫等試劑氧化時(shí)發(fā)出綠色的光. v1928年，觀察到魯米諾年，觀察到魯米諾(3-氨基苯二甲酰肼氨基苯二甲酰肼)在堿性介質(zhì)中的在堿性介質(zhì)中的v 化學(xué)發(fā)光行為化學(xué)發(fā)光行為. v1935年，第一個(gè)報(bào)告了光澤精年，第一個(gè)報(bào)告了光澤精(N,N-二甲基二吖啶硝酸

4、鹽二甲基二吖啶硝酸鹽)與與過氧化氫反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光過氧化氫反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光.v到現(xiàn)在的吖啶酯、三聯(lián)吡啶釕等發(fā)光標(biāo)記物應(yīng)用技術(shù)的成熟。到現(xiàn)在的吖啶酯、三聯(lián)吡啶釕等發(fā)光標(biāo)記物應(yīng)用技術(shù)的成熟?；瘜W(xué)發(fā)光分析法的特點(diǎn)化學(xué)發(fā)光分析法的特點(diǎn)v由于化學(xué)發(fā)光分析不使用任何光源，避免了背景光和雜散光由于化學(xué)發(fā)光分析不使用任何光源，避免了背景光和雜散光的干擾，降低了噪聲，大大提高了信噪比，因此，化學(xué)發(fā)光的干擾，降低了噪聲，大大提高了信噪比，因此，化學(xué)發(fā)光分析法一般都有很高的靈敏度，通?？蓽y定納克級(jí)或皮克級(jí)分析法一般都有很高的靈敏度，通?？蓽y定納克級(jí)或皮克級(jí)的化學(xué)成分的化學(xué)成分.v測量化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度，多采用光電轉(zhuǎn)換裝置

5、，用函數(shù)記錄儀或測量化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度，多采用光電轉(zhuǎn)換裝置，用函數(shù)記錄儀或數(shù)顯裝置，記錄化學(xué)發(fā)光的相對(duì)強(qiáng)度數(shù)顯裝置，記錄化學(xué)發(fā)光的相對(duì)強(qiáng)度. 以最大發(fā)光強(qiáng)度以最大發(fā)光強(qiáng)度(曲線曲線的峰高的峰高)定量被測組分的濃度定量被測組分的濃度. v由于流動(dòng)注射分析由于流動(dòng)注射分析(FIA)技術(shù)的發(fā)展，流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光儀技術(shù)的發(fā)展，流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光儀也廣泛使用也廣泛使用. v配備微機(jī)系統(tǒng)，自動(dòng)進(jìn)樣，儲(chǔ)存記錄，打印結(jié)果，使化學(xué)發(fā)配備微機(jī)系統(tǒng)，自動(dòng)進(jìn)樣，儲(chǔ)存記錄，打印結(jié)果，使化學(xué)發(fā)光分析的速度更快光分析的速度更快.化學(xué)發(fā)光的分類化學(xué)發(fā)光的分類v化學(xué)發(fā)光反應(yīng)參與的免疫測定分為二種類型?；瘜W(xué)發(fā)光反應(yīng)參與的免疫測定分為二種

6、類型。v第一種是以發(fā)光劑作為酶免疫測定的底物，通過發(fā)第一種是以發(fā)光劑作為酶免疫測定的底物，通過發(fā)光反應(yīng)增強(qiáng)測定的敏感性。光反應(yīng)增強(qiáng)測定的敏感性。v如：化學(xué)發(fā)光酶免疫測定如：化學(xué)發(fā)光酶免疫測定CLEIA，與酶標(biāo)，與酶標(biāo)ELISA法類似，即最后一步酶反應(yīng)所用底物為發(fā)光劑法類似，即最后一步酶反應(yīng)所用底物為發(fā)光劑 ） v第二種是以發(fā)光劑作為抗體或抗原的標(biāo)記物，直接第二種是以發(fā)光劑作為抗體或抗原的標(biāo)記物，直接通過發(fā)光反應(yīng)檢測標(biāo)本中抗原或抗體的含量。通過發(fā)光反應(yīng)檢測標(biāo)本中抗原或抗體的含量。v 如：化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫測定亦稱化學(xué)發(fā)光免疫測定如：化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫測定亦稱化學(xué)發(fā)光免疫測定CLIA）、電化學(xué)發(fā)光免疫

7、測定）、電化學(xué)發(fā)光免疫測定ECLI） ABBOTT i 2000SR 構(gòu)造構(gòu)造v1. i 2000SR processing modulev2. RSH (retest sample handler)v3. SCC (system control center) ABBOTT i 2000SR 構(gòu)造v1. Front processing center coverv2. Processing module keypadv3. Supply and waste center doorv4. Card cage doorv1. Rear processing center coverv2. Rea

8、r processing center access panelv3. Power supply panelv4. Pump bay panelABBOTT i 2000SR 構(gòu)造構(gòu)造Sample hardware components: Provide sample aspiration and dispense.2. Reagent hardware components: Provide reagent aspiration and dispense.3. Process path hardware components: Position the RVs for sample and

9、reagent aspiration, mixing, washing, and CMIA processingv1. Sample pipettorv STAT pipettorSample and STAT pipettors (S and ST): 2. Sample and STAT syringes (SS and STS): 3. Sample and STAT wash stations (SW and STW):Reagent carousel2. Reagent bar code reader3. Reagent pipettors4. Reagent syringes 5.

10、 Reagent wash stations1. Load diverter 2. RV access door 3. RV loader and hopper assembly 4. STAT diverter5. Vortexers (Mix)6. Wash zone diverter 7. Wash zone manifolds (WZ1, WZ2):8. Process path drive motor 9. Pre-trigger/trigger manifold 10. CMIA reader (CMIA)11. Liquid waste arm 12. RV unloaderAB

11、BOTT i 2000SR檢測原理檢測原理vArchitect I系統(tǒng)采用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析技術(shù)系統(tǒng)采用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析技術(shù)Chemiluminesent Microparticle ImmunoAssay, CMIA檢測樣品中的抗原，抗體和分析物。檢測樣品中的抗原，抗體和分析物。v即：磁性微粒子包被的捕捉分子抗原，抗體或病毒顆粒即：磁性微粒子包被的捕捉分子抗原，抗體或病毒顆粒特異的與被分析物中抗原、抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，特異的與被分析物中抗原、抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，再與吖啶酯標(biāo)記的連接物反應(yīng)形成雙抗體夾心抗原抗體復(fù)合再與吖啶酯標(biāo)記的連接物反應(yīng)形成雙抗體夾心抗原抗體復(fù)合物

12、。吖啶酯在過氧化氫的稀堿溶液中發(fā)生氧化還原反應(yīng)生成物。吖啶酯在過氧化氫的稀堿溶液中發(fā)生氧化還原反應(yīng)生成10-甲基吖啶酮，當(dāng)它恢復(fù)到基態(tài)時(shí)發(fā)光，根據(jù)發(fā)光強(qiáng)度可甲基吖啶酮，當(dāng)它恢復(fù)到基態(tài)時(shí)發(fā)光，根據(jù)發(fā)光強(qiáng)度可計(jì)算出分析物的濃度計(jì)算出分析物的濃度 。ABBOTT i 2000SR試劑組成試劑組成v試劑組成試劑組成 v中圈中圈RI）：包被有）：包被有抗體的順磁性微?？贵w的順磁性微粒子子v內(nèi)圈內(nèi)圈R2）：吖啶）：吖啶酯包被的抗體酯包被的抗體v外圈：樣本稀釋液外圈：樣本稀釋液v預(yù)激發(fā)液：預(yù)激發(fā)液：1.32%的的過氧化氫過氧化氫v激發(fā)液：激發(fā)液：0.35mol./L的氫氧化鈉的氫氧化鈉v清洗緩沖液：磷酸清洗

13、緩沖液：磷酸鹽緩沖液鹽緩沖液R1試劑試劑R2試劑試劑ABBOTT i 2000SR反應(yīng)類型反應(yīng)類型v1.雙抗原抗體夾心一步法雙抗原抗體夾心一步法v2.雙抗原抗體夾心兩步法雙抗原抗體夾心兩步法v Assay processing for One step 25 v Assay processing for Two step 18-4v STAT assay processing for One step 11v STAT assay processing for Two step 4-4Assay processing for Two step 18-4 (i System) v1. At po

14、sition 1 the sample pipettor dispenses the sample into the RV (reaction vessel). v2. At position 2 the R1 pipettor dispenses the microparticles. v3. At position 3 the vortexer mixes the sample and microparticles. v4. At positions 4 - 63 the reaction mixture incubates for 18 minutes. 共共112個(gè)個(gè)RV杯空位，每杯空

15、位，每18秒秒轉(zhuǎn)一個(gè)空位，轉(zhuǎn)一個(gè)空位，200T/h。常規(guī)。常規(guī)28Min/TESTAssay processing for Two step 18-4 (i System)v5. At positions 64 - 67 the wash zone 1 manifold washes the reaction mixture in the RV, and then removes unbound materials Assay processing for Two step 18-4 (i System)v6. At position 71 the R2 pipettor dispenses

16、acridinium-labeled conjugate. v7. At position 72 the vortexer mixes the reaction mixture. v8. At positions 73 - 86 the reaction mixture incubates for 4 minutes.Assay processing for Two step 18-4 (i System)v9. At positions 87 - 90 the wash zone 2 manifold washes the reaction mixture in the RV, and th

17、en removes unbound materials. Assay processing for Two step 18-4 (i System)v10. At position 94 the pre-trigger nozzle dispenses Pre-Trigger Solution to the reaction mixture, and then mixes using the vortexer. v11. At position 98 the CMIA optical system takes a background read, the trigger nozzle dis

18、penses Trigger Solution to the reaction mixture, and then the CMIA optical system takes an activated read. v12. At position 100 the liquid waste arm aspirates the liquid waste from the RV. v13. At position 109 the RV unloader removes the RVAssay processing for One step 25 (i System) v1. At position

19、1 the sample pipettor dispenses the sample into the RV (reaction vessel). v2. At position 2 the R1 pipettor dispenses the microparticles and acridinium-labeled conjugate. vNOTE: For a delayed one-step assay the R2 pipettor adds the acridinium-labeled conjugate at position 71 and the vortexer mixes t

20、he reaction mixture at position 72.v3. At position 3 the vortexer mixes the sample, microparticles, and conjugate. v4. At positions 4 - 86 the reaction mixture incubates for 25 minutes. Assay processing for One step 25 (i System)v5. At positions 87 - 90 the wash zone 2 manifold washes the reaction m

21、ixture in the RV, and then removes unbound materials. vNext position is same to the two step18-4.STAT assay processing for One step 11 (i System) v1. At position 47 the STAT pipettor dispenses the sample into the RV (reaction vessel). v2. At position 48 the R2 pipettor dispenses the microparticles a

22、nd acridinium-labeled conjugate. v3. At position 49 the vortexer mixes the sample, microparticles, and conjugate. v4. At positions 50 - 86 the reaction mixture incubates for 11 minutes. STAT assay processing for One step 11 (i System)v5. At positions 87 - 90 the wash zone 2 manifold washes the react

23、ion mixture in the RV, and then removes unbound materials. vNext position is same to the two step18-4.STAT assay processing for Two step 4-4 (i System) v1. At position 47 the STAT pipettor dispenses the sample into the RV (reaction vessel). v2. At position 48 the R2 pipettor dispenses the microparticles. v3. At position 49 the vortexer mixes the sample and microparticles. v4. At positions 50 - 63 the reaction mixture i