藥物分析_11維生素類藥物

1、概概 述述一、定義一、定義 維生素維生素是維持人體正常代謝功能所是維持人體正常代謝功能所必需的必需的微量生物活性物質(zhì)微量生物活性物質(zhì)，主要用于，主要用于機(jī)體的能量轉(zhuǎn)移和代謝調(diào)節(jié)，體內(nèi)不機(jī)體的能量轉(zhuǎn)移和代謝調(diào)節(jié)，體內(nèi)不能自行合成，必須從食物中攝取。能自行合成，必須從食物中攝取。 VitA VitA、D D2 2、D D3 3、 E E、K K1 1 等等 脂溶性脂溶性水溶性水溶性 VitB VitB族族 (B(B1 1、B B2 2、B B6 6、B B1212) ) VitC VitC、葉酸、煙酸、煙酰胺、葉酸、煙酸、煙酰胺VitMVitMVitPPVitPP二、分類二、分類 維生素A的功能及

2、來源w VitA 以不同方式幾乎影響機(jī)體的一切組織細(xì)胞。w 維持正常的視覺反應(yīng)，w 維持上皮組織的正常形態(tài)與功能。 三、分析方法三、分析方法 本類藥物的分析方法很多，有生本類藥物的分析方法很多，有生物法、微生物法、化學(xué)法和物理化學(xué)物法、微生物法、化學(xué)法和物理化學(xué)法，多依據(jù)其生物特性及理化性質(zhì)進(jìn)法，多依據(jù)其生物特性及理化性質(zhì)進(jìn)行，但目前常用的分析方法是行，但目前常用的分析方法是化學(xué)法化學(xué)法或或物理化學(xué)法物理化學(xué)法。第一節(jié)第一節(jié) 維生素維生素A A（Vitamin AVitamin A） 維生素維生素A A包括有維生素包括有維生素A1A1（視黃醇）、去（視黃醇）、去氫維生素氫維生素A A（維生素（

3、維生素A2 A2 ）和去水維生素）和去水維生素A A（維生素維生素A3A3）等，其中）等，其中維生素維生素A1A1活性最高活性最高，維，維生素生素A2A2的生物活性是維生素的生物活性是維生素A1A1的的30-40%30-40%，維生素維生素A3A3的生物活性是維生素的生物活性是維生素A1A1的的0.4%0.4%，故通常所說的維生素故通常所說的維生素A A系指維生素系指維生素A1A1。CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3-H 維生素維生素A A醇醇-COCH3 維生素維生素A A醋酸酯醋酸酯-COC15H31 維生素維生素A A棕櫚酸酯棕櫚酸酯R :一、結(jié)構(gòu)和性質(zhì)一、結(jié)構(gòu)和性質(zhì)1 1、為一個

4、具有為一個具有共軛多烯側(cè)鏈共軛多烯側(cè)鏈的的環(huán)己烯環(huán)己烯v （1 1）具有）具有UVUV吸收吸收v （2 2）存在多種立體異構(gòu)化合物）存在多種立體異構(gòu)化合物v （3 3）易發(fā)生脫氫、脫水、聚合反應(yīng)）易發(fā)生脫氫、脫水、聚合反應(yīng)酸酸醛醛環(huán)氧化物環(huán)氧化物、氧化劑、氧化劑紫外線、紫外線、VitAVitAVitAOO2v 或有金屬離子存在時更易氧化或有金屬離子存在時更易氧化2 2、不穩(wěn)定性、不穩(wěn)定性3 3、與三氯化銻發(fā)生呈色反應(yīng)、與三氯化銻發(fā)生呈色反應(yīng)紫紫紅紅藍(lán)藍(lán)色色3SbClVitACHCl34 4、溶解性、溶解性不溶于水不溶于水易溶于有機(jī)溶劑和植物油等易溶于有機(jī)溶劑和植物油等1 1、三氯化銻反應(yīng)、三氯

5、化銻反應(yīng)紫紫紅紅藍(lán)藍(lán)色色 3SbClVitACHCl3二、鑒別試驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn) 維生素維生素A A在在飽和無水三氯化銻飽和無水三氯化銻的無的無醇氯仿溶液中呈現(xiàn)不穩(wěn)定的藍(lán)色，再變醇氯仿溶液中呈現(xiàn)不穩(wěn)定的藍(lán)色，再變?yōu)樽霞t色。為紫紅色。 反應(yīng)條件：反應(yīng)條件： 要求要求無水無水，如存在水可能產(chǎn)生氯化，如存在水可能產(chǎn)生氯化氧銻（氧銻（ SbSbOOClCl ）。）。 配制所用的氯仿不能含醇（應(yīng)用配制所用的氯仿不能含醇（應(yīng)用無無醇醇氯仿）和光氣（氯仿）和光氣（COCOClCl2 2）。）。 三氯化銻有腐蝕性。三氯化銻有腐蝕性。2 2、紫外吸收光譜、紫外吸收光譜 維生素維生素A A分子中含有分子中含有5 5

6、個共軛雙鍵，個共軛雙鍵，其無水乙醇液在其無水乙醇液在326nm326nm波長處有最大吸波長處有最大吸收。當(dāng)在鹽酸催化下加熱，即發(fā)生脫水收。當(dāng)在鹽酸催化下加熱，即發(fā)生脫水反應(yīng)生成去水維生素反應(yīng)生成去水維生素A A（A3A3）。去水維）。去水維生素生素A A比維生素比維生素A A多一個共軛雙鍵，其最多一個共軛雙鍵，其最大吸收波長向紅移，在大吸收波長向紅移，在340340390nm390nm波波長間出現(xiàn)長間出現(xiàn)3 3個最大吸收峰。個最大吸收峰。3 3、薄層色譜、薄層色譜三、含量測定三、含量測定 1 1、紫外分光光度法、紫外分光光度法 利用利用維生素維生素A A醇醇和其和其醋酸酯醋酸酯分子中分子中具多

7、烯共軛體系結(jié)構(gòu)，在具多烯共軛體系結(jié)構(gòu)，在325325328nm328nm處有選擇性吸收峰，故可進(jìn)行含量測處有選擇性吸收峰，故可進(jìn)行含量測定。定。立體異構(gòu)體立體異構(gòu)體氧化產(chǎn)物及光照產(chǎn)物氧化產(chǎn)物及光照產(chǎn)物合成中間體合成中間體去氫維生素去氫維生素A A（ VitAVitA2 2）去水維生素去水維生素A A（ VitAVitA3 3）均對測定均對測定有干擾，有干擾，故采用故采用三三點(diǎn)校正法點(diǎn)校正法 三點(diǎn)校正法三點(diǎn)校正法（1 1）條件：）條件： 雜質(zhì)的吸收在雜質(zhì)的吸收在310340nm310340nm波長范圍波長范圍內(nèi)呈一條直線，且隨波長的增大吸收內(nèi)呈一條直線，且隨波長的增大吸收度減小；度減小； 物質(zhì)對

8、光的吸收具有物質(zhì)對光的吸收具有加和性加和性。（2 2）波長的選擇：）波長的選擇： 1 1 VitA VitA的的 maxmax（328nm328nm） 2 2 3 3 分別在分別在 1 1的兩側(cè)各選一點(diǎn)的兩側(cè)各選一點(diǎn)（3 3）測定方法：）測定方法： 第一法（直接測定法）第一法（直接測定法） 3403163283282523AAA.A 校校正正測定對象測定對象 VitAVitA醋酸酯醋酸酯 第二法（皂化法）第二法（皂化法）：用醇制氫氧化：用醇制氫氧化鉀加熱皂化（水解），用乙醚提取，揮鉀加熱皂化（水解），用乙醚提取，揮干溶劑，殘渣用異丙醇溶解，測定含量。干溶劑，殘渣用異丙醇溶解，測定含量。 334

9、310325325260455528156A.A.A.A 校校正正測定測定對象對象 VitAVitA醇醇 第一法第一法 第二法第二法測定對象測定對象 維生素維生素A A醋酸酯醋酸酯 維生素維生素A A醇醇方法方法 直接取樣，測定直接取樣，測定 皂化提取，測定皂化提取，測定溶劑溶劑 環(huán)己烷環(huán)己烷 異丙醇異丙醇 max 328 nm 325 nm 328 nm 325 nm測定波長測定波長 5 5個個 4 4個個換算因數(shù)換算因數(shù) 1900 18301900 1830第一法與第二法的區(qū)別第一法與第二法的區(qū)別（二）三氯化銻比色法（二）三氯化銻比色法 維生素維生素A A可與三氯化銻的氯仿溶液作可與三氯化

10、銻的氯仿溶液作用，產(chǎn)生藍(lán)色，在用，產(chǎn)生藍(lán)色，在618618620nm620nm波長處有波長處有最大吸收。最大吸收。可用于維生素可用于維生素A A的比色測定。的比色測定。要求在要求在5 51010秒內(nèi)測定。本法缺點(diǎn)多，已秒內(nèi)測定。本法缺點(diǎn)多，已被被UVUV法取代。法取代。（三）高效液相色譜法（三）高效液相色譜法NSCH3CH2CH2OHNNH3CNH2CH2+氨基嘧啶環(huán)氨基嘧啶環(huán)CHCH2 2噻唑環(huán)噻唑環(huán)( (季銨堿季銨堿) )HClCl-維生素維生素B B1 1（鹽酸硫胺）（鹽酸硫胺）第二節(jié)第二節(jié) 維生素維生素B B1 1的分析的分析（1 1）溶解性）溶解性易溶于水易溶于水水溶液呈酸性水溶液呈

11、酸性（2 2）UVUV共軛雙鍵共軛雙鍵max = 246nm（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)嘧啶環(huán)嘧啶環(huán) 伯氨伯氨噻唑環(huán)噻唑環(huán) 季銨季銨1 1、可與酸成鹽、可與酸成鹽2 2、與生物堿、與生物堿3 3、含量測定、含量測定 非水堿量法非水堿量法 藍(lán)色熒光藍(lán)色熒光硫色素硫色素正丁醇正丁醇 OOH（3 3） 硫色素反應(yīng)硫色素反應(yīng)（4 4） 堿性堿性熒熒光光消消失失藍(lán)藍(lán)色色熒熒光光硫硫色色素素正正丁丁醇醇）（環(huán)環(huán)合合 HCNFeKOHNaOHVitB6321O OH（二）鑒別試驗(yàn)（二）鑒別試驗(yàn)1 1、硫色素反應(yīng)、硫色素反應(yīng)（VitBVitB1 1的的專屬反應(yīng)）專屬反應(yīng)） VitB1 4242HgIHBH

12、gIK 淡淡黃黃H+ 2KIIIHIB2 紅紅色色H+白白色色硅硅鎢鎢酸酸 H+ OH4WO12OHSiOB23222 白白色色扇扇形形苦苦酮酮酸酸 H+2 2、沉淀反應(yīng)、沉淀反應(yīng)1 1、非水溶液滴定法、非水溶液滴定法（藥典用于測定原料藥）（藥典用于測定原料藥）v 原理：利用噻唑環(huán)上季銨和嘧啶環(huán)上氨基原理：利用噻唑環(huán)上季銨和嘧啶環(huán)上氨基的弱堿性，在非水溶液中用高氯酸液滴定。的弱堿性，在非水溶液中用高氯酸液滴定。（三）含量測定（三）含量測定2 2、UVUV分光光度法分光光度法（藥典用于測定片劑、注（藥典用于測定片劑、注射劑）射劑）（1 1）原理：維生素）原理：維生素B1B1分子中具有共軛雙鍵結(jié)分

13、子中具有共軛雙鍵結(jié)構(gòu)，具有紫外吸收特征，可在其最大吸收波構(gòu)，具有紫外吸收特征，可在其最大吸收波長下測定吸收度，根據(jù)取樣量計算含量。長下測定吸收度，根據(jù)取樣量計算含量。（2 2）方法）方法熒熒光光硫硫色色素素異異丁丁醇醇鐵鐵氰氰化化鉀鉀 VitBNaOH（三）硫色素?zé)晒夥ǎㄈ┝蛏責(zé)晒夥ǎ? 1）激發(fā)波長激發(fā)波長365nm365nm發(fā)射波長發(fā)射波長435nm435nm+ NaOH+ NaOH + + 鐵氰化鉀鐵氰化鉀 + + 異丁醇異丁醇+ NaOH+ NaOH + + 異丁醇異丁醇+ NaOH+ NaOH + + 鐵氰化鉀鐵氰化鉀 + + 異丁醇異丁醇+ NaOH+ NaOH + + 異丁醇

14、異丁醇SdAb%WWdSbA%VitB1001 稀稀釋釋度度稀稀釋釋度度樣樣對對對照液對照液供試液供試液靈敏度高，線性范圍寬靈敏度高，線性范圍寬代謝產(chǎn)物不干擾，適用于體液分析代謝產(chǎn)物不干擾，適用于體液分析654321OOHHOO C OHHCH2OHL L抗壞血酸抗壞血酸第三節(jié)第三節(jié) 維生素維生素C C的分析的分析 易溶于水易溶于水 水溶液呈酸性水溶液呈酸性( (一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)1 1、溶解性、溶解性O(shè)OHHOO C OHHCH2OH123456C C3 3OHOH的的pKapKa = 4.17 = 4.17C C2 2OHOH的的pKapKa = 11.57 = 11.572 2

15、、酸性、酸性一元酸一元酸二烯醇結(jié)構(gòu)二烯醇結(jié)構(gòu)二酮基結(jié)構(gòu)二酮基結(jié)構(gòu)二烯醇結(jié)構(gòu)二烯醇結(jié)構(gòu)OOHOHCCOOCC3 3、強(qiáng)還原性、強(qiáng)還原性L(+)L(+)抗壞血酸抗壞血酸活性最強(qiáng)活性最強(qiáng)手性手性C C（C C4 4、C C5 5）4 4、光學(xué)活性、光學(xué)活性O(shè)OHHOO C OHHCH2OH123456*顯顯色色糠糠醛醛衍衍生生物物糠糠醛醛酚酚類類脫脫水水 H糖類的顯色反應(yīng)糖類的顯色反應(yīng)藍(lán)藍(lán)色色糠糠醛醛吡吡咯咯脫脫水水 HVitC50結(jié)構(gòu)與糖類相似結(jié)構(gòu)與糖類相似5 5、具糖的性質(zhì)、具糖的性質(zhì)nmnmmaxOHmaxH 6 6、UVUV特征特征去去氫氫抗抗壞壞血血酸酸OVitC（二）鑒別試驗(yàn)（二）鑒別試

16、驗(yàn)OHOO C OHHCH2OHHOCH2OHOOOO C OHH O（銀鏡）（銀鏡）黑黑 AgAgNOVitC1 1、與、與AgNOAgNO3 3反應(yīng)反應(yīng)2 2、與、與2 2，6 - 6 - 二氯靛酚反應(yīng)二氯靛酚反應(yīng)(ChP2000)(ChP2000)無無色色二二氯氯靛靛酚酚， VitC62氧化型氧化型玫瑰紅色玫瑰紅色 H還原型還原型藍(lán)色藍(lán)色 OHOH(ChP2000)(ChP2000)紅紅堿堿性性酒酒石石酸酸銅銅 OCuVitC3 3、與堿性酒石酸銅反應(yīng)、與堿性酒石酸銅反應(yīng)USPUSP4 4、與、與KMnOKMnO4 4反應(yīng)反應(yīng) MnKMnOVitC5 5、糖類的反應(yīng)、糖類的反應(yīng)6 6、紫

17、外分光光度法、紫外分光光度法（三）雜質(zhì)檢查（略）（三）雜質(zhì)檢查（略）1 1、溶液的澄清度與顏色檢查、溶液的澄清度與顏色檢查2 2、鐵、銅離子的檢查：原子吸收分光光度、鐵、銅離子的檢查：原子吸收分光光度 IIVitCH去氫抗壞血酸去氫抗壞血酸2指示劑指示劑 淀粉指示液淀粉指示液原理原理（1 1）1 1、碘量法、碘量法（四）含量測定（四）含量測定 取本品約取本品約0.2g0.2g，精密稱定，加新沸，精密稱定，加新沸過的冷水過的冷水100ml100ml與稀醋酸與稀醋酸10ml10ml使溶解，使溶解，加淀粉指示液加淀粉指示液1ml1ml，立即用碘滴定液，立即用碘滴定液（0.1mol/L0.1mol/L

18、）滴定，至溶液顯藍(lán)色，在）滴定，至溶液顯藍(lán)色，在3030秒內(nèi)不褪。每秒內(nèi)不褪。每1ml1ml碘滴定液碘滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于8.806mg8.806mg的的C C6 6H H8 8OO6 6（2 2）方法）方法 酸性環(huán)境酸性環(huán)境 d . HCld . HCl 新沸冷新沸冷H H2 2OO減慢減慢VitCVitC被被OO2 2氧化速度氧化速度（3 3）討論）討論 立即滴定立即滴定 減免水中減免水中OO2 2的干擾的干擾減少減少OO2 2的干擾的干擾（二）（二）2 2，6 - 6 - 二氯靛酚鈉滴定法二氯靛酚鈉滴定法酚酚亞亞胺胺二二氯氯靛靛酚酚， VitCUSP

19、USPJPJP原理原理（1 1）空空樣樣二氯靛酚液二氯靛酚液空白空白樣品樣品VVHAcHPO 3自身指示終點(diǎn)法自身指示終點(diǎn)法藍(lán)藍(lán)色色玫玫瑰瑰紅紅 OHH無無色色還還原原 （2 2）方法）方法快速滴定快速滴定 2min2min內(nèi)內(nèi) 酸性環(huán)境酸性環(huán)境 HPOHPO3 3-HAc -HAc 穩(wěn)定穩(wěn)定VitCVitC防止其他還原性物質(zhì)干擾防止其他還原性物質(zhì)干擾剩余比色測定剩余比色測定 AVitC測測二二氯氯靛靛酚酚 （定量過量）（定量過量）（測剩余染料）（測剩余染料）（3 3）討論）討論（4 4）缺點(diǎn)）缺點(diǎn) 需經(jīng)常標(biāo)定需經(jīng)常標(biāo)定貯存貯存一周一周不穩(wěn)定不穩(wěn)定干擾多干擾多 氧化力較強(qiáng)氧化力較強(qiáng)（三）高效液

20、相色譜法（三）高效液相色譜法 維生素維生素D D是一類抗佝僂病維生素的總稱。目是一類抗佝僂病維生素的總稱。目前已知的維生素前已知的維生素D D類物質(zhì)至少有十種之多，它們類物質(zhì)至少有十種之多，它們都是甾醇的衍生物。中國藥典主要收載有維生素都是甾醇的衍生物。中國藥典主要收載有維生素D D2 2、D D3 3原料藥；維生素原料藥；維生素D D2 2膠丸和注射劑；維生素膠丸和注射劑；維生素D D，注射劑。注射劑。USP(24)USP(24)收載有片劑、膠囊、口服液等收載有片劑、膠囊、口服液等劑型。劑型。BP(2000)BP(2000)收載的劑型有片劑、口服液、注收載的劑型有片劑、口服液、注射液以及鈣與

21、維生素射液以及鈣與維生素D D2 2、D D3 3制成的復(fù)方片劑制成的復(fù)方片劑。 第四節(jié)第四節(jié) 維生素維生素D D的分析的分析( (一一) )結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu) 維生素維生素D D2 2為為9 9，10-10-開環(huán)麥角甾開環(huán)麥角甾5 5，7 7，10(19)10(19)，22-22-四烯四烯3 3-醇，又名醇，又名骨化醇骨化醇或或麥角骨化醇麥角骨化醇。 維生素維生素D D3 3為為9 9，10-10-開環(huán)膽甾開環(huán)膽甾-5-5，7 7，10(19)10(19)三烯三烯-3-3-醇，又名醇，又名膽骨化醇膽骨化醇。 兩者的化學(xué)結(jié)構(gòu)十分相似，其差別僅是維兩者的化學(xué)結(jié)構(gòu)十分相似，其差別僅是維生素生素D D2 2比

22、維生素比維生素D D3 3在側(cè)鏈上多一個雙鍵，在側(cè)鏈上多一個雙鍵，C C2424上上多一個甲基。多一個甲基。 一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)HHCH2CH3CH3CH3CH3CH3HHOVD2CH3CH3HCH2CH3CH3HHOH222324VD3( (二二) )性質(zhì)性質(zhì) 1 1、性狀、性狀 維生素維生素D D2 2、D D3 3均為無色針狀結(jié)晶或白色結(jié)晶均為無色針狀結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉末；無臭，無味；遇光或空氣均易變質(zhì)。性粉末；無臭，無味；遇光或空氣均易變質(zhì)。 2 2、溶解性、溶解性 維生素維生素D D2 2在氯仿中極易溶解，在乙醇、丙在氯仿中極易溶解，在乙醇、丙酮或乙醚中易溶；維生素酮或乙醚

23、中易溶；維生素D D3 3在乙醇、丙酮、氯仿或乙醚中在乙醇、丙酮、氯仿或乙醚中極易溶解；二者均在植物油中略溶，在水中不溶。極易溶解；二者均在植物油中略溶，在水中不溶。 3 3、不穩(wěn)定性、不穩(wěn)定性 維生素維生素D D2 2、D D3 3因含有多個烯鍵，所以極因含有多個烯鍵，所以極不穩(wěn)定，遇光或空氣及其他氧化劑均發(fā)生氧化而變質(zhì)，使不穩(wěn)定，遇光或空氣及其他氧化劑均發(fā)生氧化而變質(zhì)，使效價降低，毒性增強(qiáng)。本品對酸也不穩(wěn)定。效價降低，毒性增強(qiáng)。本品對酸也不穩(wěn)定。 4 4、旋光性、旋光性 維生素維生素D D2 2具有具有6 6個手性碳原子，而維生素個手性碳原子，而維生素D D3 3有有5 5個手性碳原子，所

24、以二者均具有旋光性。個手性碳原子，所以二者均具有旋光性。 5 5、顯色反應(yīng)、顯色反應(yīng) 本品的氯仿溶液，加醋酐與硫酸，初本品的氯仿溶液，加醋酐與硫酸，初顯黃色，漸變紅色，迅即變?yōu)樽仙?，最后變?yōu)榫G色。顯黃色，漸變紅色，迅即變?yōu)樽仙?，最后變?yōu)榫G色。本反應(yīng)為甾類化合物的共有反應(yīng)。本反應(yīng)為甾類化合物的共有反應(yīng)。6 6紫外吸收特性紫外吸收特性 取本取本品品，加無水乙醇溶解并定量，加無水乙醇溶解并定量稀稀釋釋制成每制成每10ml10ml中中約約含含10ug10ug的溶液。照分光光度法，的溶液。照分光光度法，在在265nm265nm的波的波長處測長處測定吸收度，定吸收度，維維生素生素D D2 2的吸收系數(shù)的吸

25、收系數(shù)為為460-490460-490；維維生素生素D D3 3的吸收系數(shù)的吸收系數(shù)為為465-495465-495。( (一一) )顯顯色反色反應(yīng)應(yīng) 1 1、與醋與醋酐酐濃濃硫酸反硫酸反應(yīng)應(yīng) 取取維維生素生素D2D2或或D3D3約約0.5mg，加加氯氯仿仿5m15m1溶解后，加醋溶解后，加醋酐酐0.3ml與硫酸與硫酸0.1ml，振，振搖搖，維維生生素素D2D2初初顯顯黃色，黃色，漸變紅漸變紅色，迅即色，迅即變?yōu)樽優(yōu)樽仙?，最后成紫色，最后成綠綠色。色。維維生素生素D3D3初初顯顯黃色，黃色，漸變紅漸變紅色，迅即色，迅即變?yōu)樽優(yōu)樽仙?、紫色、藍(lán)綠藍(lán)綠色，色，最后最后變?yōu)榫G變?yōu)榫G色。色。 2 2、與

26、三與三氯氯化化銻銻反反應(yīng)應(yīng) 取本取本品品適量適量( (約約10001000單單位位) )，加，加1 1，2-2-二二氯氯乙乙烷烷1m11m1溶解，加三溶解，加三氯氯化化銻試銻試液液4ml4ml，溶液即，溶液即顯顯橙橙紅紅色，逐色，逐漸變?yōu)闈u變?yōu)榉鄯奂t紅色。色。 3 3、其它其它顯顯色反色反應(yīng)應(yīng) 維維生素生素D D與三與三氯氯化化鐵鐵反反應(yīng)應(yīng)呈橙黃色，呈橙黃色，與二與二氯氯丙醇和乙丙醇和乙酰氯試劑酰氯試劑反反應(yīng)顯綠應(yīng)顯綠色，均可用于鑒別，但色，均可用于鑒別，但專屬性不強(qiáng)。專屬性不強(qiáng)。 二、鑒別試驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn)( (二二) )比旋度鑒別比旋度鑒別 取維生素取維生素D2D2，精密稱定，加無水乙醇溶解

27、并定量稀釋制，精密稱定，加無水乙醇溶解并定量稀釋制成每成每1m11m1中含中含40mg40mg的溶液，依法測定，比旋度為的溶液，依法測定，比旋度為+102.5+102.5。至至+107.5+107.5。；維生素；維生素D3D3加無水乙醇溶解并定量稀釋制成每加無水乙醇溶解并定量稀釋制成每1ml1ml中含中含5mg5mg的溶液，依法測定，比旋度為十的溶液，依法測定，比旋度為十105105。至至+112+112。( (二二者均應(yīng)于容器開啟后者均應(yīng)于容器開啟后30min30min內(nèi)取樣，并在溶液配制后內(nèi)取樣，并在溶液配制后30min30min內(nèi)測定內(nèi)測定) )。 ( (三三) )其他鑒別方法其他鑒別方

28、法 維生素維生素D2D2、D3D3可用薄層色譜法、可用薄層色譜法、HPLCHPLC法和制備衍生物測法和制備衍生物測熔點(diǎn)進(jìn)行鑒別。此外，亦可通過其紫外、紅外吸收光譜的熔點(diǎn)進(jìn)行鑒別。此外，亦可通過其紫外、紅外吸收光譜的特征加以鑒別。特征加以鑒別。( (四四) )維生素維生素D D2 2、D D3 3的區(qū)別反應(yīng)的區(qū)別反應(yīng) 取維生素取維生素D10mgD10mg，溶于，溶于9696乙醇乙醇10ml10ml中。取此液中。取此液0.1m10.1m1，加乙醇，加乙醇1ml1ml和和8585硫酸硫酸5ml5ml。維生素。維生素D D2 2顯顯紅色紅色，在在570nm570nm波長處有最大吸收；維生素波長處有最大

29、吸收；維生素D D3 3顯顯黃色黃色，在，在495nm495nm波長處有最大吸收。波長處有最大吸收。 此反應(yīng)也用于此反應(yīng)也用于D D2 2和和D D3 3的含量測定。的含量測定。( (一一) )麥角甾醇的檢查麥角甾醇的檢查( (二二) )前維生素前維生素D D的光照產(chǎn)物的光照產(chǎn)物三、雜質(zhì)檢查（略）三、雜質(zhì)檢查（略） ( (一一) )維生素維生素D D測定法測定法（二）討論（二）討論四、含量測定四、含量測定（略）（略） 維生素維生素D D的含量測定方法各國藥典各異。的含量測定方法各國藥典各異。USP(24)USP(24)關(guān)于維生素關(guān)于維生素D D的測定方法有化學(xué)法、色譜法和微生物的測定方法有化學(xué)

30、法、色譜法和微生物法；法；BP(2000)BP(2000)有化學(xué)法、光譜法和色譜法；而中國有化學(xué)法、光譜法和色譜法；而中國藥典采用藥典采用正相高效液相色譜法正相高效液相色譜法測定。測定。 維生素維生素E E（消旋（消旋-生育酚醋酸酯）生育酚醋酸酯）苯并二氫吡喃醇苯并二氫吡喃醇OHO第五節(jié)第五節(jié) 維生素維生素E E的分析的分析OR1HOR2CH3名名 稱稱R R1 1R R2 2相對活性相對活性-生育酚生育酚-生育酚生育酚 - -生育酚生育酚 - -生育酚生育酚CHCH3 3CHCH3 3H HH HCHCH3 3H HCHCH3 3H H1.01.00.50.50.20.20.10.1*生物效

31、價生物效價 右旋體右旋體 ： 消旋體消旋體 = 1.4 = 1.4 ：1010（天然品）（天然品） （合成品）（合成品）CH3COOCH3CH3CH3CH3CH3CH3H3CH3COdldl生育酚醋酸酯生育酚醋酸酯（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)苯環(huán)苯環(huán) + + 二氫吡喃環(huán)二氫吡喃環(huán) + + 飽和烴鏈飽和烴鏈1 1、易溶于有機(jī)溶劑，不溶于水、易溶于有機(jī)溶劑，不溶于水2 2、UVUV3 3、酯鍵、酯鍵 易水解易水解 OorOHHVitE醌醌型型化化合合物物生生育育酚酚1 1、硝酸反應(yīng)、硝酸反應(yīng) OHNO3VitE生生育育紅紅生生育育酚酚7515橙紅色橙紅色（二）鑒別（二）鑒別2 2、三氯化鐵聯(lián)吡

32、啶反應(yīng)、三氯化鐵聯(lián)吡啶反應(yīng)紅紅色色生生育育醌醌對對生生育育酚酚聯(lián)聯(lián)吡吡啶啶 2FeKOHFeVitE3O3 3、紫外光譜法、紫外光譜法4 4、薄層色譜法、薄層色譜法5 5、其他方法、其他方法（三）雜質(zhì)檢查（三）雜質(zhì)檢查1 1、酸度、酸度2 2、生育酚生育酚 硫酸鈰滴定液（硫酸鈰滴定液（0.01mol/L0.01mol/L）二苯胺（亮黃二苯胺（亮黃灰紫）灰紫）生生育育醌醌對對生生育育酚酚 3422CeCe（1 1）原理：原理：利用游離生育酚的利用游離生育酚的還原性還原性，將硫酸鈰還原成硫酸亞鈰將硫酸鈰還原成硫酸亞鈰（2 2）試劑）試劑（四）含量測定（四）含量測定1 1、GCGC法法（1 1） 選

33、擇性好選擇性好靈敏度高靈敏度高速度快速度快分離效能好分離效能好揮發(fā)性低、不穩(wěn)定、揮發(fā)性低、不穩(wěn)定、極性強(qiáng)極性強(qiáng)衍生化易衍生化易受樣品蒸氣壓限制受樣品蒸氣壓限制本本 章章 小小 結(jié)結(jié)1 1、VitAVitA：掌握：掌握三氯化銻鑒別反應(yīng)的原理、三氯化銻鑒別反應(yīng)的原理、 UVUV法含量測定的原理及兩種測定方法的法含量測定的原理及兩種測定方法的區(qū)別區(qū)別。3 3、 VitB1VitB1：掌握硫色素反應(yīng)（鑒別及含量：掌握硫色素反應(yīng)（鑒別及含量測定）的原理。測定）的原理。3 3、 VitCVitC：掌握其結(jié)構(gòu)特征（還原性）、掌握其結(jié)構(gòu)特征（還原性）、碘量法含量測定的原理及操作注意事項(xiàng)。碘量法含量測定的原理及

34、操作注意事項(xiàng)。4、VitE：掌握硝酸反應(yīng)的原理。：掌握硝酸反應(yīng)的原理。藥品生產(chǎn)的主要環(huán)節(jié)w 反應(yīng)分離制劑 構(gòu)成了藥品生產(chǎn)的主要工藝環(huán)節(jié)。w 原料在反應(yīng)器內(nèi)進(jìn)行反應(yīng)，通過分離等方法獲得原料藥，原料藥經(jīng)過一定的制劑工藝（如混合、造粒、干燥、壓片、包衣、包裝等）即成為藥品。 合格的藥品不是檢驗(yàn)出來的，合格的藥品不是檢驗(yàn)出來的，而是生產(chǎn)出來的。而是生產(chǎn)出來的。 生產(chǎn)的藥品質(zhì)量是否合格，與生產(chǎn)過程中的每一個環(huán)節(jié)均密切相關(guān)，除控制原料質(zhì)量外，制藥過程關(guān)鍵工藝的控制是影響藥品質(zhì)量的重要因素，對其進(jìn)行監(jiān)控、控制對于保證藥品質(zhì)量至關(guān)重要。制藥過程分析的新革命，生產(chǎn)過程的分析和控制常常依靠操作人員的經(jīng)驗(yàn)。，制藥過

35、程控制自動化程度越來越高，原來由人工控制的操作逐漸被自動化設(shè)備所代替。 隨著自動化程度的不斷提高，對動態(tài)的制藥過程進(jìn)行化學(xué)成分的瞬時追蹤，在線監(jiān)測和優(yōu)化控制已經(jīng)成為現(xiàn)代制藥工業(yè)的迫切要求。制藥過程分析方法分類按照分析測試的程序不同，應(yīng)用于制藥的過程分析按照分析測試的程序不同，應(yīng)用于制藥的過程分析技術(shù)分為以下類型：技術(shù)分為以下類型：w離線分析（離線分析（off-line）即從生產(chǎn)現(xiàn)場采樣后帶回實(shí)即從生產(chǎn)現(xiàn)場采樣后帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理分析。驗(yàn)室進(jìn)行處理分析。w近線分析（近線分析（at-line）也叫現(xiàn)場分析，人工采樣后也叫現(xiàn)場分析，人工采樣后在現(xiàn)場（接近生產(chǎn)線的地方）進(jìn)行分析。在現(xiàn)場（接近生產(chǎn)線的地

36、方）進(jìn)行分析。離線分析和近線分析的工作方式實(shí)質(zhì)上跟一般的實(shí)驗(yàn)室分析離線分析和近線分析的工作方式實(shí)質(zhì)上跟一般的實(shí)驗(yàn)室分析工作沒多大的區(qū)別，是制藥工業(yè)傳統(tǒng)分析方式，他們的分析工作沒多大的區(qū)別，是制藥工業(yè)傳統(tǒng)分析方式，他們的分析結(jié)果都只能說明生產(chǎn)過程結(jié)果都只能說明生產(chǎn)過程“過去過去”某一時間的狀況，提供的某一時間的狀況，提供的滯后的信息。滯后的信息。制藥過程分析方法分類w連線分析（連線分析（on-line）也稱側(cè)線分析。指依靠自動也稱側(cè)線分析。指依靠自動采樣系統(tǒng)，直接從生產(chǎn)流程抽取樣品，自動輸入分采樣系統(tǒng)，直接從生產(chǎn)流程抽取樣品，自動輸入分析儀器中進(jìn)行連續(xù)或間歇分析。析儀器中進(jìn)行連續(xù)或間歇分析。w在

37、線分析（在線分析（in-line）也稱內(nèi)線分析。樣品不用取也稱內(nèi)線分析。樣品不用取出，將監(jiān)測探頭插入生產(chǎn)流程中直接在生產(chǎn)線上進(jìn)出，將監(jiān)測探頭插入生產(chǎn)流程中直接在生產(chǎn)線上進(jìn)行實(shí)時連續(xù)的分析。行實(shí)時連續(xù)的分析。連線分析和在線分析使真正的實(shí)時分析成為可能，它所提供連線分析和在線分析使真正的實(shí)時分析成為可能，它所提供的分析信息直接反映了當(dāng)時的生產(chǎn)狀態(tài)。的分析信息直接反映了當(dāng)時的生產(chǎn)狀態(tài)。制藥過程在線分析的特點(diǎn)制藥過程在線分析的基本要求：快速、簡便、易于制藥過程在線分析的基本要求：快速、簡便、易于重復(fù)重復(fù)。制藥過程質(zhì)量監(jiān)測與一般藥物分析不同，快速是第一要求。過程監(jiān)測要求在較短時間內(nèi)迅速獲取分析結(jié)果，用于

38、監(jiān)測藥物生產(chǎn)工藝過程是否順利進(jìn)行以及產(chǎn)品的質(zhì)量狀況，以控制生產(chǎn)。在保證快速的條件下，準(zhǔn)確度可以在允許限度內(nèi)適當(dāng)降低。在線分析儀器 在線分析儀器是指能對試樣的化學(xué)成分性質(zhì)及含量進(jìn)行在線自動測量的一類儀器。在線分析儀器的特點(diǎn)：w有自動取樣和試樣品預(yù)處理系統(tǒng)，無需人工取樣和處理；w完全自動化，具有自動檢錯、報警和校正功能。w儀器穩(wěn)定性要好，要禁受高溫、高濕、腐蝕性、振動等影響，以利于長期使用。過程分析儀器的組成w通常由五部分組成。a) 取樣裝置與預(yù)處理系統(tǒng)b) 檢測器c) 信號處理系統(tǒng)d) 結(jié)果輸出e) 整機(jī)自動控制系統(tǒng) 分析儀器必須快速地分析測試信號進(jìn)行響應(yīng)，自動地處理和存貯數(shù)據(jù)及其結(jié)果；尤其是在

39、過程控制分析中，還要求分析儀器能快速地反饋測試結(jié)果，為生產(chǎn)控制提供依據(jù)。制藥過程分析儀器制藥過程分析儀器分類可依據(jù)三種情況。1. 按照測量的參數(shù)數(shù)目可分為單參數(shù)和多參數(shù)在線分析儀器。2. 按照檢測原理可分為色譜式、光譜式、電化學(xué)式、熱化學(xué)式等。3. 按照檢測儀器的使用方式可分為定點(diǎn)式，移動式和潛入式三類。制藥過程分析技術(shù)在線近紅外光譜分析(Near Infrared，NIR)測定原理分子中C-H,N-H,O-H,S-H等含氫基團(tuán)在近紅外光（780-2526nm）作用下有特征吸收。 NIR是一種間接測定方法，需先建立標(biāo)準(zhǔn)樣品近紅外光譜與待測組分含量的校正模型，然后將待測樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)代入校

40、正模型，計算出其中待測組分的含量。w 在NIRS分析測試中，首先需要依據(jù)已知樣品化學(xué)信息，用多元校正方法（多元線性回歸法、主成分分析法、偏最小二乘法、人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)法等）建立校正模型，然后測定未知樣品的NIRS，用建立的校正模型處理未知樣品的NIRS數(shù)據(jù)，獲取其化學(xué)組成信息。NIR分析技術(shù)的特點(diǎn)：w 操作簡便、分析快速，定量精度高。相對誤差低于0.5%w 不破壞分析樣品，不使用化學(xué)試劑，不污染環(huán)境。w 可以進(jìn)行原位測量和遠(yuǎn)距離分析，可使用光纖傳輸信號，適宜于在線的過程控制分析。w 不需要對樣品預(yù)處理，直接對顆粒狀、粉末狀、糊狀、不透明狀試樣進(jìn)行分析。w 只能做常量分析 檢測極限為0.1%在線NI

41、R技術(shù)的應(yīng)用w對生產(chǎn)原料質(zhì)量的評價 通過光導(dǎo)纖維將傳感探頭與NIR分析儀連接，可在原料進(jìn)入生產(chǎn)車間時，立刻分析檢測每種每批生產(chǎn)原料的質(zhì)量。w合成反應(yīng)的終點(diǎn)控制 應(yīng)用于藥物合成的在線控制中，把探頭直接插入反應(yīng)液中，確定反應(yīng)終點(diǎn)。在線NIR技術(shù)的應(yīng)用w 控制粉末混合均勻性 采用NIRS技術(shù)，將近紅外光纖探針插入攪拌機(jī)的旋轉(zhuǎn)軸，得到相應(yīng)光譜，應(yīng)用編輯的程序收集相關(guān)數(shù)據(jù)，反映粉末混合程度。w 中藥活性成分提取過程的控制 楊南林等以黃連提取物為例，采用光纖NIR透射光譜技術(shù)，建立了中藥黃連大孔吸附樹脂純化過程的分析方法，測定了洗脫物中多個化學(xué)組分的濃度，實(shí)現(xiàn)了中藥純化過程的在線檢測。楊南林,程翼宇, 瞿

42、海斌. 一種用于中藥純化過程的近紅外光譜分析新方法J. 化學(xué)學(xué)報,2OO3, 61(5): 742747.在線NIR技術(shù)的應(yīng)用w 微生物發(fā)酵過程控制 微生物發(fā)酵過程是一個復(fù)雜的生化過程，受多種因素影響，因此，在線檢測整個發(fā)酵過程對優(yōu)化生產(chǎn)過程極為重要。利用在線NIR技術(shù)，通過插入反射光纖探頭的方式，對發(fā)酵過程進(jìn)行監(jiān)測，實(shí)時準(zhǔn)確地測定各種成分在反應(yīng)過程中的變化，為優(yōu)化操作條件提供了信息。w NIR技術(shù)倍受過程分析青睞在線色譜技術(shù)w 色譜技術(shù)具有適用范圍廣，分離效率高，流動相選擇范圍廣，不受分析對象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，樣品預(yù)處理簡單，檢測靈敏等特點(diǎn)。w HPLC、GC與質(zhì)譜、核磁共振、固相微萃取等技術(shù)用，使其成為在藥物研究、質(zhì)量檢定、藥品生產(chǎn)和臨床檢測中的最主要的分離分析工具。w 過程色譜通過多柱