液相色譜法的條件試驗(yàn)

1、液相色譜法的條件試驗(yàn) 孟照明 20目錄實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)原理儀器與試劑實(shí)驗(yàn)步驟儀器清洗（結(jié)束工作）（結(jié)束工作）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆丈V分析的原理掌握高效液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)和工作原理掌握SY-8100高效液相色譜儀的基本操作步驟掌握HPLC條件試驗(yàn)的方法以及分離條件的確定二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理本次實(shí)驗(yàn)采用ODS-C18色譜柱，以甲醇+水混合液為流動(dòng)相，根據(jù)混合物中萘、聯(lián)苯和菲在固定相與流動(dòng)相間分配性質(zhì)的不同，進(jìn)行分離。不同比例的甲醇+水混合液為流動(dòng)相，流動(dòng)相的極性發(fā)生改變，因此混合液的分離條件也發(fā)生了改變，選擇能將混合液中各組分能充分分離并且相對(duì)分析時(shí)間短的條件，綜合確定HPLC法分析萘、

2、聯(lián)苯、菲的分析條件，完成對(duì)混合液的分析。檢測(cè)器采用紫外分光（UV）檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。三、儀器與試劑三、儀器與試劑儀器：儀器： SY-8100高效液相色譜儀1臺(tái) KQ-50B超聲波清洗器1臺(tái) AP-01P真空泵1臺(tái) 過濾裝置1套 微量注射器50L1支 容量瓶50mL7只藥品：藥品： 萘（G.R.）、聯(lián)苯（G.R.）、菲（G.R.）、甲醇（G.R.）、二次蒸餾水四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟流動(dòng)相的準(zhǔn)備流動(dòng)相的準(zhǔn)備1、流動(dòng)相的過濾 安裝抽濾裝置，選用有機(jī)相過濾膜，過濾試劑甲醇；選用無(wú)機(jī)相過濾膜，過濾二次蒸餾水。2、流動(dòng)相的脫氣 將盛有過濾好甲醇、二次蒸餾水的試劑瓶分別放于超聲波清洗器中，進(jìn)行

3、脫氣處理。儀器的準(zhǔn)備儀器的準(zhǔn)備1、更換流動(dòng)相 將A泵的輸液管放入處理好的甲醇試劑瓶中；B泵的輸液管放入處理好的二次蒸餾水試劑瓶中。2、分別排除A、B兩個(gè)泵輸液管中的氣泡3、開啟高壓泵A、高壓泵B、UV檢測(cè)器、混合器的電源，打開工作站 分析步驟分析步驟1、分別設(shè)置兩個(gè)高壓泵的流量，使總流量為F1.00mL/min，分別啟動(dòng)兩泵2、待基線穩(wěn)定后，完成標(biāo)樣的分析，記錄分析所獲得的各組分的保留時(shí)間、理論塔板數(shù)、分離度。數(shù)據(jù)填表3、選擇最佳流動(dòng)相配比，調(diào)整A、B兩泵的流量。待基線穩(wěn)定后吸取標(biāo)樣，完成分析后建立組分表，再完成試樣的分析，測(cè)得試樣中萘、聯(lián)苯和菲的含量，完成實(shí)驗(yàn) 2013年11月19日第四組實(shí)

4、驗(yàn)數(shù)據(jù)保留時(shí)間分離度理論塔板次數(shù)萘聯(lián)苯菲萘聯(lián)苯菲萘聯(lián)苯菲04.314.555.1601.413.381545415863163230.024.434.725.4201.673.611564415227152230.044.755.165.9902.193.891544215275150470.064.925.446.4302.444.151388813132139150.085.367.2103.014.581324313090143500.10 5.616.517.9903.64.981319912896135320.126.267.519.3404.455.4713196135771437

5、905101520251234567保留時(shí)間組成系列4系列3系列2系列10246810121234567分離度組成系列3系列2系列1050001000015000200002500030000350004000045000500001234567理論塔板數(shù)組成系列3系列2系列1結(jié)論：根據(jù)上述數(shù)據(jù)和折線圖分析確定最適宜的為第四組數(shù)據(jù)。根據(jù)最適宜條件測(cè)出以下數(shù)據(jù)：保留時(shí)間保留時(shí)間分離度分離度理論塔板理論塔板組分標(biāo)樣組分標(biāo)樣5.165.165.745.746.766.760 02.852.854.414.41163231632315535155351663516635峰高峰高峰面積峰面積結(jié)果結(jié)果萘萘聯(lián)苯聯(lián)苯菲菲萘萘聯(lián)苯聯(lián)苯菲菲萘萘聯(lián)苯聯(lián)苯菲菲未知試樣未知試樣 17145117145148635048635020239120239110985311098531 349777634977761630711630710.03530.03530.03780.03780.01010.0101五、儀器的清理