實(shí)驗(yàn)一病理組織切片制作技術(shù)2011

1、 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn) 獸醫(yī)病理解剖學(xué)獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn) 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 實(shí)驗(yàn)一 病理組織切片制作技術(shù)實(shí)驗(yàn)二 局部血液循環(huán)障礙：充血、 淤血、缺血、梗死、出血 實(shí)驗(yàn)三 局部血液循環(huán)障礙 血栓、 水腫實(shí)驗(yàn)四 組織細(xì)胞的變性 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)五 組織細(xì)胞壞死 實(shí)驗(yàn)六 組織細(xì)胞病理性物質(zhì)沉著 及組織修復(fù) 實(shí)驗(yàn)七 炎癥實(shí)驗(yàn)八 腫瘤 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)九 心臟血管系統(tǒng)病理實(shí)驗(yàn)十 呼吸系統(tǒng)病理實(shí)驗(yàn)十一 消化系統(tǒng)病理實(shí)驗(yàn)十二 泌尿系統(tǒng)病理實(shí)驗(yàn)十三 中樞神經(jīng)系統(tǒng)病理實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理

2、解剖學(xué)實(shí)驗(yàn) 前言 獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)部分在本課程教學(xué)中占有特殊地位。學(xué)生通過觀察肉眼和切片標(biāo)本印證課堂所講的理論，加強(qiáng)理解，取得感性知識(shí)的教學(xué)環(huán)節(jié)。在學(xué)習(xí)過程中，要求同學(xué)初步掌握觀察和描述器官組織病變的方法和認(rèn)識(shí)病變。 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn) 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn) 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一 病理組織切片制作技術(shù)病理組織切片制作技術(shù) 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊螅?、重點(diǎn)掌握病理組織切片的基本制作過程步驟。2、了解病理組織切片制作過程中的注意事項(xiàng)。 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 掌握組織材料的取材、固定、脫水、

3、透明、包埋、切片、烤片、脫蠟、染色及封固的基本操作。 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)一、取材及固定（一）取材注意事項(xiàng)： 1、材料新鮮 2、組織塊力求小而薄 3、勿使組織塊受擠壓 4、盡量保持組織的原有形態(tài) 5、熟悉取材部位 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)（一）取材注意事項(xiàng)： 6、選好組織塊的切面 7、保持材料的清潔 8、切除不需要的部位 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)（二）固定及目的： 應(yīng)用化學(xué)試劑使組織或細(xì)胞中的無機(jī)成分和有機(jī)成分凝固或沉淀，以保持其生活狀態(tài)的過程稱為固定。 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn) 固定液是10%福爾馬林溶液（4%甲醛溶液），固定24小時(shí)以上。

4、 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn) 固定的目的1、迅速阻止組織、細(xì)胞死后變化，防止自溶與腐敗，使之盡量保持生前的狀態(tài)與結(jié)構(gòu)。2、使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等成分轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，以保持其原有狀態(tài)。3、使組織內(nèi)各種物質(zhì)成分產(chǎn)生不同的折光率，以便染色后易于鑒別和觀察。4、使組織塊硬化，便于制作薄片。 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)固定的注意事項(xiàng)1、組織塊不宜大，厚度小于5mm，長(zhǎng)寬也應(yīng)小于1515mm。2、固定液與組織塊的比例應(yīng)大于10：1。3、軟組織或較大組織塊可先經(jīng)2-3小時(shí)固定后再修整成小塊，重新投入新配制的固定液中繼續(xù)固定。4、腸道可在漿膜面貼上一層厚紙，以防固定組織變形。

5、主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn) 二、固定后處理及切片(一)、洗滌與修切(二)、脫水與透明 脫水：將組織塊內(nèi)水分置換的過程。 透明：乙醇和石蠟不互溶，最常用的透明劑是二甲苯。既能溶于脫水劑又能溶于包埋劑（石蠟），透明必須適度 。 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)50%乙醇: 30-60min70%乙醇: 1-2小時(shí)或過夜80%乙醇: 1-2小時(shí)95%乙醇: 1-1.5小時(shí)100%乙醇: 30min100%乙醇: 20min1：1無水乙醇：二甲苯: 20min二甲苯: 10-30min 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)生物組織脫水機(jī) 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)(三)、浸蠟與

6、包埋 52-58石蠟，浸蠟的全過程在60的溫箱中進(jìn)行。 1：1二甲苯：石蠟: 30min 石蠟: 30min 石蠟: 30min 石蠟: 30min 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)組織包埋機(jī) 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)（四）切片、粘片1、切片前處理及切片2、載玻片處理3、粘片（展片）4、烤片 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)輪轉(zhuǎn)式組織切片機(jī) 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)三、脫蠟和染色三、脫蠟和染色（一）、脫蠟1、二甲苯: 5-10min2、二甲苯: 5-10min3、1：1二甲苯：乙醇（冬20min）: 5min4、無水乙醇、95%、80%、70% 、50%梯度乙醇

7、每級(jí)1-2min5、蒸餾水1-2min 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)（二）、染色（HE染色法）1、蘇木素染液: 515min2、蒸餾水（洗去多余的染液）: 30s3、分色:1%鹽酸-70 %乙醇分色: 1-30s4、藍(lán)化:自來水沖洗（堿化，核藍(lán)色）: 15-20min5、蒸餾水（洗去多余的堿） : 1-2min 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)6、逐級(jí)入50%、70%、85%乙醇，: 每級(jí)1-2min 7、伊紅- 95%乙醇染液: 15s2min8 、95%、無水乙醇、無水乙醇逐級(jí) 脫水，每級(jí)1-2min9、1：1無水乙醇：二甲苯 : 5min10、二甲苯 ：5min11、二甲苯 ：5min 主講：徐鑌蕊 教授獸醫(yī)病理解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)組織切片